一种基底膜胶原材料及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种基底膜胶原材料及其制备方法与应用。本发明专利技术基底膜胶原材料的制备方法包括以下步骤：(1)取动物组织，进行清洗后灭菌；(2)清洗步骤(1)灭菌后的动物组织，再采用脱细胞液A对动物组织进行脱细胞处理；(3)清洗步骤(2)脱细胞处理后得到的动物组织，然后采用脱细胞液B对动物组织进行脱细胞处理；(4)将步骤(3)脱细胞处理所得动物组织置于PBS缓冲液或注射用水中，进行清洗处理；(5)将步骤(4)清洗处理后的动物组织冻干和定型，得到基底膜胶原材料。采用本发明专利技术方法制得的基底膜胶原材料具有良好的生物学功效，且其能修复创面，尤其可用于慢性难愈合创面修复。

Basement membrane collagen material, preparation method and application thereof

The invention relates to a substrate membrane collagen material and a preparation method and application thereof. The preparation method of the basement membrane collagen material comprises the following steps: (1) taking animal tissues and sterilization after cleaning; (2) cleaning step (1) the animal tissues after sterilization, and then using the acellular A to deactivate the animal tissue; (3) the cleaning step (2) the animal tissues obtained after the dehydration treatment, and then use the decellular cell The animal tissues were deactivated by liquid B; (4) the animal tissues obtained from step (3) deactivated cell treatment were placed in the PBS buffer or injection water for cleaning. (5) step (4) after the treatment of the frozen dry and stereotyped tissue of the animal tissue, the collagen material of the basement membrane was obtained. The collagen material of the basement membrane prepared by this method has good biological effect, and it can repair the wound, especially for the repair of chronic refractory wound.

【技术实现步骤摘要】
一种基底膜胶原材料及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种胶原材料及其制备方法与应用，具体涉及一种基底膜胶原材料及其制备方法与应用。
技术介绍
基底膜是细胞外基质特化而形成的一种柔软、坚韧的网膜结构，一般厚40-120nm，其位于上皮细胞和内皮细胞的基底部。基底膜将表皮基底细胞和位于其下层相连接的组织分隔开，向细胞提供结构支撑，并通过表皮-真皮间细胞因子调节，维持表皮-真皮间机能。基底膜同时还具有一定的渗透屏障作用。随着年龄增长及紫外线照射可引起皮肤基底膜的重叠与断裂，其与表皮、真皮之间的连接、信息传递受到阻碍，可引发多种肌肤烦恼，甚至皮肤病变。因此表皮-基底膜-真皮三者之间的顺畅循环沟通，是构成健康肌肤的重要因素，可以将其称之为“黄金循环”。基底膜作为真皮与表皮之间的重要连接结构，由外至内由胞膜层、透明层、致密层和致密下层组成，其主要成分是Ⅳ型胶原蛋白，Ⅶ型胶原蛋白，层粘连蛋白，弹性蛋白，巢蛋白以及部分细胞生长因子，比如血管内皮生长因子(VEGF，vascularendothelialgrowthfactor)、成纤维细胞生长因子(FGF，fibroblastgrowthfactor)、转化生长因子(TGF-β，transforminggrowthfactor-β)，粘多糖等，主要以蛋白为主。