作为用于嵌合抗原受体(CAR)疗法的T细胞来源的骨髓浸润淋巴细胞(MIL)制造技术

在一些实施方案中，提供包含嵌合抗原受体(“CAR”)的骨髓浸润淋巴细胞(“MIL”)。在一些方面，所述实施方案涉及用于制备重组MIL的方法，所述方法包括获得包含MIL的骨髓；并用编码嵌合抗原受体的核酸转染、转化或转导MIL。在一些方面，所述实施方案涉及用于在受试者中治疗病症的方法，所述方法包括给予受试者包含CAR的MIL。

T cell derived bone marrow infiltrating lymphocytes (MIL) used as chimeric antigen receptor (CAR) therapy

In some embodiments, bone marrow infiltrating lymphocytes (\MIL\) containing chimeric antigen receptors (\CAR\) are provided. In some respects, the implementation scheme relates to a method for preparing recombinant MIL, which includes obtaining a bone marrow containing MIL, and transfecting, transforming or transducing MIL with nucleic acid encoding a chimeric antigen receptor. In some respects, the embodiment relates to a method for treating a disease in a subject, which includes giving the subject a MIL containing CAR.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】作为用于嵌合抗原受体(CAR)疗法的T细胞来源的骨髓浸润淋巴细胞(MIL)相关申请的交叉参考该申请要求2015年7月8日递交的美国临时申请第62/189928号的优先权，其在此通过参照以其全部结合。背景绝大多数恶性肿瘤患者将死于其疾病。一种治疗这些患者的方法是遗传修饰MIL以通过嵌合抗原受体(“CAR”)的表达来靶向肿瘤细胞上表达的抗原。CAR为抗原受体，其被设计为以不依赖于人白细胞抗原的方式识别细胞表面抗原。除了以CD19靶向方法取得的成功以外，使用表达CAR的遗传修饰细胞治疗其他恶性肿瘤的尝试仅取得有限的成功。概述在一些实施方案中，提供包含嵌合抗原受体(“CAR”)的骨髓浸润淋巴细胞(“MIL”)。在一些实施方案中，CAR包含可结合配体的胞外结构域。在一些实施方案中，CAR包含可启动胞内信号传导级联的胞内结构域(例如在MIL中)。在一些实施方案中，提供用于在受试者中治疗病症的方法，包括给予受试者包含CAR的MIL。在一些实施方案中，方法包括给予受试者包含MIL群的组合物，其中MIL群中的每一个MIL包含CAR。在一些实施方案中，提供用于制备重组MIL的方法，包括获得包含MIL的骨髓，并用编码嵌合抗原受体的核酸转染、转化或转导MIL。骨髓可得自受试者，比如患有赘生物(neoplasm)的受试者。受试者可为人或小鼠。详述在一些实施方案中，本文提供用于治疗包括但不限于血液恶性肿瘤和实体肿瘤的癌症的组合物和方法。各方面涉及但不限于被转导以表达嵌合抗原受体(CAR)的骨髓浸润淋巴细胞(MIL)的过继细胞转移策略。CAR为将基于抗体的针对期望的抗原(例如肿瘤抗原)的特异性与激活MIL受体的胞内结构域组合以产生呈现特异性抗肿瘤细胞免疫活性的嵌合蛋白的分子。在一些实施方案中，提供被遗传修饰以稳定表达期望的CAR的MIL的用途。表达CAR的MIL本文称为CAR-MIL或CAR-修饰的MIL。在一些实施方案中，可对细胞进行遗传修饰以在其表面稳定表达抗体结合结构域，赋予独立于MHC的新颖抗原特异性。在一些实施方案中，对MIL进行遗传修饰以稳定表达将特异性抗体的抗原识别结构域与CD3ζ链或FcγRI蛋白的胞内结构域组合成单一嵌合蛋白的CAR。在一些实施方案中，CAR包含具有抗原识别结构域的胞外结构域、跨膜结构域和细胞质结构域。在一些实施方案中，使用天然与CAR中的结构域之一缔合的跨膜结构域。在一些实施方案中，可选择或通过氨基酸取代来修饰跨膜结构域，以避免这样的结构域结合于相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域，以使与受体复合物的其他成员的相互作用最小化。例如，跨膜结构域可为CD8α铰链结构域。