一种独蒜兰的组织培养扩繁方法技术

本发明专利技术公开了一种独蒜兰的组织培养扩繁方法，包括外植体的选择步骤、外植体的消毒步骤、播种的步骤、继代培养的步骤、生根培养的步骤、炼苗、驯化移栽的步骤。本发明专利技术利用植物组织培养技术，克服了独蒜兰传统分株繁殖缓慢，种子胚发育不全，自然条件下种子很难独立发育成完整植株等问题，同时满足了大量繁殖的，减少野生资源的采挖，保护野生资源。

Tissue culture propagation method of a kind of garlic orchid

The invention discloses a method for the tissue culture and propagation of the single garlic orchid, including the selection steps of the explant, the step of sterilizing the explant, the step of sowing, the steps of subculture, the steps of the rooting culture, the steps of the cultivation and the domestication and transplanting. The invention uses plant tissue culture technology to overcome the problems of slow propagation of traditional ramet, poor development of seed embryo, and hard seed development into a complete plant in natural conditions, at the same time, it satisfies a large number of breeding, reduces the mining of wild resources and protects the wild resources.

【技术实现步骤摘要】
一种独蒜兰的组织培养扩繁方法
本专利技术涉及一种组织培养育苗技术，尤其涉及一种独蒜兰的组织培养扩繁方法。
技术介绍
独蒜兰Pleionebulbocodioides(Franch.)Rolfe，兰科独蒜兰属，地生或附生草本。生长于海拔1100-3500米的林下或林缘多石地上或苔藓覆盖的岩石上，也常见于草坡稍阴蔽的砾石地上。主要分布在中国四川西南部(越西、盐源、石棉、西昌、木里)、贵州西部至北部(凯里、印江、雷山、贵阳、梵净山、盘县、安龙、望谟、纳雍)、云南西北部至东南部(贡山、维西、丽江、大理、漾濞、永宁、蒙自、文山)和西藏东南部(察瓦龙)，缅甸北部也有分布。以根茎入药，具有清热解毒、消肿散节、化痰止咳的功效，多用于气喘咳嗽及关节肿胀，毒蛇咬伤的治疗等。独蒜兰花色独特漂亮，具有较高的观赏价值，花葶从无叶的老假鳞茎基部发出，直立，顶端具一花，花紫色、淡紫色、粉红色或有时近白色，唇瓣上具有紫色或深红色斑，花期4-5月，果期9-10月。目前市场上流通的独蒜兰多为野生，少数为人工栽培；独蒜兰繁殖多为分株繁殖，在自然环境中花粉授粉率较小，长出果荚的数量也较少，种子胚发育不全，只能在无菌条件下播种于培养基中进行组织培养。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种独蒜兰的组织培养扩繁方法。采用本专利技术的生根培养基进行组织培养生根阶段的优点在于克服种子胚发育不全，自然环境下繁殖率低等问题；能够有效的促进根系生长，提高独蒜兰种苗繁育的速度及繁育数量，从母本源头控制种质的稳定性，保证种苗质量，实现独蒜兰优质种子种苗的工厂化生产，满足观赏、药用需求，减少野生资源泛滥采挖的情况。本专利技术的目的采用如下技术方案实现：一种独蒜兰的组织培养扩繁方法，包括，外植体的选择步骤：选择健康的3-4年的母本植株，在4月中旬独蒜兰开花期间对独蒜兰进行人工授粉，让其长出果荚，经过4-6个月精心培育，待果荚成熟时，即外种壳黄绿色，完好无裂，然后将其采摘放至冰箱在3-7℃的环境下保存1周；外植体的消毒步骤：取出果荚，将果荚用洗洁精水或洗衣粉水浸泡10-15min，用毛刷刷净种壳表面，并用自来水冲洗8-10min；将其放到洁净烧杯，移至接种室，在无菌操作台上采用医用酒精与升汞进行消毒，最后放到超净工作台上的无菌盘里备用；播种的步骤：将消毒好的果荚用冷却解剖刀和镊子解剖开露出白色丝状的胚乳，即果粉；将果粉撒到初代培养基上，消毒瓶盖后封好盖子，转到培养室进行培养，培养30-45天，种子开始萌发；继代培养的步骤：萌发的独蒜兰生长50-70天，独蒜兰种苗长到2-3cm高时称之为一级母瓶，此时将一级瓶苗在无菌操作台上转到继代培养基中培养70天，独蒜兰种苗长至5-6cm时称为二级母瓶；生根培养的步骤：将生长70天的二级母瓶在无菌操作台上转至生根培养基中生根培养90-120天；炼苗、驯化移栽的步骤：生根瓶苗在培养室培养完后，生根良好，苗粗壮，将其移到室外环境中放置15-20天，避免强光直射，让其适应外界环境；打开瓶盖放置3-5天，将苗倒出洗净培养基，用稀释到800-1000倍的多菌灵浸泡独蒜兰瓶苗根部5-10min，洗净阴干水分，将其移栽到基质中进行驯化。进一步地，在外植体的选择步骤中，选择健康的3年的母本植株。进一步地，在外植体的消毒步骤中，在无菌操作台上采用医用酒精与升汞进行消毒的具体操作如下：先用75％医用酒精浸泡30-60s，浸泡期间用镊子不断搅拌使其消毒彻底，无菌水冲洗3-4次；最后用0.2％的升汞消毒4-6min，无菌水冲洗4-5次，放到超净工作台上的无菌盘里备用。