内生真菌菌株NYN8G01的用途制造技术

本发明专利技术涉及一种内生真菌根盘菌菌株Rhizopycnis sp.NYN8G01在促进水稻生长方面的新用途，属于微生物应用领域。具体而言，本发明专利技术公开了一种内生真菌菌株NYN8G01的用途：用于促进水稻生长；增加水稻中叶绿色含量和可溶性糖的含量；促进土壤有机质的增加，从而增加土壤肥力。

Use of endophytic fungus strain NYN8G01

The invention relates to a new application of endophytic fungus, Rhizopycnis sp.NYN8G01, in promoting rice growth, and belongs to the field of microbial application. In particular, the invention discloses the use of an endophytic fungus strain NYN8G01: to promote the growth of rice, increase the content of green and soluble sugar in the middle leaf of rice, promote the increase of soil organic matter and increase soil fertility.

【技术实现步骤摘要】
内生真菌菌株NYN8G01的用途
本专利技术涉及一种内生真菌根盘菌菌株Rhizopycnissp.NYN8G01在促进水稻生长方面的新用途，属于微生物应用领域。
技术介绍
内生真菌(endophyticfungi)为至少生活史的一部分能侵染定殖在健康植物组织中，宿主无明显病症的一类真菌(Petrini，1991；Wilson，1995)，与菌根真菌只存在于植物根系不同，内生真菌在植株的地下和地上部分的任何组织器官都能存在(Faeth&Fagan,2002)。内生真菌广泛存在于植物组织内，不受外界环境的影响，对植物生长发育、抵抗病虫害等具有广泛的生物学作用，同时对一些植物及农作物的广泛应用具有重要意义。随着环境问题的持续恶化，植物资源经受着严峻的考验，而内生真菌对植物的影响是多方面的，已经成为当今国内外研究的热点问题之一。在农业生产、生态保护、中药资源开发、医药卫生的发展都有重要的现实意义。近年来，人们发现在植物体内所存在的有益内生细菌和内生真菌，内源性菌株对植物病害的防治作用及生物开发应用已引起科学家的广泛关注。植物内生真菌主要分布于植物的种子、花、茎、叶和根系中，与植物的关系是互惠共生的，而且植物内生真菌可以提供光合产物及矿物质，内生真菌代谢产物能够刺激寄主植物的生长发育，提高寄主植物的生物应激和非生物胁迫抗性能力，即两者之间存在物质与能量的循环交流，植物内生真菌对寄主植物的积极地促生效应，部分是通过植物内生真菌分泌的活性物质或者次级代谢产物对植物的生长作用的结果。目前研究较多的是根瘤共生体和菌根共生体，内生真菌与植物的共生体是高等植物与微生物共生关系的又一种表现形式。专利申请号为CN201510518159.7的专利技术《内生真菌菌株NYN8G01及其用途》提供了一种真菌菌株，该菌株为内生真菌菌株(Rhizopycnissp.)NYN8G01，保藏编号：CCTCCNO:M2015218。该真菌菌株的用途是：降低烟叶中镉、砷、铅的含量。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种内生真菌菌株(Rhizopycnissp.)NYN8G01的新用途。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种内生真菌菌株(Rhizopycnissp.)NYN8G01的新用途：用于促进水稻生长。作为本专利技术的内生真菌菌株(Rhizopycnissp.)NYN8G01的用途的改进：增加水稻中叶绿色含量和可溶性糖的含量。作为本专利技术的内生真菌菌株(Rhizopycnissp.)NYN8G01的用途的进一步改进：促进土壤有机质的增加，从而增加土壤肥力。该内生真菌菌株Rhizopycnissp.NYN8G01，也称根盘菌Rhizopycnissp.NYN8G01。实际使用时，每一亩面积的土壤中添加约5kg的内生真菌菌剂NYN8C05。综上所述，本专利技术提供一种内生真菌的菌株根盘菌菌株Rhizopycnissp.NYN8G01的新用途，改善土壤质量，提高土壤养分，从而促进水稻生长，增加水稻中叶绿色含量和可溶性糖的含量。附图说明图1为水稻叶片中叶绿素含量的对比图；图2为水稻叶片中可溶性糖的含量的对比图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此。以下案例中，水稻(Oryzasativa)秀水134，市售(浙江省农科种业有限公司)。备注说明：下述所有的培养基使用前均需要按照常规方式进行高温高压的灭菌处理(121℃、0.24MPa、20分钟)。实施例1、内生真菌菌株Rhizopycnissp.NYN8G01的作用：1、Rhizopycnissp.NYN8G01菌剂的制备首先，用灭菌的牙签挑取保存于常温液体石蜡中的Rhizopycnissp.NYN8G01菌丝，接种于PDA培养基平板上，封口膜密封，放置于恒温培养箱黑暗25℃培养备用。然后培养一级种子液培养，将用直径5cm打孔器打的菌饼10块接种于200mlPDB培养基中，放置摇床150r/min、25℃培养3d。接着制备二级种子液培养，将培养好的一级种子培养液用搅拌器打碎摇匀，吸取20ml接种于新的PDB培养基200ml中，放置摇床150r/min、25℃培养3d。菌剂基质配方：麸皮550g，豆饼粉100g，米糠150g，玉米碎粒200g，硫酸钙10g，蛋白胨13g，KH2PO41.5g，MgSO40.5g，NaNO34g，蔗糖13g，上述材料混合后加入500ml纯净水，均匀混合，将菌剂基质分装到耐高温的菌袋中，每袋100g，封口后121℃灭菌40min，隔夜后，同样条件下再灭一次，冷却备用。每袋菌剂基质加入二级种子培养液20ml，置于25℃恒温培养箱黑暗静止培养，培养15-20天直至Rhizopycnissp.NYN8G01在菌剂基质上长满。2、水稻育苗和盆栽实验选取完整的，没有任何病斑的水稻颗粒用1％次氯酸钠消毒10min，无菌水冲洗6-7次至没有次氯酸钠，放入培养皿中，37℃培养箱中萌发，种子露白(约3天)时可移栽。移栽的容器为直径20厘米的塑料盆。栽培基质按照泥炭：蛭石：珍珠岩＝4：2：1的比例拌匀。称取生长好的内生真菌菌剂(步骤1所得)，按每个盆栽10g菌剂、150g栽培基质混匀填入育苗盆。育苗盆放入盛满水的托盘中吸水，水分吸透后，移入萌发的植物种子各15颗，以此作为实验组。还分别设置了CK组，BLANK组；CK(灭活菌剂)为以灭活菌剂(内生真菌菌剂经高温高压灭菌处理)替代菌剂，其余同实验组；BLANK(空白对照)为取消菌剂、只有栽培基质的处理组。Rhizopycnissp.NYN8G01菌剂(实验组)，CK，BLANK分别3个重复，水稻生长50d天后测量相关指标。具体如下：(1)测定水稻生物量株高和根长用卷尺或者直尺测量；植物的生长量用电子天平测量，植株用水冲洗干净，地上部分与地下部分分开，称取鲜重，后放65℃烘箱烘至恒重，称量干重。表1、水稻在不同内生真菌菌剂下的生物量注：Blank为空白对照。内生真菌处理后，水稻各部分的生物量都有所增加，其中株高增加10.46％，根长增加44.85％，地上部分鲜重增加25.39％，地上部分干重增加25％，地下部分鲜重增加24.85％，地下部分干重增加了16.67％。(2)测定水稻中叶绿色含量1)取植物新鲜叶片，洗净植株表面污渍，剪碎混均，称取0.1g，放入50mL离心管中；2)在离心管中加入80％(99.5％丙酮：水＝80：19.5)丙酮5mL，将粘附在瓶壁边缘的叶片碎末冲到丙酮溶液中，盖上瓶塞，室温下置暗处浸提过夜，中间摇动3-4次。3)隔天取出离心管，待叶组织已全部变白时再加80％丙酮定容至25mL，变白表示叶绿素已完全浸提，过滤或离心(25℃，3-5min，12000r/min)后，进行比色测定。4)将叶绿素色素浸提液倒入光径1cm的比色杯内，用分光光度计分别在波长645nm、663nm、652nm下测定吸光度，以80％丙酮为空白对照。5)叶片中叶绿素含量(mg/g)的计算方法：Ca＝12.72×A663-2.59×A645(叶绿素a的浓度)Cb＝22.88×A645-4.67×A663(叶绿素b的浓度)式中：C为叶绿体色素浓度(mg/L)FW为鲜重gVT为提取液总体积n为稀释倍数(若提取液本文档来自技高网...

【技术保护点】
内生真菌菌株NYN8G01的用途，其特征是：用于促进水稻生长。

【技术特征摘要】
1.内生真菌菌株NYN8G01的用途，其特征是：用于促进水稻生长。2.根据权利要求1所述的内生真菌菌株NYN8G01的用途，其特征是：增加水稻...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛黎娟，章初龙，林福呈，冯晓晓，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33