对LOX1具有特异性的结合蛋白及其用途制造技术

本披露提供了LOX1(LOX1)结合蛋白如抗‑LOX1抗体和组合物以及制造这些结合蛋白的方法。在某些方面，本文提供的LOX1‑结合蛋白抑制或拮抗LOX1活性。此外，本披露提供了用于诊断和治疗与动脉粥样硬化、血栓形成、冠状动脉疾病(CAD)、局部缺血(例如，心肌缺血)、梗塞(例如，心肌梗塞)、急性冠脉综合征(ACS)、中风、再灌注损伤、再狭窄、周围血管疾病、高血压、心力衰竭、炎症(例如，慢性炎症)、血管新生、先兆子痫、癌症和其他LOX1‑介导的疾病和病状相关的病状的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对LOX1具有特异性的结合蛋白及其用途相关申请的交叉引用本专利申请要求2014年10月1日提交的美国临时专利申请号62/058,254的权益，将其通过引用以其全文结合在此对以电子方式提交的序列表的引用与本申请一起提交的通过ASCII文本文件(名称：LOX1-100WO1_SequenceListing_ascii.txt；大小：50,926字节；以及创建日期：2015年9月30日)以电子方式递交的序列表的内容通过引用以其全文结合在此。背景本披露提供了凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX1)结合蛋白以及使用此类结合蛋白来例如治疗、预防和/或改善与LOX1相关的疾病或病状的方法，该疾病或病状包括例如血管功能障碍、动脉粥样硬化(斑块进展、破裂和/或血栓形成)、冠状动脉疾病(CAD)、局部缺血(例如，心肌缺血)、梗塞(例如，心肌梗塞)、中风和急性冠脉综合征(ACS)。动脉粥样硬化是由脂质、巨噬细胞和纤维元件作为病灶在动脉壁中累积而引起的复杂疾病。这些病灶发展成使动脉腔狭窄的复杂斑块，且它们是慢性炎症的中心。这些斑块容易破裂，从而触发血栓形成，导致不良心血管事件，包括中风和心肌梗塞。动脉粥样硬化是冠状动脉疾病、中风和周围血管疾病的主要原因，且因此代表世界范围内的最常见发病原因(世界卫生组织(WorldHealthOrganization)2011)。凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX1)是一种二硫键连接的II型跨膜蛋白。它首先被鉴定为氧化低密度脂蛋白(oxLDL)的主要受体(久米(Kume)等人，美国心脏协会第70界科学年会(70thScientificSessionsoftheAmericanHeartAssociation)丛书96，1997)。该受体由短N端细胞质结构域、跨膜结构域、颈结构域和C-型凝集素结构域(CTLD)组成，CTLD的结构已经被解开(大木良枝(Ohki)等人，结构(Structure)13:905-917(2005))。此外，LOX1的颈结构域可被蛋白水解裂解，释放出可溶性LOX1(sLOX1)。LOX1是一种E类清道夫受体，并结合多个配体，这些配体包括oxLDL、C-反应蛋白(CRP)、磷脂酰丝氨酸、晚期糖基化终产物(AGE)、小密度脂蛋白(sdLDL)、氧化HDL、N4-氧代壬酰基赖氨酸(ONL)、热休克蛋白(hsp)、肺炎衣原体、血小板、白细胞和凋亡细胞。这些配体中有许多，特别是oxLDL，与动脉粥样硬化相关。多个信号转导途径与LOX1活化有关，包括RhoA/Rac1、一氧化氮、p38MAPK、蛋白激酶B和C、ERK1/2和NFκB。参见例如，塔耶(Taye)等人，欧洲临床研究杂志(EurJClinInvest.)43(7):740-5(2013)。临床前证据暗示LOX1促进血管功能障碍、斑块进展、破裂和血栓形成、动脉粥样硬化以及炎性病状。参见例如，乌利齐-莫山尼奇(Ulrich-Merzenich)等人，治疗目标专家意见(ExpertOpinTherTargets.)17(8):905-19(2013)。例如，反之，LOX1敲除小鼠具有减少的主动脉粥样硬化和减少的血管壁胶原沉积(梅塔(Mehta)等人，循环研究(Circ.Res.)100:1634-1642(2007))，LOX1过度表达增加动脉粥样硬化斑块形成(井上(Inoue)等人，循环研究97:176-84(2005)；和怀特(White)等人，心血管病理学(Cardiovascularpathology)20:369-73(2011))，在易损斑块肩部观察到LOX1表达，且与巨噬细胞聚集、细胞凋亡和MMP-9表达有关(李(Li)等人，循环心血管成像(Cir.Cardio.Imaging)3:464-72(2010))。在大鼠中，中和LOX1抗体修复乙酰胆碱诱导的冠状动脉扩张(徐(Xu)等人，动脉硬化、血栓形成与血管生物学(Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.)27(4)871-877(2007))并减少球囊损伤后的内膜增厚(海纳卡特(Hinagata)等人，心血管研究(Cardiovasc.Res.)69:263-71(2006))。人类中的LOX1表达并非组成型，但可通过促炎性刺激动态诱导。在动脉粥样硬化斑块中，LOX1表达在内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞上。有趣的是，已经提出用血清sLOX1来诊断急性冠脉综合征(ACS)患者中的斑块不稳定性和破裂(纳卡穆拉(Nakamura)等人，制药和生物医学分析杂志(J.Pharm.Biomed.Anal.)51:158-163(2010))；预测ACS复发或死亡(久米等人，美国心脏协会第70界科学年会丛书96，1997)；且与复杂病灶数量增加有关(赵(Zhao)等人，临床心脏病杂志(Clin.Cardiol.)34:172-177(2011))。动脉粥样硬化相关的死亡率持续上升，因为高血压、糖尿病、血脂异常和生活方式特征(诸如吸烟和肥胖)的患病率渐增，它们是动脉粥样硬化的风险因素。标准护理治疗的介入包括：血小板抑制剂、抗高血压药、HMGCoA还原酶抑制剂(他汀类药物)、血栓溶解剂、经皮动脉扩张、支架或冠状动脉搭桥手术已经具有显著临床益处。然而，尽管使用了预防策略和治疗，但仍有大量遭受二次重大不良心血管事件(MACE)的患者。因此，需要可单独使用或与标准护理组合使用的新治疗剂。简要概述本披露提供了LOX1-结合蛋白以及它们的使用方法。