进一步地，在播种的步骤中，所述培养室内的培养条件如下：温度为24℃-26℃，光照强度为2000-2500lx,光照时间为10-12小时/天。进一步地，在播种的步骤中，所述初代培养基的成分为硝酸钾1890-1900mg/L，硝酸铵1640-1650mg/L，二水氯化钙440-445mg/L，七水硫酸镁370-375mg/L，磷酸二氢钾160-170mg/L，碘化钾0.8-0.83mg/L，硼酸6.0-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-23.0mg/L，七水硫酸锌8.6-9.0mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.028mg/L，氯化钴0.028-0.03mg/L，硫酸亚铁27.5-29mg/L，乙二胺四乙酸23-25mg/L，肌醇96-100mg/L，烟酸0.2-0.3mg/L，盐酸吡哆醇0.25-0.35mg/L，盐酸硫胺素0.2-0.3mg/L，甘氨酸0.8-0.9mg/L，蔗糖2g/L、琼脂粉4.8g/L；所述初代培养基用酸碱指示剂将培养基的pH调至5.8-6.0。进一步地，在继代培养的步骤中，所述萌发的独蒜兰在光照强度为2000-2500lx,光照时间为10-12小时/天的条件下生长50-70天。进一步地，在继代培养的步骤中，所述继代培养基的成分为硝酸钾1890-1900mg/L，硝酸铵1640-1650mg/L，二水氯化钙440-445mg/L，七水硫酸镁370-375mg/L，磷酸二氢钾160-170mg/L，碘化钾0.8-0.83mg/L，硼酸6.0-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-23.0mg/L，七水硫酸锌8.6-9.0mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.028mg/L，氯化钴0.028-0.03mg/L，硫酸亚铁27.5-29mg/L，乙二胺四乙酸23-25mg/L，肌醇96-100mg/L，烟酸0.2-0.3mg/L，盐酸吡哆醇0.25-0.35mg/L，盐酸硫胺素0.2-0.3mg/L，甘氨酸0.8-0.9mg/L，还添加0.2mg/L的吲哚丁酸、1.8mg/L的6-苄基腺嘌呤、3g/L的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁、0.3g/L的活性碳粉；所述继代培养基用酸碱指示剂将培养基的PH调至5.8-6.0。其中，土豆汁的制备过程如下：取35g土豆倒入1L无菌水中粉碎，形成含土豆粉的土豆汁。进一步地，在生根培养的步骤中，所述生根培养基的成分为硝酸钾3790-3800mg/L，硝酸铵3290-3300mg/L，二水氯化钙870-880mg/L，七水硫酸镁730-740mg/L，磷酸二氢钾330-340mg/L，碘化钾1.62-1.66mg/L，硼酸12.0-12.44mg/L，四水硫酸锰44.6-46mg/L，七水硫酸锌17.2-18mg/L，钼酸钠0.4-0.5mg/L，五水硫酸铜0.05-0.06mg/L，氯化钴0.05-0.06mg/L，硫酸亚铁55-58mg/L，乙二胺四乙酸46-50mg/L，肌醇192-200mg/L，烟酸0.4-0.6mg/L，盐酸吡哆醇0.5-0.7mg/L，盐酸硫胺素0.4-0.6mg/L，甘氨酸1.6-1.8mg/L，还添加2.0mg/L的吲哚丁酸、0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤、3g/L的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁、25g/L的香蕉汁、0.3g/L的活性碳粉；所述生根培养基用酸碱指示剂将培养基的PH调至5.8-6.0。其中，土豆汁的制备过程如下：取35g土豆倒入1L无菌水中粉碎，形成含土豆粉的土豆汁。香蕉汁的制备过本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种独蒜兰的组织培养扩繁方法，其特征在于包括，外植体的选择步骤：选择健康的3‑4年的母本植株，在4月中旬独蒜兰开花期间对独蒜兰进行人工授粉，让其长出果荚，经过4‑6个月精心培育，待果荚成熟时，即外种壳黄绿色，完好无裂，然后将其采摘放至冰箱在3‑7℃的环境下保存1周；外植体的消毒步骤：取出果荚，将果荚用洗洁精水或洗衣粉水浸泡10‑15min，用毛刷刷净种壳表面，并用自来水冲洗8‑10min；将其放到洁净烧杯，移至接种室，在无菌操作台上采用医用酒精与升汞进行消毒，最后放到超净工作台上的无菌盘里备用；播种的步骤：将消毒好的果荚用冷却解剖刀和镊子解剖开露出白色丝状的胚乳，即果粉；将果粉撒到初代培养基上，消毒瓶盖后封好盖子，转到培养室进行培养，培养30‑45天，种子开始萌发；继代培养的步骤：萌发的独蒜兰生长50‑70天，独蒜兰种苗长到2‑3cm高时称之为一级母瓶，此时将一级瓶苗在无菌操作台上转到继代培养基中培养70天，独蒜兰种苗长至5‑6cm时称为二级母瓶；生根培养的步骤：将生长70天的二级母瓶在无菌操作台上转至生根培养基中生根培养90‑120天；炼苗、驯化移栽的步骤：生根瓶苗在培养室培养完后，生根良好，苗粗壮，将其移到室外环境中放置15‑20天，避免强光直射，让其适应外界环境；打开瓶盖放置3‑5天，将苗倒出洗净培养基，用稀释到800‑1000倍的多菌灵浸泡独蒜兰瓶苗根部5‑10min，洗净阴干水分，将其移栽到基质中进行驯化。...