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种生物学功效良好、可用于创面修复的基底膜胶原材料及其制备方法与应用。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种基底膜胶原材料的制备方法，其包括以下步骤：(1)取动物组织，进行清洗后灭菌；(2)清洗步骤(1)灭菌后的动物组织，再采用脱细胞液A对动物组织进行脱细胞处理；(3)采用脱细胞液B对步骤(2)脱细胞处理后得到的动物组织进行脱细胞处理；(4)将步骤(3)脱细胞处理所得动物组织置于PBS缓冲液或注射用水中，进行清洗处理；；(5)将步骤(4)清洗处理后的动物组织冻干和定型，得到基底膜胶原材料。采用本专利技术上述方法制得的基底膜胶原材料具有良好的生物学功效，且其能修复创面，尤其可用于慢性难愈合创面修复。作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的优选实施方式，所述脱细胞液A中的溶质为碳酸钠、碳酸钾、EDTA三钠、EDTA四钠、磷酸钠、磷酸钾中的至少一种；所述脱细胞液B由酸溶液和盐溶液组成，所述酸溶液中的酸为HCl、磷酸、硫酸、醋酸、乳酸、甘醇酸、草酸中的至少一种；所述盐溶液中的盐为氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾中的至少一种。目前最常用的脱细胞方法是物理和化学处理相结合的方法，包括用搅拌或超声波，机械按摩或加压，冻结和解冻来破坏细胞膜，使细胞成分释放出来，这样更利于后续的化学洗涤剂的脱细胞清洗。物理方法本身一般不足以实现完全的脱细胞，化学方法更多的采用酶学处理方法，如某些胰蛋白酶，酶法在脱细胞的过程中，也可能会降解掉一些蛋白质，对本身的成分有一定的影响。这些方法会不同程度的影响改变组织器官基质生物化学组成成分，操作复杂，成本较高且脱细胞程度较低，易有细胞残留，本专利技术使用所述的脱细胞液进行脱细胞处理，操作简单，成本低，且得到的基底膜胶原材料中没有细胞和DNA残留，除去了主要免疫原性成分，生物相容性好，免疫原性低，能较好的调控细胞的黏附、迁移、增殖和分化。作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的更优选实施方式，所述脱细胞液A中的溶质由(a)碳酸钠和(b)EDTA三钠或EDTA四钠组成；所述脱细胞液B中，酸溶液中的酸为盐酸，盐溶液中的盐为氯化钠，或者所述脱细胞液B中，酸溶液中的酸为甘醇酸和HCl，盐溶液中的盐为硫酸钠与氯化钠。碳酸钠脱细胞效果好且成本低，盐酸脱细胞彻底，对细胞的杀伤力大；氯化钠为中性盐，对胶原等有效成分无损伤，成本低，易获得。作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的优选实施方式，所述脱细胞液A中，溶质的质量分数为2～10％；所述脱细胞液B中，酸的浓度为0.8～2mol/L，盐的浓度为0.8～4mol/L。作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的优选实施方式，所述脱细胞液A由下述质量百分比的组分组成：(a)碳酸钠5％和(b)EDTA三钠或EDTA四钠0.01％-1％；所述脱细胞液B由下述浓度的组分组成：盐酸1mol/L和氯化钠1mol/L。采用所述浓度的脱细胞液A和脱细胞液B，能在尽量减少破坏有效成分的前提下，使脱细胞最干净和完全。作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的更优选实施方式，所述脱细胞液A中，组分(b)的质量百分比为0.1％作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的优选实施方式，所述步骤(2)中，脱细胞液A与动物组织的体积比为4～30:1，采用脱细胞液A浸泡动物组织8～24小时；所述步骤(3)中，脱细胞液B与动物组织的体积比为4～30:1，采用脱细胞液B浸泡动物组织8～24小时。作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的更优选实施方式，所述步骤(2)中，脱细胞液A与动物组织的体积比为5:1；所述步骤(3)中，脱细胞液B与动物组织的体积比为5:1。作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的优选实施方式，所述脱细胞液A的pH值为7.2-7.4。作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的优选实施方式，所述动物组织为小肠、神经、膀胱、皮肤、心包或肾脏等；所述动物组织来源于猪、牛或羊等。