用于蚊虫控制的组合物和所述组合物的用途制造技术

本文提供用于蚊虫控制的组合物。该组合物含有包含特异性减量调节对蚊是内源的基因的表达或特异性减量调节对蚊虫病原体是内源的基因的表达的外源裸dsRNA的细胞。另提供用于蚊虫控制的组合物，所述组合物含有包含核酸杀幼虫剂的细胞。还提供生产和使用所述组合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于蚊虫控制的组合物和所述组合物的用途专利
和背景本专利技术在其一些实施方案中涉及用于蚊虫控制的组合物和所述组合物的用途。蚊是包括疟疾、黄热病和登革热在内的多种人类和动物疾病的主要病媒。每年超过100万人死于蚊虫传播的疾病，数亿人更是经历痛苦和患有通过蚊虫传播的疾病。对于登革热既没有特效药也没有疫苗。目前控制该疾病的唯一方式是控制传播疾病的蚊，即埃及伊蚊(Aedesaegypti)。对于黄热病没有治疗方法，但是有疫苗；然而疫苗昂贵，无法获得以保护世界的其它地区。目前没有可获得的药物方案保证针对疟疾的100%保护，而且除了防止蚊虫叮咬以外，感染的预防需要按指导使用抗疟疾药物。抗疟疾药实际上不是防止该疾病，而是仅在血流中起作用以通过抑制红细胞中的寄生物发育来抑制临床症状。为了预防由上述提及的病毒和寄生物引起的人类疾病，需要有系统的蚊监视系统。现今公认的是，所述行动的成功取决于蚊虫综合治理程序(integratedmosquitomanagement,IMM)的实施。这些程序的目的是以经济的和环境友好的方式使蚊虫控制最优化。具体地说，蚊虫综合治理是一种综合的蚊虫预防/控制策略，其单独或组合地采用所有可获得的蚊虫控制方法，利用已知的蚊虫弱点从而减少其数目至可接受的水平，同时保持优质环境。IMM不强调蚊虫清除或消灭。蚊虫综合治理方法经专门定制以安全地对抗蚊虫生命周期的每个阶段。用于控制未成熟蚊(幼虫和蛹)的审慎的蚊虫治理实践包括诸如利用生物控制(天然、非侵害的捕食者)、来源减少(水分或植被管理或其它合适的土地管理利用)、水体卫生实践以及使用登记的杀幼虫剂等方法。当来源清除或幼虫控制措施不可行或显然不适当时，或当面临即将发生的蚊虫传播疾病时，可能需要施用登记的杀成虫药。然而，杀幼虫剂/杀成虫药功效目前受到目标群体抗性增加的威胁。所述现象正发生在全世界所有主要的疾病媒介蚊种中，并且快速扩大[Harris等(2010)Am.J.Trop.Med.Hyg.83,277e284；Marcombe等(2009a)Am.J.Trop.Med.Hyg.80,745e751；Marcombe等(2009b)BMCGenomics10,494；Ranson等(2009)Malar.J.8,299]。杀幼虫是经济安全的预防方法，用来中断幼虫或蛹发育成成蚊。杀幼虫还是通过施用药剂(统称杀幼虫剂)杀死未成熟蚊以控制蚊幼虫和/或蛹的通用术语。可将杀幼虫剂分成两大类：生物合理杀虫剂(生物杀虫剂)和常规的广谱化学杀虫剂。生化剂例如昆虫生长调节剂(IGRS)通过中断其生命周期，而非通过直接毒性来控制昆虫。根据这种作用方式，美国环保署(U.S.EnvironmentalProtectionAgency,EPA)将其视为生化杀虫剂。IGRS模拟负责昆虫发育的天然存在的昆虫生化物质。通过模拟，IGRS阻止蚊幼虫发育成可从蛹中羽化的成虫。它能够以极小的浓度发挥这种作用。第一种IGRS，其含有几种甲氧普烯异构体，在1975年登记[Henrick,(2007)Methoprene.载于:Floore,T.G.(编辑).BiorationalControlofMosquitoes.BulletinoftheAmericanMosquitoControlAssociationNo.7.StLouis,MO:AllenPress]。甲氧普烯产品目前是在美国登记使用的唯一的IGRS。