免疫原性降钙素原前体肽制造技术

本发明专利技术涉及由MHC呈递的携带抗原降钙素原前体的T细胞表位的肽的组合。这些肽可用于抗肿瘤免疫治疗。

Immunogenic procalcitonin proactive peptide

The present invention relates to a combination of peptides submitted by MHC to carry T cell epitopes of antigen procalcitonin precursors. These peptides can be used for antitumor immunotherapy.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫原性降钙素原前体肽
本专利技术涉及降钙素原前体(ppCT)表位的组合及其在抗肿瘤免疫治疗中的用途。
技术介绍
疫苗接种或肽免疫治疗是目前在癌症预防或治疗领域中非常感兴趣的治疗方法。原理是基于通过再生由细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别的肿瘤抗原的T细胞表位的肽的免疫，所述CTL在消除其表面表达这些抗原的癌细胞方面起主要作用。应该记得，CTL不识别整个蛋白质抗原，而是识别在各种细胞表面表达的主要组织相容性复合物(MHC)分子呈递的蛋白质抗原的肽片段。这些是构成T细胞表位的肽片段。这些肽的呈递来自称为“抗原加工”的复杂过程，其涉及三个主要步骤：-通过称为蛋白酶体的多酶复合物使抗原胞质降解；-通过TAP转运蛋白使由这种降解产生的肽在内质网(ER)中易位；-将这些肽与MHC相连，以形成稳定的肽/MHC复合物，所述复合物被输出至细胞表面。由I类主要组织相容性复合物(MHCI)呈递的表位一般具有8-11个氨基酸(aa)，且被代表细胞毒性反应的主要组分的CD8+T细胞识别。由II类主要组织相容性复合物(MHCII)呈递的表位一般具有13-18个氨基酸，且被CD4+T细胞识别。鉴定这些表位是开发抗肿瘤免疫治疗组合物的必要步骤。降钙素原前体由CALCA基因编码，其也编码神经肽(降钙素基因相关肽)的α形式(α-CGRP)。该基因包含5个内含子和6个外显子，其主要转录物是选择性组织特异性剪接的对象。外显子连接1、2、3和4在甲状腺C细胞中产生降钙素mRNA，而外显子1、2、3、5和6在神经元中产生α-CGRPmRNA(MORRIS等,Nature,308,746-8,1984)。降钙素mRNA编码141个氨基酸的前体(降钙素原前体)，其包含25个残基的N-末端信号序列，它的切割产生116aa的降钙素原。降钙素原包含57aa的N末端区，随后是成熟的32aa的降钙素，21aa的C末端肽，钙抑肽(ROSENFELD等,Nature,304,129-35,1983)。α-CGRP的成熟形式是37aa的肽，其具有血管扩张剂作用并且在大量组织中发现(ZAIDI等,CritRevClinLabSci,28,109-74,1990)。降钙素原前体信号序列也发现于激素原前体α-CGRP中。降钙素的生理作用主要是在“钙压力”阶段，例如生长、怀孕和哺乳期间保护骨骼。甲状腺髓样癌(MTC)细胞和某些肺癌也大量产生降钙素(COOMBES等,Lancet,1,1080-3,1974；MILHAUD等.,Lancet,1,462-3,1974)。高水平的血浆降钙素是这些肿瘤的诊断和预后标志物。已提出使用成熟降钙素诱导的树突状细胞用于MTC免疫治疗(SCHOTT等,CancerImmunolImmunother,51,663-8,2002)。最近，专利技术人的团队已经鉴定了一个衍生自降钙素原前体信号肽的10个氨基酸的抗原肽。该肽对应于一个在内质网中通过独立于蛋白酶体和TAP转运蛋白的机制加工的表位(专利申请WO2009010874)。专利技术人现在已经鉴定了参与诱导抗肿瘤免疫反应的降钙素原前体的其他区域，并且表明不同表位的组合允许更好的抗肿瘤反应。
技术实现思路
本专利技术涉及包含至少两个选自以下的肽序列的组合物：-MGFQKFSPFLALSIL(SEQIDNO:1),下文也称为ppCT1-15；-EREGSSLDSPRSKRC(SEQIDNO:2),下文也称为ppCT71-85；-GNLSTCMLGTYTQDF(SEQIDNO:3),下文也称为ppCT86-100；-FLALSILVL(SEQIDNO:4),下文也称为ppCT9-17；-VLLQAGSLHA(SEQIDNO:5),下文也称为ppCT16-25；-LLAALVQDYV(SEQIDNO:6),下文也称为ppCT50-59；-CMLGTYTQDF(SEQIDNO:7),下文也称为ppCT91-100；-EARLLLAALVQDYVQ(SEQIDNO:8),下文也称为ppCT45-60；-MGFQKFSPFL(SEQIDNO:9),下文也称为ppCT1-10；-FQKFPFLAL(SEQIDNO:10),下文也称为ppCT3-12；-KFSPFLALSI(SEQIDNO:11),下文也称为ppCT5-14；-FSPFLALSIL(SEQIDNO:12),下文也称为ppCT6-15；-NLSTCMLGTY(SEQIDNO:13),下文也称为ppCT87-96；-LSTCMLGTYT(SEQIDNO:14),下文也称为ppCT88-97；-YTQDFNKFHT(SEQIDNO:15),下文也称为ppCT96-105；-TLSEDEARLL(SEQIDNO:16),下文也称为ppCT41-50；-ALVQDYVQMK(SEQIDNO:17),下文也称为ppCT53-62；和-YVQMKASEL(SEQIDNO:18),下文也称为ppCT58-66。