抗体药物缀合物制造技术

本申请公开了抗P‑钙黏着蛋白抗体、其抗原结合片段和所述抗体或抗原结合片段的抗体药物缀合物。本发明专利技术还涉及使用抗体、抗原结合片段和抗体药物缀合物治疗癌症的方法。本文还公开了产生抗体、抗原结合片段和抗体药物缀合物的方法和将抗体和抗原结合片段作为诊断试剂使用的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体药物缀合物序列表本申请含有已经通过电子方式以ASCII格式提交并因而通过引用的方式完整并入的序列表。在2015年11月12日创建的所述ASCII副本命名为PAT056506-WO-PCT_SL.txt并且大小是146,966比特。
本专利技术总体上涉及抗P-钙黏着蛋白抗体、抗体片段、抗体药物缀合物和它们治疗癌症的用途。
技术介绍
P-钙黏着蛋白经典的钙黏着蛋白代表一个在介导钙依赖性细胞-细胞接触的黏着型连接中表达的细胞黏附分子家族。胎盘钙黏着蛋白(P-钙黏着蛋白；也称作1型钙黏着蛋白3或“CDH3”)在正常组织中具有受限制的表达，但是已知在几种组织的未分化或低分化细胞类型(包括皮肤、食道、肺和口腔的基底上皮细胞)中表达(参见，例如，Albergaria等人,Int.J.Dev.Biol.55:811-822(2011))。P-钙黏着蛋白的结构由3个不同结构域组成：一个含有五个串联的钙黏着蛋白重复序列的胞外结构域(ECD)、一个跨膜结构域；和一个含有连环蛋白结合结构域的胞内尾。ECD介导多个P-钙黏着蛋白分子之间的顺式和反式相互作用，而连环蛋白结合结构域将P-钙黏着蛋白连接至蛋白质如p120连环蛋白并因此连接至细胞细胞骨架元件(参见，例如，Wu等人,PNAS107:17592-7(2010)。P-钙黏着蛋白和癌症还已知P-钙黏着蛋白(也称作“Pcad”、“PCad”、“P-Cad”或CDH3)在众多恶性肿瘤(包括乳腺癌、胃癌、子宫内膜癌、头颈部癌和结直肠癌等)中过量表达。与其中P-钙黏着蛋白表达水平低或不存在的病例相比，P-钙黏着蛋白在某些乳腺肿瘤、子宫内膜肿瘤、卵巢肿瘤、结直肠肿瘤和膀胱肿瘤中的过量表达还已经与预后更差相关。在乳腺癌中，P-钙黏着蛋白在高等级侵袭性癌中频繁过量表达并且是基底样肿瘤的可靠标志物(参见，例如，Paredes等人,Br.Can.Res.9:214-226(2007)；Sanders等人,Int.J.Can.79:573-579(1998)；Albergaria等人,Int.J.Dev.Biol.55:811-822(2011)；Sousa等人,Histol.Histopathol.25:963-975(2010))。在某些癌类型如乳腺癌和卵巢癌中，已知P-钙黏着蛋白促进肿瘤细胞运动性、侵袭性和转移(参见，例如，Cheung等人,Oncogene30:2964-74(2011)；Ribeiro等人,Oncogene29:392-402(2010))。已知多种癌相关过程促进P-钙黏着蛋白mRNA和蛋白质的表达。肿瘤抑制基因BRCA1因突变或表达丢失而失活已经与乳腺癌细胞系样本和患者样本中增加的P-钙黏着蛋白表达相关。还已知转录因子C-EBPβ和抗雌激素ICI182780(氟维司群)失调P-钙黏着蛋白表达并在肿瘤细胞中诱导其上调，CDH3启动子借助其他过程的低甲基化也是如此。在肺泡横纹肌肉瘤中，嵌合致瘤性转录因子PAX3-FOXOA1和PAX7-FOXOA1(因易位产生)直接诱导P-钙黏着蛋白表达，导致肿瘤侵入性增加(参见，例如，Albergaria等人,Int.J.Dev.Biol.55:811-822(2011)；Thuault等人,Oncogene15:1474-86(2012)；Ames等人,Clin.Can.Res.11；4003-11(2005)；Gorski等人,Br.Can.Res.Treat.122:721-31(2010)；Paredes等人,Clin.Can.Res.11:5869-5877(2005)；Albergaria等人,HumanMol.Gen.19:2554-2566(2010)。抗体药物缀合物抗体药物缀合物(“ADC”)已经用于治疗癌症中细胞毒性剂的局部递送(参见例如，Lambert,Curr.OpinionInPharmacology5:543-549,2005)。ADC允许定向递送药物部分，其中可以实现最大效力，同时毒性最小。由于更多的ADC显示有前景的临床结果，因此开发新治疗药用于癌疗法的需求增加。另外，并非产生治疗有效的针对已知癌症靶的ADC的全部尝试已经取得成功。可能影响ADC的治疗有效性的因素的例子包括亲和力、抗体缀合能力、接头的可切割性或稳定性；抗体-药物缀合物的稳定性、抗体药物缀合物聚集的倾向性和缀合至每种抗体的药物/负载分子的比率(“DAR”或“药物抗体比”)。聚集和稳定性缺乏可增加临床环境下抗体药物缀合物的不良反应的可能性、降低效力以及增加产生ADC的成本。因此需要治疗有效的ADC分子。专利技术简述本申请公开了与人P-钙黏着蛋结合的抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段与P-钙黏着蛋白在选自SEQIDNO:126的位置124、125、151、153、154、155、156、159、160、161、162、163、168、170、171和172处的氨基酸中的一个或多个残基结合。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段与人P-钙黏着蛋在SEQIDNO:126的位置124、125、151、153、154、155、156、159、160、161、162、163、168、170、171和172处的氨基酸结合。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与人P-钙黏着蛋白在选自SEQIDNO:126的位置124、151、153-156和172中的一个或多个氨基酸残基处结合的重链可变区。在又一个实施方案中，重链可变区包含人P-钙黏着蛋的重链结合互补位，所述重链结合互补位包含选自SEQIDNO:128的位置52、54、56、60、65、105或107中的一个或多个氨基酸残基。在又一个实施方案中，抗体包含抗体包含与人P-钙黏着蛋白在选自SEQIDNO:126的位置124、125、155、156、159-163、168、170和171中的一个或多个氨基酸残基处结合的轻链可变区。