本专利技术中，动物组织包括但不限于小肠、神经、膀胱、皮肤、心包或肾脏；动物组织的来源包括但不限于猪、牛或羊。作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的优选实施方式，所述步骤(1)中，采用消毒剂进行灭菌，所述消毒剂含有过氧乙酸、过氧化氢或乙醇溶液；所述消毒剂中，过氧乙酸的体积百分含量为0.05-1％，过氧化氢的体积百分含量为0.5-10％，乙醇的体积百分含量为5-30％；所述步骤(2)，采用清洗液进行清洗，所述清洗液为PBS溶液或注射用水，所述PBS溶液的pH值为7.0-7.4。作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的优选实施方式，所述消毒剂中，过氧乙酸的体积百分含量为0.1％，乙醇的体积百分含量为25％。作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的优选实施方式，所述步骤(1)中，消毒剂与动物组织的体积比为5-10：1，灭菌的时间为1-2h，灭菌的温度为20-25℃；更优选地，消毒剂与动物组织的体积比为5：1，灭菌的时间为1h，灭菌的温度为20℃。作为本专利技术所述基底膜胶原材料的制备方法的优选实施方式，所述步骤(2)中，清洗液与动物组织的体积比为20-40：1；更优选地，清洗液与动物组织的体积比为30：1。另外，本专利技术还提供了一种采用上述方法制备得到的基底膜胶原材料。本专利技术制得的基底膜胶原材料具有良好的生物学功效，其与周围组织具有良好的生物相容性，能够补充基底膜营养，改善表皮细胞生长微环境，增强新陈代谢，活化具有免疫活性的郎格汉氏细胞，诱发免疫系统和修护功能，形成网状结构，锁住水分，被皮肤吸收，起到天然保湿因子的作用；其还能促进吸收，滋润及形成一层保护膜，使肌肤更加保湿柔滑，使皮肤中的胶原蛋白活性加强，保持角质层水分以及纤维结构的完整性。此外，本专利技术制得的基底膜胶原材料能修复创面，尤其可用于慢性难愈合创面修复。最后，本专利技术还提供了上述基底膜胶原材料在制备治疗创面修复的药物、医疗器械或化妆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基底膜胶原材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取动物组织，进行清洗后灭菌；(2)清洗步骤(1)灭菌后的动物组织，再采用脱细胞液A对动物组织进行脱细胞处理；(3)采用脱细胞液B对步骤(2)脱细胞处理后得到的动物组织进行脱细胞处理；(4)将步骤(3)脱细胞处理所得动物组织置于PBS缓冲液或注射用水中，进行清洗处理；(5)将步骤(4)清洗处理后的动物组织冻干和定型，得到基底膜胶原材料。

【技术特征摘要】
1.一种基底膜胶原材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取动物组织，进行清洗后灭菌；(2)清洗步骤(1)灭菌后的动物组织，再采用脱细胞液A对动物组织进行脱细胞处理；(3)采用脱细胞液B对步骤(2)脱细胞处理后得到的动物组织进行脱细胞处理；(4)将步骤(3)脱细胞处理所得动物组织置于PBS缓冲液或注射用水中，进行清洗处理；(5)将步骤(4)清洗处理后的动物组织冻干和定型，得到基底膜胶原材料。2.如权利要求1所述的基底膜胶原材料的制备方法，其特征在于，所述脱细胞液A中的溶质为碳酸钠、碳酸钾、EDTA三钠、EDTA四钠、磷酸钠、磷酸钾中的至少一种；所述脱细胞液B由酸溶液和盐溶液组成，所述酸溶液中的酸为HCl、磷酸、硫酸、醋酸、乳酸、甘醇酸、草酸中的至少一种；所述盐溶液中的盐为氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾中的至少一种。3.如权利要求2所述的基底膜胶原材料的制备方法，其特征在于，所述脱细胞液A中的溶质由(a)碳酸钠和(b)EDTA三钠或EDTA四钠组成；所述脱细胞液B中，酸溶液中的酸为盐酸，盐溶液中的盐为氯化钠，或者所述脱细胞液B中，酸溶液中的酸为甘醇酸和HCl，盐溶液中的盐为硫酸钠与氯化钠。4.如权利要求2～3任一项所述的基底膜胶原材料的制备方法，其特征在于，所述脱细胞液A中，溶质的质量分数为2～10％；所述脱细胞液B中，酸的浓度为0.8～2mol/L，盐的浓度为0.8～4...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨伟红，程飚，王祥林，耿梦梦，晏兰，苏玉天，刘江辉，
申请(专利权)人：广州昕生医学材料有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44