在根据本专利技术的组合物中，所述序列的每一个以8-15个氨基酸的肽的形式呈现，或包含于多表位嵌合多肽中。嵌合多肽在本文中定义为天然不存在的一系列氨基酸。如本文所理解，嵌合多肽可以包含选自SEQIDNO：1-18序列的至少两个序列，在所述多肽中，所述序列相邻、由1-5个氨基酸组成的连接元件相连，或由包含不是降钙素原前体的蛋白质的表位的序列分开。因此，根据本专利技术的组合物是多表位的，优选在至少一些个体中能够产生多特异性反应。根据本专利技术的一个优选实施方案，组合物包含至少一个与在内质网中通过独立于蛋白酶体和TAP转运蛋白的机制加工的表位对应的序列，例如SEQIDNO：4和5的序列。还更优选地，组合物进一步包含至少一个与在内质网中通过独立于蛋白酶体和TAP转运蛋白的机制加工的表位对应的序列，例如SEQIDNO：3和6的序列。根据本专利技术的组合物优选包含SEQIDNO：6的序列，所述序列是由该序列组成的肽的形式，或包含于如上定义的嵌合多肽中。根据本专利技术的一个具体实施方案，组合物包含9-15个氨基酸的肽的混合物。该混合物可以冷冻干燥或悬浮于适于药物用途的溶液中。根据本专利技术的另一个优选的实施方案，组合物包含嵌合多肽，所述嵌合多肽包含选自SEQIDNO：1-18序列的至少两个序列，所述序列相邻、由1-5个氨基酸组成的连接元件相连，或由包含不是降钙素原前体的蛋白质的表位的序列分开。如果适用，嵌合多肽可以包含相同序列的多个拷贝。此外，在根据本专利技术的嵌合多肽中，至少免疫原性序列的一部分可以插入百日咳杆菌(Bordetellapertussis)的腺苷酸环化酶(AC)中。由于AC受体与CD11b相同，且由于树突状细胞表达CD11b受体，这种结构能够直接将免疫原性肽引导向树突状细胞(DADAGLIO等,Int.Immunol,15,1423-1430,2003)。根据本专利技术的组合物任选地包含至少一个不同于之前序列的其他肽序列，尤其是能够结合HLA分子(例如HLA-B7)的序列，例如以下序列之一：SPFLALSIL(SEQIDNO:19或ppCT7-15)、EARLLLAAL(SEQIDNO:20或ppCT46-54)，和/或SPRSKRCGNL(SEQIDNO:21或ppCT79-88)，所述肽本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其特征在于，它包含选自SEQ ID NO：1‑18序列的至少两个肽序列，所述序列的每一个以8‑15个氨基酸的肽的形式存在或包含于多表位嵌合多肽中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.09 EP 15176174.91.一种组合物，其特征在于，它包含选自SEQIDNO：1-18序列的至少两个肽序列，所述序列的每一个以8-15个氨基酸的肽的形式存在或包含于多表位嵌合多肽中。2.权利要求1所述的组合物，其特征在于，它包含8-15个氨基酸的肽的混合物。3.权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，它包含嵌合多肽，所述嵌合多肽包含选自SEQIDNO：1-18序列的至少两个序列，所述序列相邻、由1-5个氨基酸组成的连接元件相连，或由包含不是降钙素原前体的蛋白质的表位的序列分开。4.前述权利要求任一项所述的组合物，其特征在于，它包含选自SEQIDNO：1-7序列的至少两个肽序列。5.前述权利要求任一项所述的组合物，其特征在于，它包含选自SEQIDNO：1-7序列的至少三个肽序列。6.前述权利要求任一项所述的组合物，其特征在于，它包含选自SEQIDNO：4和5序列的至少一个序列和SEQIDNO：6的序列。7.前述权利要求任一项所述的组合物，其特征在于，它包含选自以下的肽序列的组合：序列SEQIDNO：1、2、3、5和6的组合、序列SEQIDNO：1、3、4、5和6的组合、序列SEQIDNO：1、2、5和6的组合、序列SEQIDNO：1、3、5和6的组合，和序列SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·玛米舒艾布，A·迪尔格奥，
申请(专利权)人：古斯塔夫鲁西研究院，
类型：发明
国别省市：法国,FR