甲氧普烯是一种保幼激素(JH)类似物，其模拟来自昆虫的天然激素。JH参与昆虫生理学过程的调节，包括交配和变态。因此，这些化学物质干扰正常的昆虫生长和成熟，并诱导异常幼虫生长形式。抗性定义为“昆虫品种耐受可证实对同一物种的正常群体中的大部分个体是致死的毒物剂量的发展起来的能力”[Clark和Yamaguchi，(2002)ScopeandStatusofPesticideResistance.载于AgrochemicalResistance:Extent,MechanismandDetection,编辑J.MClark和I.Yamaguchi,第1-22页.Washington,DC:AmericanChemicalSociety]。在敏感的群中，具有对指定杀虫剂的抗性基因的个体极少，通常数目范围介于10–5与10–8之间，但毒物的广泛使用有利于抗性个体的流行。这些个体在不存在种内竞争时在多代内快速繁殖，迅速变成群中的优势部分。因此，杀虫剂不再有效，昆虫被视为有抗性。除杀虫剂和杀昆虫剂以外，常用于农业的化学品还包括肥料、除草剂、杀真菌剂和提高其效率的各种辅助剂。虽然这些化合物通常是对昆虫无毒的，但其在繁殖场所中的存在显示通过调节其解毒系统影响对杀虫剂的耐受性。例如，暴露于除草剂甲草胺的Chironomustentans幼虫通过GST活性提高而起反应[Li等(2009)InsectBiochem.Mol.Biol.,39,745e754]。暴露于杀真菌剂三唑酮、烯唑醇和五氯酚48小时的白纹伊蚊(Ae.albopictus)幼虫显示对甲萘威的耐受性提高[Suwanchaichinda和Brattsten，(2001)Pestic.Biochem.Physiol.,70,63e73]。用五氯酚观察到的强大作用此外与P450s的强诱导有关。Poupardin等人[(2008)InsectBiochem.Mol.Biol.38,540e551；(2010)InsectMol.Biol.,19,185e193]表明将埃及伊蚊(Ae.aegypti)幼虫暴露于次致死剂量的硫酸铜(常作为杀真菌剂用于农业)中，提高其对拟除虫菊酯氯菊酯的耐受性。这种作用与P450活性的升高和在解毒组织优先转录并显示与已知拟除虫菊酯代谢物(metabolizer)高度同源的CYP基因的诱导相关。同样，将埃及伊蚊幼虫暴露于除草剂草甘膦(Roundup的活性分子)中，导致其对氯菊酯的耐受性显著提高以及多个解毒基因的诱导[(Riaz等(2009)Aquat.Toxicol.,93,61e69]。已描述了蚊对生物杀幼虫剂的抗性。具体地说，Rodcharoen等,JournalofEconomicEntomology,第87卷,第5期,1994,第1133-1140页记录了五带淡色库蚊(Culexquinquefasciatus)对生物杀虫剂球形芽孢杆菌(Bacillussphaericu,B.s.)的抗性的发生。另外，不久在几个物种中证实了对甲氧普烯的抗性[Dyte,(1972)Nature,238(5358):48-9；Cerf和Georghiou,(1972)Nature,239(5372):401-2]。将dsRNA引入幼虫中的一种方法是通过脱水。具体地说，使幼虫在NaCl溶液中脱水，然后在含有双链RNA的水中再水化。这个过程被认为诱导蚊幼虫中的基因沉默。专利技术概述按照本专利技术一些实施方案的一个方面，提供用于蚊虫控制的组合物，所述组合物包含含有外源裸dsRNA的细胞，所述外源裸dsRNA特异性减量调节对蚊是内源的基因的表达或特异性减量调节对蚊虫病原体是内源的基因的表达。按照本专利技术一些实施方案的一个方面，提供用于蚊虫控本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于蚊虫控制的组合物，所述组合物含有包含外源裸dsRNA的细胞，所述外源裸dsRNA特异性减量调节对蚊是内源的基因的表达或特异性减量调节对蚊虫病原体是内源的基因的表达。