【技术特征摘要】
1.一种独蒜兰的组织培养扩繁方法，其特征在于包括，外植体的选择步骤：选择健康的3-4年的母本植株，在4月中旬独蒜兰开花期间对独蒜兰进行人工授粉，让其长出果荚，经过4-6个月精心培育，待果荚成熟时，即外种壳黄绿色，完好无裂，然后将其采摘放至冰箱在3-7℃的环境下保存1周；外植体的消毒步骤：取出果荚，将果荚用洗洁精水或洗衣粉水浸泡10-15min，用毛刷刷净种壳表面，并用自来水冲洗8-10min；将其放到洁净烧杯，移至接种室，在无菌操作台上采用医用酒精与升汞进行消毒，最后放到超净工作台上的无菌盘里备用；播种的步骤：将消毒好的果荚用冷却解剖刀和镊子解剖开露出白色丝状的胚乳，即果粉；将果粉撒到初代培养基上，消毒瓶盖后封好盖子，转到培养室进行培养，培养30-45天，种子开始萌发；继代培养的步骤：萌发的独蒜兰生长50-70天，独蒜兰种苗长到2-3cm高时称之为一级母瓶，此时将一级瓶苗在无菌操作台上转到继代培养基中培养70天，独蒜兰种苗长至5-6cm时称为二级母瓶；生根培养的步骤：将生长70天的二级母瓶在无菌操作台上转至生根培养基中生根培养90-120天；炼苗、驯化移栽的步骤：生根瓶苗在培养室培养完后，生根良好，苗粗壮，将其移到室外环境中放置15-20天，避免强光直射，让其适应外界环境；打开瓶盖放置3-5天，将苗倒出洗净培养基，用稀释到800-1000倍的多菌灵浸泡独蒜兰瓶苗根部5-10min，洗净阴干水分，将其移栽到基质中进行驯化。2.如权利要求1所述的独蒜兰的组织培养扩繁方法，其特征在于，在外植体的选择步骤中，选择健康的3年的母本植株。3.如权利要求1所述的独蒜兰的组织培养扩繁方法，其特征在于，在外植体的消毒步骤中，在无菌操作台上采用医用酒精与升汞进行消毒的具体操作如下：先用75％医用酒精浸泡30-60s，浸泡期间用镊子不断搅拌使其消毒彻底，无菌水冲洗3-4次；最后用0.2％的升汞消毒4-6min，无菌水冲洗4-5次，放到超净工作台上的无菌盘里备用。4.如权利要求1所述的独蒜兰的组织培养扩繁方法，其特征在于，在播种的步骤中，所述培养室内的培养条件如下：温度为24℃-26℃，光照强度为2000-2500lx,光照时间为10-12小时/天。5.如权利要求1所述的独蒜兰的组织培养扩繁方法，其特征在于，在播种的步骤中，所述初代培养基的成分为硝酸钾1890-1900mg/L，硝酸铵1640-1650mg/L，二水氯化钙440-445mg/L，七水硫酸镁370-375mg/L，磷酸二氢钾160-170mg/L，碘化钾0.8-0.83mg/L，硼酸6.0-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-23.0mg/L，七水硫酸锌8.6-9.0mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.028mg/L，氯化钴0.028-0.03mg/L，硫酸亚铁27.5-29mg/L，乙二胺四乙酸23-25mg/L，肌醇96-100mg/L，烟酸0...

【专利技术属性】
技术研发人员：许冬瑾，严新，顾晓波，
申请(专利权)人：康美药业文山药材种植管理有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53