一种绵羊肌肉干细胞的分离方法技术

本发明专利技术公开了一种绵羊肌肉干细胞的分离方法，通过切取绵羊腿部的肌肉细胞，对该肌肉细胞进行消毒、清理、切碎、消化和离心分离等步骤，分离出肌肉干细胞，并将该肌肉干细胞置于培养皿中培养；本发明专利技术与常规肌肉干细胞分离方法相比，分离效率高，分离过程中受感染几率小，分离后的干细胞成活率高，而且易于培养，增加干细胞的数量，提高干细胞再进行治疗过程中对肌肉修复的速度和效率。

A method of separation of sheep muscle stem cells

The invention discloses a method for separating the sheep muscle stem cells. By cutting the muscle cells of the leg of the sheep, the muscle cells are sterilized, cleaned, chopped, digested and centrifuged, and the muscle stem cells are separated and cultured in a Petri dish. The invention and the conventional muscle stem are fine. Compared with the cell separation method, the separation efficiency is high, the infection rate is small in the separation process, the survival rate of the stem cells after separation is high, and it is easy to cultivate, increase the number of stem cells and improve the speed and efficiency of the muscle repair during the treatment process.

【技术实现步骤摘要】
一种绵羊肌肉干细胞的分离方法
本专利技术属于细胞分离领域，更具体地说，尤其涉及一种绵羊肌肉干细胞的分离方法。
技术介绍
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。肌肉干细胞可发育分化为成肌细胞，后者可互相融合成为多核的肌纤维，形成骨骼肌最基本的结构。肌肉干细胞作为研究如何修复受损的肌肉组织及如何效治疗尿失禁必不可少的培养对象，但是现有技术中的肌肉干细胞分离较为麻烦，分离后细胞存活时间短，影响研究和治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种绵羊肌肉干细胞的分离方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种绵羊肌肉干细胞的分离方法，包括如下步骤：S1、选取2-3龄的绵羊，将绵羊清洗干净并牵至无菌室中，剔除大腿处毛发，其余部位采用消毒纱布包裹，再使用酒精清洗大腿处2-3次，取出大腿肌肉4-8g，放入酒精中浸泡；S2、酒精消毒10-20min，去除大腿肌肉上的结缔组织和血细胞，并使用生理盐水清洗，保证细胞完整性的前体下将绵羊大腿肌肉清洗干净；S3、将S2中清洗后的绵羊大腿肌肉切碎至0.8-1.2mm3的碎块，放置培养皿中，首先向培养皿中加入Ⅰ型胶原酶消化5-8min，再加入Ⅳ型胶原酶消化4-6min，最后加入DispaseⅡ和胰酶的混合酶中消化7-10min；S4、消化结束后去除消化使用的所有消化酶，采用100目筛网筛选，筛选后采用生理盐水冲洗2-3次，冲洗后放入离心机中离心处理，离心后去除上层液，将下层液放入培养皿中，并向培养皿中加入完全培养液10-12ml，再将培养皿放入恒温培养箱中，保持恒温培养箱温度在37-37.5℃。优选的，S2中加入消化酶后采用机械搅拌，保证消化完全，且提高消化的速度。优选的，S4中离心机的转速设定为2100-2300rpm，时间为5-7min。优选的，S4中取出离心后的下层液，接种在已添加了0.3%明胶的完全培养液中，再向培养皿中添加10%胎牛血清和3%双抗，并调节二氧化碳的浓度为5%。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术与常规肌肉干细胞分离方法相比，分离效率高，分离过程中受感染几率小，分离后的干细胞成活率高，而且易于培养，增加干细胞的数量，提高干细胞再进行治疗过程中对肌肉修复的速度和效率。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。一种绵羊肌肉干细胞的分离方法，包括如下步骤：S1、选取2-3龄的绵羊，将绵羊清洗干净并牵至无菌室中，剔除大腿处毛发，其余部位采用消毒纱布包裹，再使用酒精清洗大腿处2-3次，取出大腿肌肉4-8g，放入酒精中浸泡；S2、酒精消毒10-20min，去除大腿肌肉上的结缔组织和血细胞，并使用生理盐水清洗，保证细胞完整性的前体下将绵羊大腿肌肉清洗干净；S3、将S2中清洗后的绵羊大腿肌肉切碎至0.8-1.2mm3的碎块，放置培养皿中，首先向培养皿中加入Ⅰ型胶原酶消化5-8min，再加入Ⅳ型胶原酶消化4-6min，最后加入DispaseⅡ和胰酶的混合酶中消化7-10min；S4、消化结束后去除消化使用的所有消化酶，采用100目筛网筛选，筛选后采用生理盐水冲洗2-3次，冲洗后放入离心机中离心处理，离心后去除上层液，将下层液放入培养皿中，并向培养皿中加入完全培养液10-12ml，再将培养皿放入恒温培养箱中，保持恒温培养箱温度在37-37.5℃。具体的，S2中加入消化酶后采用机械搅拌，保证消化完全，且提高消化的速度。具体的，S4中离心机的转速设定为2100-2300rpm，时间为5-7min。具体的，S4中取出离心后的下层液，接种在已添加了0.3%明胶的完全培养液中，再向培养皿中添加10%胎牛血清和3%双抗，并调节二氧化碳的浓度为5%。本专利技术与常规肌肉干细胞分离方法相比，通过切取绵羊腿部的肌肉细胞，对该肌肉细胞进行消毒、清理、切碎、消化和离心分离等步骤，分离出肌肉干细胞，并将该肌肉干细胞置于培养皿中培养；分离效率高，分离过程中受感染几率小，分离后的干细胞成活率高，而且易于培养，增加干细胞的数量，提高干细胞再进行治疗过程中对肌肉修复的速度和效率。以上所述，仅为本专利技术较佳的具体实施方式，但本专利技术的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术揭露的技术范围内，根据本专利技术的技术方案及其专利技术构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种绵羊肌肉干细胞的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、选取2‑3龄的绵羊，将绵羊清洗干净并牵至无菌室中，剔除大腿处毛发，其余部位采用消毒纱布包裹，再使用酒精清洗大腿处2‑3次，取出大腿肌肉4‑8g，放入酒精中浸泡；S2、酒精消毒10‑20min，去除大腿肌肉上的结缔组织和血细胞，并使用生理盐水清洗，保证细胞完整性的前体下将绵羊大腿肌肉清洗干净；S3、将S2中清洗后的绵羊大腿肌肉切碎至0.8‑1.2mm

【技术特征摘要】
1.一种绵羊肌肉干细胞的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、选取2-3龄的绵羊，将绵羊清洗干净并牵至无菌室中，剔除大腿处毛发，其余部位采用消毒纱布包裹，再使用酒精清洗大腿处2-3次，取出大腿肌肉4-8g，放入酒精中浸泡；S2、酒精消毒10-20min，去除大腿肌肉上的结缔组织和血细胞，并使用生理盐水清洗，保证细胞完整性的前体下将绵羊大腿肌肉清洗干净；S3、将S2中清洗后的绵羊大腿肌肉切碎至0.8-1.2mm3的碎块，放置培养皿中，首先向培养皿中加入Ⅰ型胶原酶消化5-8min，再加入Ⅳ型胶原酶消化4-6min，最后加入DispaseⅡ和胰酶的混合酶中消化7-10min；S4、消化结束后去除消化使用的所有消化酶，采用100目筛网筛选，筛选后采用生理盐...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵俊星，秦旭泽，张婷，张瑞鑫，王建新，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：山西,14