在具体方面，本文披露的LOX1-结合蛋白减少、抑制或阻断LOX1结合到一个或多个它的配体。在一些方面，LOX1-结合蛋白减少、抑制或阻断LOX1与氧化低密度脂蛋白(oxLDL)、C-反应蛋白(CRP)和/或晚期糖基化终产物(AGE)结合。在一些方面，本披露提供了使用LOX1-结合蛋白治疗、预防和/或改善与LOX1表达和/或HDL-介导的信号传导减少相关的疾病或病状的方法。本披露还提供了使用LOX1-结合蛋白治疗、预防和/或改善急性冠脉综合征(ACS)、心肌梗塞(MI)或冠状动脉疾病(CAD)或与ACS、MI或CAD相关的病状的方法。在一些方面，本披露提供了使用LOX1-结合蛋白治疗、预防和/或改善选自下组的疾病或病状的方法，该组包括但不限于：动脉粥样硬化、血栓形成、冠状动脉疾病(CAD)、局部缺血(例如，心肌缺血)、梗塞(例如，心肌梗塞)、急性冠脉综合征(ACS)、中风、再灌注损伤、再狭窄、周围血管疾病、高血压、心力衰竭、炎症、血管新生、先兆子痫和癌症。在一些方面，LOX1-结合蛋白包含一组互补决定区(CDR)：重链可变区(VH)-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3和轻链可变区(VL)-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中该CDR组与CDR参考组相同，或与该CDR参考组相比总共具有18个或更少(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18个)氨基酸取代、缺失和/或插入，其中(a)VH-CDR1具有SEQIDNO:1的氨基酸序列；(b)VH-CDR2具有SEQIDNO:5的氨基酸序列；(c)VH-CDR3具有SEQIDNO:14的氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的LOX1‑结合蛋白，其包含一组互补决定区(CDR)：重链可变区(VH)‑CDR1、VH‑CDR2、VH‑CDR3以及轻链可变区(VL)‑CDR1、VL‑CDR2和VL‑CDR3，其中该组CDR与CDR参考组相比具有总共18个或更少氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH‑CDR1具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列；(ii)VH‑CDR2具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列；(iii)VH‑CDR3具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列；(iv)VL‑CDR1具有SEQ ID NO:30的氨基酸序列；(v)VL‑CDR2具有SEQ ID NO:31的氨基酸序列；并且(vi)VL‑CDR3具有SEQ ID NO:32的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.01 US 62/0582541.一种分离的LOX1-结合蛋白，其包含一组互补决定区(CDR)：重链可变区(VH)-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3以及轻链可变区(VL)-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中该组CDR与CDR参考组相比具有总共18个或更少氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1具有SEQIDNO:1的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2具有SEQIDNO:5的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3具有SEQIDNO:14的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1具有SEQIDNO:30的氨基酸序列；(v)VL-CDR2具有SEQIDNO:31的氨基酸序列；并且(vi)VL-CDR3具有SEQIDNO:32的氨基酸序列。2.一种分离的LOX1-结合蛋白，其包含一组互补决定区(CDR)：重链可变区(VH)-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3以及轻链可变区(VL)-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(a)(i)VH-CDR1具有SEQIDNO:1的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2具有SEQIDNO:2的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3具有SEQIDNO:3的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1具有SEQIDNO:30的氨基酸序列；(v)VL-CDR2具有SEQIDNO:31的氨基酸序列；且(vi)VL-CDR3具有SEQIDNO:32的氨基酸序列；(b)(i)VH-CDR1具有SEQIDNO:1的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2具有SEQIDNO:5的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3具有SEQIDNO:14的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1具有SEQIDNO:30的氨基酸序列；(v)VL-CDR2具有SEQIDNO:31的氨基酸序列；且(vi)VL-CDR3具有SEQIDNO:32的氨基酸序列；(c)(i)VH-CDR1具有SEQIDNO:38的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2具有SEQIDNO:39的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