在又一个实施方案中，人P-钙黏着蛋的轻链可变区结合互补位包含选自SEQIDNO:129的位置1、2、27、28、30、68、92、93或94中的一个或多个氨基酸残基。在一个具体实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含如上文讨论的重链可变区和轻链可变区。在其他实施方案中，本申请公开了结合人P-钙黏着蛋结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：a)包含SEQIDNO:1的VHCDR1、SEQIDNO:2的VHCDR2和SEQIDNO:3的VHCDR3的重链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；包含SEQIDNO:11的VLCDR1、SEQIDNO:12的VLCDR2和SEQIDNO:13的VLCDR3的轻链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；b)包含SEQIDNO:21的VHCDR1、SEQIDNO:22的VHCDR2和SEQIDNO:23的VHCDR3的重链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；包含SEQIDNO:31的VLCDR1、SEQIDNO:32的VLCDR2和SEQIDNO:33的VLCDR3的轻链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；c)包含SEQIDNO:41的VHCDR1、SEQIDNO:42的V本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗体或其抗原结合片段，与人P‑钙黏着蛋白在选自SEQ ID NO:126的位置124、125、151、153、154、155、156、159、160、161、162、163、168、170、171和172处的氨基酸中的一个或多个残基结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.11.14 US 62/079,9421.抗体或其抗原结合片段，与人P-钙黏着蛋白在选自SEQIDNO:126的位置124、125、151、153、154、155、156、159、160、161、162、163、168、170、171和172处的氨基酸中的一个或多个残基结合。2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体与人P-钙黏着蛋白在SEQIDNO:126的位置124、125、151、153、154、155、156、159、160、161、162、163、168、170、171和172处的氨基酸结合。3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含与人P-钙黏着蛋白在选自SEQIDNO:126的位置124、151、153-156和172中的一个或多个氨基酸残基处结合的重链可变区。4.根据权利要求3所述的抗体，其中人P-钙黏着蛋白的重链可变区结合互补位包含选自SEQIDNO:128的位置52、54、56、60、65、105或107中的一个或多个氨基酸残基。5.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含与人P-钙黏着蛋白在选自SEQIDNO:126的位置124、125、155、156、159-163、168、170和171中的一个或多个氨基酸残基处结合的轻链可变区。6.根据权利要求5所述的抗体，其中人P-钙黏着蛋白的轻链可变区结合互补位包含选自SEQIDNO:129的位置1、2、27、28、30、68、92、93或94中的一个或多个氨基酸残基。7.抗体或其抗原结合片段，包含根据权利要求3所述的重链区和根据权利要求5所述的轻链可变区。8.结合P-钙黏着蛋白的抗体或其抗原结合片段，其包含：a.包含SEQIDNO:1的VHCDR1、SEQIDNO:2的VHCDR2和SEQIDNO:3的VHCDR3的重链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；包含SEQIDNO:11的VLCDR1、SEQIDNO:12的VLCDR2和SEQIDNO:13的VLCDR3的轻链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；b.包含SEQIDNO:21的VHCDR1、SEQIDNO:22的VHCDR2和SEQIDNO:23的VHCDR3的重链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；包含SEQIDNO:31的VLCDR1、SEQIDNO:32的VLCDR2和SEQIDNO:33的VLCDR3的轻链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；c.包含SEQIDNO:41的VHCDR1、SEQIDNO:42的VHCDR2和SEQIDNO:43的VHCDR3的重链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；包含SEQIDNO:51的VLCDR1、SEQIDNO:52的VLCDR2和SEQIDNO:53的VLCDR3的轻链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；d.包含SEQIDNO:61的VHCDR1、SEQIDNO:62的VHCDR2和SEQIDNO:63的VHCDR3的重链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；包含SEQIDNO:71的VLCDR1、SEQIDNO:72的VLCDR2和SEQIDNO:73的VLCDR3的轻链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；e.包含SEQIDNO:81的VHCDR1、SEQIDNO:82的VHCDR2和SEQIDNO:83的VHCDR3的重链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；包含SEQIDNO:91的VLCDR1、SEQIDNO:92的VLCDR2和SEQIDNO:93的VLCDR3的轻链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；或f.