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.04 US 61/988234;2014.05.04 US 61/988236;201.一种用于蚊虫控制的组合物，所述组合物含有包含外源裸dsRNA的细胞，所述外源裸dsRNA特异性减量调节对蚊是内源的基因的表达或特异性减量调节对蚊虫病原体是内源的基因的表达。2.一种用于蚊虫控制的组合物，所述组合物含有包含核酸杀幼虫剂的细胞。3.一种用于蚊虫控制的组合物，所述组合物含有包含影响雌蚊的生育力或产卵力的核酸杀幼虫剂的细胞。4.一种用于蚊虫控制的组合物，其包含靶向piRNA途径基因和/或不育基因的核酸杀幼虫剂。5.一种用于蚊虫控制的组合物，其包含靶向包含Aub(AAEL007698)和Argonaute-3(AAEL007823)的基因的核酸杀幼虫剂。6.权利要求4或5的组合物，其中所述核酸杀幼虫剂包含至少一种dsRNA。7.权利要求6的组合物，其含有包含SEQIDNO:1858的dsRNA和包含SEQIDNO:1823的dsRNA。8.一种生产杀幼虫组合物的方法，所述方法包括将核酸杀幼虫剂导入细胞，从而产生杀幼虫剂。9.一种生产杀幼虫组合物的方法，所述方法包括将影响雌蚊的生育力或产卵力的核酸杀幼虫剂导入细胞，从而产生杀幼虫剂。10.权利要求8或9的方法，其中所述导入通过电穿孔实现。11.权利要求8或9的方法，其中所述导入通过粒子轰击实现。12.权利要求8或9的方法，其中所述导入通过基于化学的转染实现。13.权利要求2的组合物或权利要求8的方法，其中所述核酸杀幼虫剂减量调节选自以下的靶基因：(i)影响幼虫存活率；(ii)干扰幼虫期至成虫期的变态；(iii)影响蚊幼虫对杀幼虫剂的敏感性；(iv)影响成蚊对杀成虫药/杀虫剂的敏感性；和(v)影响雄蚊或雌蚊的生育力或产卵力。14.权利要求13的组合物，其中所述靶基因选自1-427、430-1813、1826-1832。15.权利要求13的组合物，其中所述靶基因选自P-糖蛋白(AAEL010379)、Argonaute-3(AAEL007823)、细胞色素p450(CYP9J26)、钠通道(AAEL008297)、Aub(AAEL007698)、AeSCP-2(AF510492.1)、AeAct-4(AY531222.2)、AAEL002000、AAEL005747、AAEL005656、AAEL017015、AAEL005212、AAEL005922、AAEL000903和AAEL005049。16.权利要求13的组合物，其中所述靶基因包括Aub(AAEL007698)和Argonaute-3(AAEL007823)。17.权利要求16的组合物，其中减量调节所述靶基因的所述核酸杀幼虫剂是dsRNA。18.权利要求17的组合物，其中所述dsRNA包含SEQIDNO:1858和1823。19.权利要求1-3中任一项的组合物或权利要求8-9的方法，其中所述细胞是藻类细胞。20.权利要求1-3中任一项的组合物或权利要求8-9的方法，其中所述细胞是微生物细胞。21.权利要求20的组合物或方法，其中所述细胞是细菌细胞。22.权利要求1-21中任一项的组合物或方法，其中所述组合物另包含食物诱饵。23.权利要求1-22中任一项的组合物或方法，其中所述组合物被配制在选自以下的制剂中：工业粉末、可湿性粉剂、粉...

【专利技术属性】
技术研发人员：N帕迪，HF小邦里斯蒂亚尼，E茂里，A维斯，ES伯纳德斯，
申请(专利权)人：佛利斯特创新有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列,IL