3具有SEQIDNO:44的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1具有SEQIDNO:55的氨基酸序列；(v)VL-CDR2具有SEQIDNO:60的氨基酸序列；且(vi)VL-CDR3具有SEQIDNO:61的氨基酸序列；或者(d)(i)VH-CDR1具有SEQIDNO:38的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2具有SEQIDNO:39的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3具有SEQIDNO:40的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1具有SEQIDNO:55的氨基酸序列；(v)VL-CDR2具有SEQIDNO:56的氨基酸序列；且(vi)VL-CDR3具有SEQIDNO:57的氨基酸序列。3.一种分离的LOX1-结合蛋白，其包含与SEQIDNO:4、19-29、41或48-54具有至少90％、95％、97％、98％或99％序列一致性的重链可变区(VH)；和与SEQIDNO:33、36、37、58或65-70具有至少90％、95％、97％、98％或99％序列一致性的轻链可变区(VL)。4.一种包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的分离的LOX1-结合蛋白，其中该VH序列与选自由SEQIDNO:4、19-28和29组成的组的参考VH序列相比具有总共15个或更少氨基酸取代、缺失和/或插入，且该VL序列与选自由SEQIDNO:33、36和37组成的组的参考VL序列相比具有总共6个或更少氨基酸取代、添加和/或缺失。5.一种分离的LOX1-结合蛋白，其包含选自下组的重链可变区(VH)，该组由以下各项组成：包含SEQIDNO:4、19-29、41或48-54的VH；以及选自下组的轻链可变区(VL)，该组由以下各项组成：包含SEQIDNO:33、36、37、58或65-70的VL。6.一种包含选自下组的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的分离的LOX1-结合蛋白，该组由以下各项组成：(a)具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO:33的氨基酸序列的VL；(b)具有SEQIDNO:29的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO:33的氨基酸序列的VL；(c)具有SEQIDNO:41的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO:58的氨基酸序列的VL；和(d)具有SEQIDNO:54的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO:70的氨基酸序列的VL。7.一种分离的LOX1-结合蛋白，其包含含SEQIDNO:4的重链可变区(VH)和含SEQIDNO:33的轻链可变区(VL)。8.一种分离的LOX1-结合蛋白，其包含一组互补决定区(CDR)：如表1、图4或图5中所示的重链可变区(VH)-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3以及轻链可变区(VL)-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。9.一种分离的LOX1-结合蛋白，其包含如表1、图4或图5中所示的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。10.一种分离的LOX1-结合蛋白，其包含一组互补决定区(CDR)：重链可变区(VH)-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3以及轻链可变区(VL)-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(a)VH-CDR1包含氨基酸序列：ELSMH(SEQIDNO:1)；(b)VH-CDR2包含氨基酸序列：GFDPEDHX1HX2HX3HX4HX5HX6QKFQG(SEQIDNO:71)；其中HX1选自下组，该组由以下各项组成：G、W、Y和F，HX2选自下组，该组由以下各项组成：E、T、Q、K、A和S，HX3选自下组，该组由以下各项组成：T、Y、I和N，HX4选自下组，该组由以下各项组成：I、A、R和H，HX5选自下组，该组由以下各项组成：Y、V、T、L和Q，并且HX6选自下组，该组由以下各项组成：A、D、G、S和H；(c)VH-CDR3包含氨基酸序列：HX7HX8GHX9HX10HX11HX12GVRGWDYYYGMDV(SEQIDNO:72)；其中HX7选自下组，该组由以下各项组成：P、S和V，HX8选自下组，该组由以下各项组成：N、W、D和T，HX9选自下组，该组由以下各项组成：Q、R和T，HX10选自下组，该组由以下各项组成：Q和H，HX11选自下组，该组由以下各项组成：G和Q，且HX12选自下组，该组由以下各项组成：K和G；(d)VL-CDR1包含氨基酸序列：TGSSSNIGAGYDVH(SEQIDNO:30)；(e)VL-CDR2包含氨基酸序列：GNSNRPS(SEQIDNO:31)；且(f)VL-CDR3包含氨基酸序列：QSYDSLX1LX2LX3LX4LX5LX6(SEQIDNO:73)；其中LX1选自下组，该组由以下各项组成：M和S，LX2选自下组，该组由以下各项组成：L、Y和H，LX3选自下组，该组由以下各项组成：S和R，LX4选自下组，该组由以下各项组成：A和G或被省略(无氨基酸)，LX5选自下组，该组由以下各项组成：W和F，且LX6选自下组，该组由以下各项组成：V、G和A。11.一种结...

【专利技术属性】
技术研发人员：A巴查南，M乔多尔奇，P卡里乌克，J哈斯马克，C巴伦兰，D潘迪，张阜民，D贝尔科维奇，L罗默，
申请(专利权)人：免疫医疗有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB