一种人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白及其应用，通过将大量肿瘤患者作为研究病例，对病例进行基因检测并进行分析，确定出人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖的突变蛋白，根据该人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白制备基因芯片、单克隆抗体和ELISA试剂盒，为肿瘤的基因诊断提供的指引作用，实现肿瘤的早诊断、早发现和相关治疗。

Human phosphatidylinositol proteoglycan mutant protein and its application

The present invention relates to a human phosphatidyl inositol mutant protein and its application. By using a large number of cancer patients as a study case, a gene detection and analysis of a case is carried out to determine a mutant protein of the human phosphatidylinositol protein, based on the human phosphatidyl inositol protein mutant protein. The chip, monoclonal antibody and ELISA kit play a guiding role in gene diagnosis of tumors, and achieve early diagnosis, early detection and related treatment of tumors.

【技术实现步骤摘要】
一种人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白及其应用
本专利技术涉及一种基因工程领域，尤其涉及一种人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白及其应用。
技术介绍
磷脂酰肌醇蛋白聚糖是一类与磷脂酰肌醇连接的聚糖。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3是一种膜性硫酸乙酰肝糖素蛋白，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在细胞的生长发育中起着重要的调控作用，与各种肿瘤的关系密切，包括肝癌、恶性黑素瘤、卵巢癌和乳腺癌等多种肿瘤，其在不同的肿瘤中发挥不同的作用，甚至可能起完全相反的作用。此外，由于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在大部分的肿瘤中表达，而在正常人组织中几乎不表达，因此，对人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变的检测对判断人体是否患有肿瘤具有一定的指引作用。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白及其应用。本专利技术技术方案包括：第一方面，提供一种人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。第二方面，提供一种人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白的编码基因，其核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。第三方面，提供一种基因芯片，包括：固相载体和固定在该载体上的核苷酸探针；所述核苷酸探针根据所述人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白的核苷酸序列，与人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖正常蛋白的核苷酸序列的比对结果确定。优选地，所述核苷酸探针为SEQIDNO:3所示的碱基序列。第四方面，提供一种特异性识别人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白的单克隆抗体，其编码的氨基酸序列为SEQIDNO:1所示。第五方面，提供一种用于检测人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白的抗体的ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括：包被有上述单克隆抗体的ELISA酶标板、酶标二抗、检测对象的磷脂酰肌醇蛋白聚糖蛋白、样品稀释液、包被缓冲液、ELISA酶标板洗涤液、显色液和终止液。优选地，所述酶标二抗为稀释的HRP辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG。第六方面，提供一种基于上述任一所述ELISA试剂盒检测人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白的抗体的方法，包括：a、使用所述包被缓冲液对上述单克隆抗体进行稀释，并将稀释后的所述单克隆抗体加样至ELISA酶标板的孔中，并室温孵育；b、使用所述样品稀释液将检测对象的磷脂酰肌醇蛋白聚糖蛋白稀释成不同浓度梯度，并将不同浓度梯度的磷脂酰肌醇蛋白聚糖蛋白分别加样至ELISA酶标板的孔中，并室温孵育；c、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；d、加入所述酶标二抗，并室温孵育；e、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；f、加入所述显色液，室温避光孵育，加入所述终止液终止反应；g、在酶标仪上450nm测定OD值。优选地，进一步包括：空白对照实验。本专利技术提供了一种人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白及其应用，将大量肿瘤患者作为研究病例，对病例进行基因检测并进行分析，确定出人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖的突变蛋白，根据该人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白制备基因芯片、单克隆抗体和ELISA试剂盒，为肿瘤的基因诊断提供的指引作用，实现肿瘤的早诊断、早发现和相关治疗。