就细胞质结构域而言，CAR例如可被设计为本身包含CD28和/或4-1BB信号传导结构域，或者与在CAR的情况下有用的任何其他期望的细胞质结构域组合。在一些实施方案中，CAR的细胞质结构域可被设计为进一步包含CD3ζ的信号传导结构域。例如，CAR的细胞质结构域可包括但不限于CD3ζ、4-1BB和CD28信号传导模块及其组合。因此，实施方案提供CAR-MIL及其用于过继疗法的方法。在一些实施方案中，CAR-MIL可通过将包含期望的CAR(例如包含抗CD19、跨膜结构域和人4-1BB的CAR)的慢病毒载体引入到细胞中而产生。例如，CAR-MIL能够在体内复制，导致长期持续存在，这可导致持续的肿瘤控制。在一些实施方案中，提供使用CAR-MIL输注给予表达CAR的遗传修饰的MIL用于治疗赘生物患者。在一些实施方案中，治疗中使用自体输注。自体MIL收集自需要治疗的患者，并使用本文描述的和本领域已知的方法激活并扩繁(expand)，并然后输注回患者体内。在一些实施方案中，使用表达包括CD3ζ和4-1BB共刺激结构域的抗CD19CAR的MIL。在某些情况下，输注到患者体内的CARMIL可消除患者体内的白血病细胞。然而，实施方案不限于靶向CD19或通过CD3ζ和/或4-1BB介导的途径传导信号的MIL。例如，实施方案包括与选自CD137(4-1BB)信号传导结构域、CD28信号传导结构域、CD3ζ信号结构域及其任何组合的一种或多种胞内结构域融合的任何抗原结合部分。定义冠词“一”和“一个”本文用于指文章的一个或多于一个(即至少一个)语法对象。举例来说，“一个元素”意指一个元素或多于一个元素。如该文件中使用的那样，本文使用的术语“包含”、“具有”、“有”和“包括”及其变化形式意指“包括但不限于”。尽管各种组合物和方法就“包含”各种组分或步骤而言进行描述(解释为意指“包括但不限于”)，但组合物、方法和装置也可“实质上由...(各种组分和步骤)组成”或“由......(各种组分和步骤)组成”，并且这样的术语应该解释为定义实质上封闭式成员组。本文使用的“激活”指的是已充分刺激以诱导可检测的细胞增殖的MIL的状态。激活也可与诱导的细胞因子产生和可检测的效应子功能相关联。术语“激活的MIL”尤其指正在经历细胞分裂的MIL。本文使用的术语“抗体”指的是与抗原特异性结合的免疫球蛋白分子。抗体可为源自天然来源或源自重组来源的完整免疫球蛋白，并且可为完整免疫球蛋白的免疫反应性部分。抗体可以多种形式存在，包括例如多克隆抗体、单克隆抗体、Fv、Fab和F(ab)2以及单链抗体和人源化抗体。术语“抗体片段”指的是完整抗体的一部分，并且指的是完整抗体的抗原决定可变区。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段、线性抗体、scFv抗体和由抗体片段形成的多特异性抗体。本文使用的术语“抗原”定义为引发免疫反应的分子。该免疫反应可能涉及抗体产生或特定免疫活性细胞的激活或两者。技术人员将会理解，任何大分子(包括几乎所有的蛋白质或肽)都可用作抗原。此外，抗原可源自重组或基因组DNA。技术人员将会理解，包含编码引发免疫反应的蛋白质的核苷酸序列或部分核苷酸序列的任何DNA因此编码如该术语在本文中使用的“抗原”。此外，本领域技术人员将会理解，抗原不需要仅由基因的全长核苷酸序列编码。显而易见的是，实施方案包括但不限于使用多于一种基因的部分核苷酸序列，并且这些核苷酸序列以多种组合排列以引发期望的免疫反应。此外，技术人员将会理解抗原根本不需要由“基因”编码。显而易见的是，抗原可被合成产生或者可源自生物样本。这样的生物样本可包括但不限于组织样本、肿瘤样本、细胞或生物流体。本文使用的术语“抗肿瘤作用”指的是可通过肿瘤体积的减少、肿瘤细胞数目的减少、转移数目的减少、预期寿命的增加或与癌性病症相关的各种生理症状的改善而表现的生物效应。“抗肿瘤作用”首先也可通过肽、多核苷酸、细胞和抗体预防肿瘤发生的能力来表现。术语“自体抗原(auto-antigen)”意指任何被免疫系统误认为是外源的自身抗原(self-antigen)。自体抗原包括但不限于细胞蛋白、磷蛋白、细胞表面蛋白、细胞脂质、核酸、糖蛋白，包括细胞表面受体。本文使用的术语“自身免疫性疾病”定义为由自身免疫反应引起的障碍。自身免疫性疾病为对自身抗原的不适当和过度反应的结果。自身免疫性疾病的实例包括但不限于艾迪生病、斑秃(alopeciagreata)、强直性脊柱炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性腮腺炎、克罗恩病、糖尿病(I型)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含嵌合抗原受体(“CAR”)的细胞，其中:所述细胞为骨髓浸润淋巴细胞(“MIL”)；所述CAR包含可结合配体的胞外结构域；和所述CAR包含可启动胞内信号传导级联的胞内结构域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.08 US 62/1899281.