包含SEQIDNO:101的VHCDR1、SEQIDNO:102的VHCDR2和SEQIDNO:103的VHCDR3的重链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定；包含SEQIDNO:111的VLCDR1、SEQIDNO:112的VLCDR2和SEQIDNO:113的VLCDR3的轻链可变区，其中CDR根据Kabat定义限定。9.结合P-钙黏着蛋白的抗体或其抗原结合片段，其包含：a.包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的重链可变区(VH)，和包含SEQIDNO:17的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；b.包含SEQIDNO:27的氨基酸序列的重链可变区(VH)，和包含SEQIDNO:37的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；c.包含SEQIDNO:47的氨基酸序列的重链可变区(VH)，和包含SEQIDNO:57的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；d.包含SEQIDNO:67的氨基酸序列的重链可变区(VH)，和包含SEQIDNO:77的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；e.包含SEQIDNO:87的氨基酸序列的重链可变区(VH)，和包含SEQIDNO:97的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或f.包含SEQIDNO:107的氨基酸序列的重链可变区(VH)，和包含SEQIDNO:117的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。10.结合P-钙黏着蛋白的抗体或其抗原结合片段，其包含：a.包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:19的氨基酸序列的轻链；b.包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:39的氨基酸序列的轻链；c.包含SEQIDNO:49的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:59的氨基酸序列的轻链；d.包含SEQIDNO:69的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:79的氨基酸序列的轻链；e.包含SEQIDNO:89的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:99的氨基酸序列的轻链；f.包含SEQIDNO:109的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:119的氨基酸序列的轻链。11.抗体，其与权利要求8-10的任一项中所述的抗体结合至人P-钙黏着蛋白的相同的表位或与权利要求8-10的任一项中所述的抗体竞争结合人P-钙黏着蛋白。12.抗体药物缀合物，其包含式Ab—(L—(D)m)n或其可药用盐；其中Ab是根据权利要求1至11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；L是接头；D是药物部分；m是从1至8的整数；并且n是从1至10的整数。13.权利要求12所述的抗体药物缀合物，其中所述m是1。14.权利要求11或12中任一项所述的抗体药物缀合物，其中所述n是3或4。15.权利要求12-14中任一项所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体或抗原结合区包含含有SEQIDNO:7的氨基酸序列的VH区和含有SEQIDNO:17的氨基酸序列的VL区。16.根据权利要求12-14中任一项所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体或抗原结合区包含含有SEQIDNO:27的氨基酸序列的VH区和含有SEQIDNO:37的氨基酸序列的VL区。17.根据权利要求12-14中任一项所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH区和VL区，所述VH区包含：(a)SEQIDNO:1的VHCDR1、(b)SEQIDNO:2的VHCDR2、(c)SEQIDNO:3的VHCDR3，所述VL区包含(d)SEQIDNO:11的VLCDR1、(e)SEQIDNO:12的VLCDR2和(f)SEQIDNO:13的VLCDR3，其中CDR根据Kabat定义限定。18.根据权利要求12-14中任一项所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH区和VL区，所述VH区包含：(a)SEQIDNO:21的VHCDR1、(b)SEQIDNO:22的VHCDR2、(c)SEQIDNO:23的VHCDR3，所述VL区包含(d)SEQIDNO:31的VLCDR1、(e)SEQIDNO:32的VLCDR2和(f)SEQIDNO:33的VLCDR3，其中CDR根据Kabat定义限定。19.根据权利要求12-14中任一项所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段包含SEQIDNO:9的重链和SEQIDNO:19的轻链。20.根据权利要求12-14中任一项所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体包含SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·阿布拉姆斯，S·科恩，J·达米亚诺，C·杜尔，T·胡贝尔，D·曼内斯，K·米勒，K·伦达尔，JM·R·隆多，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH