一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法技术

一种超高效合相色谱‑串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法，其特征在于：用0.5mol/L的盐酸水溶液对样品进行提取，并用二氯甲烷反萃取，以超高效合相色谱‑串联质谱法测定烟草中2,4‑滴，2,4,5‑涕和麦草畏农药残留量。本发明专利技术的方法克服了现有技术样品处理方法的不足，针对烟草样品优化了样品前处理方法和仪器检测条件，与现有技术相比本发明专利技术方法具有如下优良效果：本发明专利技术方法样品前处理过程简单快速，无需衍生化，绿色环保，并具有操作准确、灵敏度高及重复性好的优点。

Determination of three phenoxy carboxylic pesticide residues in tobacco by ultra performance high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry

A method for the determination of three phenoxy carboxylic pesticides residues in tobacco by super high performance chromatograph tandem mass spectrometry is characterized in that the samples are extracted with 0.5mol/L hydrochloric acid solution and extracted with dichloromethane, and the 2,4 drops, 2,4,5 and wheat straw in tobacco are determined by super high efficiency chromatography tandem mass spectrometry. The residue of pesticide residues was feared. The method of the present invention overcomes the shortage of the existing technology sample processing method, optimizes the sample pretreatment method and the instrument detection conditions for the tobacco samples. Compared with the existing technology, the invention has the following excellent effects: the method of sample pretreatment is simple and fast, without derivatization, green and environmental protection, and has the advantages of the method. It has the advantages of accurate operation, high sensitivity and good repeatability.

【技术实现步骤摘要】
一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法
本专利技术属于烟草及烟草制品中农药残留的理化检验
，主要涉及烟草及烟草制品中2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏等三种氯苯氧羧酸类农药残留量的测定方法。
技术介绍
苯氧羧酸类除草剂对作物的安全性受环境条件、作物生育期的影响较大，应用不当可能会产生较重的药害。在使用过程中，发现对人、畜有一定的内分泌扰乱作用，随着该类除草剂使用量及使用范围的日益增大，其在作物中的残留及对人类健康和环境造成的危害也越来越为人们所关注。我国和其他各国都制定了严格的残留限量,如日本规定2,4,5-涕不得检出,国际食品法典委员会，日本等制定的2,4-滴在大多农产品中的限量为0.05mg/kg。关于对于土壤、水、大米、水稻和纺织品中苯氧羧酸类残留测定的报道较多，而且苯氧羧酸类除草剂多残留分析的报道多采用气相色谱或气质联用测定。由于此类化合物极性较大、稳定性差、不易气化，需用重氮甲烷或三氟化硼丁醇衍生后才能用气相色谱或气质联用法进行测定【分析化学，2006，34(12),1733-1736;色谱，2008，26(1),116-118;分析科学学报，2010，26(1),47-50】。衍生化试剂重氮甲烷和三氟化硼丁醇毒性较强，且整个操作步骤较繁琐、分析成本较高、单个样品的检测周期较长。由于LC-MS/MS法的选择性极大提高，具有很好的抗基质干扰能力，且具备较为丰富的定性和定量信息，灵敏度较高，使得样品前处理过程大大简化。由于基质中某些干扰组分的存在会使待测组分离子生成的速度同标准样品相比有显著不同，使得信号响应值产生较大变异，从而影响检出限、定量限、准确度和精密度等。在样品分析中通常采用优化色谱‒质谱分析条件、空白基质匹配标准校正法及内标法对可能的基质效应进行消除或补偿。本专利技术采用同位素内标法进行定量，一方面可以减少前处理所引入的误差，另一方面也能够补偿基质效应对定量分析结果的影响。超高效合相色谱以超临界流体为流动相，既可以分析气相色谱难以气化的高沸点、低挥发性样品，又具有比高效液相色谱更高的选择性和更快的分析速度。由于其所使用的色谱柱的填料粒径小于常规的超临界色谱柱填料粒径，其分离效率和分离度优于常规超临界色谱，同时流动相以无毒的CO2为主，节约了有机溶剂。超高效合相色谱与串联质谱联用大大提高了分析的灵敏度和分离效率。尚未见到报道用超高效合相色谱-串联质谱法（UPC2-MS/MS）测定烟草中的苯氧乙酸类除草剂。
技术实现思路
：本专利技术的目的旨在克服现有技术缺陷，提供一种快速、高效、绿色、无需衍生化等繁琐过程，直接以超高效合相色谱-串联质谱测定烟草及烟草制品中2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏等三种苯氧羧酸类农药残留量的测定方法，该方法能快速、准确检测烟草及烟草制品中三种苯氧羧酸类农药残留量，方法简便、快速、净化效果较好,各项技术指标均符合残留检测的要求，测定结果准确、测定干扰少、有机溶剂消耗少。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：一种烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的测定方法，用盐酸水溶液对样品进行浸提，并用CH2Cl2进行反萃取，以合相色谱-串联质谱直接测定烟草及烟草制品中2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏农药残留量。具体步骤如下：a、样品的提取：称取1.0g样品，置于50mL具塞离心管中，加入10mL0.5moL/L的盐酸水溶液和10mL的CH2Cl2，并加入100μL混合内标工作液，涡旋振荡15min。移取1mL下层有机相，氮吹近干用甲醇复溶，进UPC2-MS/MS检测；b、混合内标工作溶液：分别称取三种苯氧羧酸类农药的氘代内标标准品各0.01g到10mL容量瓶中，用甲醇稀释得到浓度为10.0μg/mL的混合内标工作溶液；c、标准工作溶液制备：分别称取0.01g三种农药(2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏)标准品，用甲醇稀释并最终配制成具有浓度梯度的各种农药的混合标准工作溶液；配制方式如下：分别称取0.01g2,4-滴、2,4,5-涕和麦草畏三种农药标准品至不同的10mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，制得1000μg/mL的标准储备液；分别移取以上三种农药单一标准储备液100μL于10mL容量瓶中，用甲醇稀释定容至刻度，配得混合标准储备液（10.0μg/mL）；分别移取混合标准储备液25μL,50μL,100μL,250μL,500μL及1000μL到6个10mL容量瓶中并加入100μL的混合内标工作溶液，用甲醇定容；各标准工作溶液的浓度分别为0.025μg/mL,0.05μg/mL,0.1μg/mL,0.25μg/mL,0.5μg/mL,1.0μg/mL。d、合相色谱-串联质谱测定：吸取以上配制好的不同浓度的农药标准工作溶液，注入合相色谱-串联质谱仪，合相色谱条件为：色谱柱：ACQUITYUPC2HSSC18柱(100mm×3.0mm,1.8μm)；背压：15.2MPa;柱温：40℃；进样量：2μL；补偿溶剂：0.1%甲酸甲醇溶液，流速为0.2mL/min;流动相分别为超临界CO2（A相）和甲醇（助溶剂）（B相）；流动相流速：2.0mL/min;梯度洗脱程序：0.0～0.4min,99%A;0.4～2.0min,99%A～96%A;2.0～3.0min,96%A～94%A;3.0～4min,94%A～85%A;4.0～5.5min,85%A～99%A；5.5～7.0min,99%A。质谱扫描方式：负离子扫描；离子源：电喷雾电离源(ESI)；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量：800L/h；停留时间：30ms；毛细管电压：2.4kV；采集模式:MRM。MRM参数见表1。e、农药残留量测定结果的计算以内标法进行农药残留量的定量分析，即以目标物及其对应的同位素内标的定量离子对峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，相关系数大于等于0.995,对提取后的样品进行测定，测得检出分析物和内标的定量离子对农药的色谱峰面积，代入标准曲线，求得样品中的2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏等农药的残留量。本专利技术的方法克服了现有技术样品处理方法的不足，针对烟草样品优化了样品前处理方法和仪器检测条件，与现有技术相比具有如下优良效果：（1）专利技术方法样品前处理过程简单，大大缩短了每个烟草样品的萃取前处理时间。行业标准《YC/T181-2004烟草及烟草制品有机氯除草剂农药残留量的测定气相色谱法》，该标准方法采用60mL二氯甲烷萃取，以三甲基亲氧化硫溶液甲酯衍生化，气相色谱-质谱测定，其前处理过程复杂费时，不利于高通量样品快速检测，且衍生化过程不确定性很大，结果重复性较差。本专利技术方法将烟末用10mL的盐酸水溶液提取后用少量的CH2Cl2萃取，避免了样品浓缩、净化、衍生等过程造成的待测农药组分损失，又使实验操作更加简单、快捷，减少了大量有机溶剂的使用。（2）行业标准《YC/T181-2004烟草及烟草制品有机氯除草剂农药残留量的测定气相色谱法》使用的衍生化试剂对人体健康有害，从而限制了它们的使用；本专利技术无需衍生化从而使前处理过程变得比较简单。（3）本专利技术采用超高效合相色谱和串联质谱联用，与液相色谱-串联质谱法相比，定量更加准确、同时也提高了灵敏度及重本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种超高效合相色谱‑串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法，其特征在于：用盐酸水溶液对样品进行浸提，并用CH2Cl2进行反萃取，以合相色谱‑串联质谱直接测定烟草中2,4‑滴，2,4,5‑涕和麦草畏残留量，具体步骤如下：a、样品的提取：称取1.0 g样品，置于50 mL具塞离心管中，加入10 mL 0.5 mol/L的盐酸水溶液和10 mL的CH2Cl2，并加入100 μL混合内标工作液，涡旋振荡15 min，移取1 mL下层有机相，氮吹近干用1 mL甲醇复溶，进UPC

【技术特征摘要】
1.一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法，其特征在于：用盐酸水溶液对样品进行浸提，并用CH2Cl2进行反萃取，以合相色谱-串联质谱直接测定烟草中2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏残留量，具体步骤如下：a、样品的提取：称取1.0g样品，置于50mL具塞离心管中，加入10mL0.5mol/L的盐酸水溶液和10mL的CH2Cl2，并加入100μL混合内标工作液，涡旋振荡15min，移取1mL下层有机相，氮吹近干用1mL甲醇复溶，进UPC2-MS/MS检测；b、混合内标工作溶液：分别称取0.01g三种苯氧羧酸类农药的氘代内标标准品到10mL容量瓶中，用甲醇稀释得到浓度为10.0μg/mL的混合内标工作溶液；c、标准工作溶液制备：分别称取0.01g2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏三种标准品，用甲醇稀释并最终配制成具有浓度梯度的含三种农药的混合标准工作溶液；d、合相色谱-串联质谱测定：吸取以上配制好的不同浓度的农药标准工作溶液，注入合相色谱-串联质谱仪；合相色谱条件为：色谱柱：ACQUITYUPC2HSSC18柱，规格100mm×3.0mm,1.8μm；背压：15.2MPa;柱温：40℃；进样量：2μL；补偿溶剂：0.1%甲酸甲醇溶液，流速为0.2mL/min；流动相分别为A相：超临界CO2，B相：甲醇；流动相流速：2.0mL/min；梯度洗脱；质谱扫描方式：负离子扫描；离子源：电喷雾电离源(ESI)；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量：800L/h；停留时间：30ms；毛细管电压：2.4kV；采集模式：MRM；e、农药残留...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨飞，唐纲岭，刘珊珊，边照阳，邓惠敏，李中皓，范子彦，王颖，
申请(专利权)人：国家烟草质量监督检验中心，
类型：发明
国别省市：河南,41