一种包含嵌合抗原受体(“CAR”)的细胞，其中:所述细胞为骨髓浸润淋巴细胞(“MIL”)；所述CAR包含可结合配体的胞外结构域；和所述CAR包含可启动胞内信号传导级联的胞内结构域。2.权利要求1的细胞，其中所述细胞为CD3+。3.权利要求1或2的细胞，其中所述细胞为CD4+。4.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述细胞为CD8+。5.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述细胞为CD45RO+。6.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述细胞为CD62L+。7.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述细胞为CXCR4+。8.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述细胞为4-1BB+。9.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述细胞为干扰素γ+。10.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述细胞为CD138+。11.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述细胞为CD33+。12.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述细胞为CD34-。13.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述配体为赘生细胞上表达的分子。14.权利要求13的细胞，其中所述配体为神经胶质瘤相关抗原、癌胚抗原(CEA)、β-人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白(AFP)、凝集素反应性AFP、甲状腺球蛋白、RAGE-1、MN-CAIX、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2(AS)、肠羧酸酯酶、突变hsp70-2、M-CSF、prostase、前列腺特异性抗原(“PSA”)、前列腺酸性磷酸酶(“PAP”)、NY-ESO-1、LAGE-1a、p53、prostein、PSMA、Her2/neu、存活素、端粒酶、前列腺癌肿瘤抗原-1(PCTA-1)、MAGE、ELF2M、嗜中性粒细胞弹性蛋白酶、肝配蛋白B2、CD22、胰岛素生长因子(IGF)-I、IGF-II、IGF-I受体、间皮素、MART-1、酪氨酸酶、GP100、HER-2/Neu/ErbB-2、CD19、CD20、CD37、MART-1/MelanA(“MART-I”)、gp100(Pmel17)、TRP-1、TRP-2、MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE-1、GAGE-2、p15、p53、Ras、BCR-ABL、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、EBVA、E6、E7、TSP-180、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6、RAGE、NY-ESO、p185erbB2、p180erbB-3、c-met、nm-23H1、PSA、TAG-72、CA19-9、CA72-4、CAM17.1、NuMa、K-ras、β-连环蛋白、CDK4、Mum-1、p15、p16、43-9F、5T4、791Tgp72、甲胎蛋白，β-HCG、BCA225、BTAA、CA125、CA15-3\CA27.29\BCAA、CA195、CA242、CA-50、CAM43、CD68\P1、CO-029、FGF-5、G250、Ga733\EpCAM、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB/70K、NY-CO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90\Mac-2...

【专利技术属性】
技术研发人员：IM博雷洛，S李，KA努南，DM帕多尔，
申请(专利权)人：约翰霍普金斯大学，
类型：发明
国别省市：美国,US