上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例并配合附图详细说明如后。附图说明图1是本专利技术实施例一提供的一种比对结果示意图；图2是本专利技术实施例一提供的一种基因芯片布局图；图3是本专利技术实施例二提供的一种显色结果示意图；图4是本专利技术实施例二提供的另一种显色结果示意图；图5是本专利技术实施例五提供的为蛋白含量的标准曲线；图6是本专利技术实施例五提供的Westernblot检测结果示意图；图7是本专利技术实施例六提供的为蛋白含量的标准曲线；图8是本专利技术实施例六提供的Westernblot检测结果示意图；图9是本专利技术实施例七提供的为蛋白含量的标准曲线；图10是本专利技术实施例七提供的Westernblot检测结果示意图。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例一、基因芯片的制备首先，可以根据申请号为“201710429915.8”、专利名称为“一种突变蛋白的检测方法及装置”的中国专利技术专利中描述的检测方法，确定出人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白的编码基因，其核苷酸序列如SEQIDNO:2所示；相应地，根据该编码基因确定出人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。其次，根据人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白及其编码基因，按照如下方式实现基因芯片的制备。1、核苷酸探针的设计(1)核苷酸探针的设计：核苷酸探针根据人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白的核苷酸序列，与人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖正常蛋白的核苷酸序列的比对结果来确定，并根据如下探针的设计原则，设计出针对人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白的特异性的核苷酸探针。其中，核苷酸探针设计的原则如下：①核苷酸探针Tm值应接近整个基因组的平均Tm值，上下波动5℃；②核苷酸探针分子内重复的单一碱基连续不超过5个；③G+C含量为40％-60％，减少非特异性杂交保证杂交的特异性；④核苷酸探针分子内部稳定二级结构配对碱基长度少于4bp，这样可以保证不会因核苷酸探针内部稳定的二级结构而影响杂交效率；⑤经同源比较与其他序列的相似性小于40％；⑥经对比与非探针备选序列的同源片段连续不超过20个碱基。其中，人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白对应的氨基酸序列与人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖正常蛋白对应的氨基酸序列的比对结果请参考图1，其中，图1中的Query序列是人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白对应的氨基酸序列，Sbjct序列是人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖正常蛋白对应的氨基酸序列，Query序列与Sbjct序列之间的序列为比对结果，根据图1可知，人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白相对于人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖正常蛋白，在一个位置处发生了插入。根据SEQIDNO:2所示的核苷酸序列，以及图1的比对结果，为了能够特异性识别待检测对象的磷脂酰肌醇蛋白聚糖是否发生了突变，那么在选取核苷酸探针时，可以按照如下几种方式中的任一种方式设计核苷酸探针：(1)选取插入位置的整条核苷酸序列生成核苷酸探针；(2)在插入位置之前，和/或，在插入位置之后，各选择若干个核苷酸序列，该选择的若干个序列(碱基序列位置的顺序不变)与插入的整条核苷酸序列共同生成核苷酸探针；(3)在插入位置之前选择若干个核苷酸序列，与在插入位置的开始位置处选择若干个核苷酸序列，生成核苷酸探针；(4)在插入位置之后选择若干个核苷酸序列，与在插入位置的结束位置处选择若干个核苷酸序列，生成核苷酸探针；(5)在缺失位置之前选择若干个核苷酸序列，与在缺失位置之后选择若干个核苷酸序列，生成核苷酸探针；(6)将包含有突变位置核苷酸的一条核苷酸序列作为核苷酸探针。在本实施例中，根据SEQIDNO:2所示的核苷酸序列以及根据上述核苷酸探针设计原则，按照上述方式(2)设计一种优选地核苷酸探针如SEQIDNO:3所示，该核苷酸探针为：tcaaggtgtccagcctactgacagcagctttgaagtacatagtgcatttcccaagaaccgtgggtaaagaaaaagcatt(2)核苷酸探针的合成：通过核苷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.一种人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。2.一种人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。3.一种基因芯片，其特征在于，包括：固相载体和固定在该载体上的核苷酸探针；所述核苷酸探针根据所述人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白的核苷酸序列，与人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖正常蛋白的核苷酸序列的比对结果确定。4.根据权利要求3所述的基因芯片，其特征在于，所述核苷酸探针为SEQIDNO:3所示的碱基序列。5.一种特异性识别人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白的单克隆抗体，其特征在于，其编码的氨基酸序列为SEQIDNO:1所示。6.一种用于检测人的磷脂酰肌醇蛋白聚糖突变蛋白的抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述ELISA试剂盒包括：包被有权利要求5所述单克隆抗体的ELISA酶标板、酶标二抗、检测对象的磷脂酰肌醇蛋白聚糖蛋白、样品稀释液、包被缓冲液、ELISA酶标板洗涤液、显色液和终止液。7.根据权利要求6所述用于检测人的磷...

【专利技术属性】
技术研发人员：张耀洲，吴玉乾，冯建华，李冬梅，张树军，胖铁良，陈玉皎，王文雅，
申请(专利权)人：天津市湖滨盘古基因科学发展有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12