一株具诱导大豆抗大豆胞囊线虫的沙阿霉素链霉菌及应用制造技术

本发明专利技术涉及一株处理大豆种子后具诱导大豆产生对大豆胞囊线虫抗性的沙阿霉素链霉菌(Streptomyces zaomyceticus)Snea182的培养方法及其应用。本发明专利技术涉及的放线菌菌株Snea182已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。将菌株按常规液体发酵培养后，可以用该菌的代谢产物，开发出处理大豆种子的种子处理剂，经过处理的大豆种子可以诱导大豆产生对大豆胞囊线虫的抗性。本发明专利技术的沙阿霉素链霉菌Snea182代谢物处理大豆种子后可以诱导大豆对苗期第一代胞囊线虫产生明显的抗性，对大豆胞囊线虫胞囊的形成有明显的抑制作用，是很有潜力的生防菌，为防治大豆胞囊线虫病开辟了新思路。

A Streptomyces strain of Streptomyces adriamycin inducing soybean resistance to soybean cyst nematode and its application

The present invention relates to a culture method and its application of a strain of Streptomyces Streptomyces (Streptomyces zaomyceticus) Snea182 that has induced soybean resistance to soybean cyst nematode after soybean seed treatment. The actinomycete strain Snea182 has been preserved in the general microbial center of the national microbial preservation management committee of China. After the strain was fermented by conventional liquid, the seed treatment agent for soybean seeds could be developed with the metabolites of the bacteria. The soybean seeds treated by the treated soybean seeds could induce resistance to soybean cyst nematode. The Snea182 metabolite of Streptomyces of Streptomyces Streptomyces in this invention can induce soybean seed to produce obvious resistance to the first generation cyst nematode in seedling stage. It has obvious inhibitory effect on the formation of cysas of soybean cyst nematode, it is a potential biocontrol bacterium, and opens a new way for controlling soybean cyst nematode disease.

【技术实现步骤摘要】
一株具诱导大豆抗大豆胞囊线虫的沙阿霉素链霉菌及应用
：本专利技术属于微生物农药
，具体涉及一种具诱导大豆抗大豆胞囊线虫的沙阿霉素链霉菌及应用。
技术介绍
：大豆胞囊线虫病(SoybeanCystNematode，SCN)，又称大豆黄萎病、火龙秧子，是制约大豆生产的重要病害。该病害具有分布广、危害重、寄主范围宽、传播途径多、休眠体(胞囊)存活时间长等特点，是一种极难防治的土传病害。该病害一般使大豆减产10％～30％，严重地块可达70％～80％，比任何一种单一病害所造成的危害都大。大豆胞囊线虫病每年给世界大豆造成的产量损失达900万吨以上，经济损失达55亿美元。特别是黑龙江省作为中国大豆主产区，大约6.5×105公顷的大豆面积遭受大豆胞囊线虫的危害。通过种植抗病品种，化学防治，改变耕作方式以及合理的管理方式对大豆胞囊线虫病都能起到一定的防治作用，但是都有一定的局限性。近些年来，生物防治越来越受到重视，从微生物的代谢产物中分离具有抗线虫活性物质已成为最具有潜力的防治途径之一。大豆胞囊线虫的生防因子有很多，包括真菌、细菌、病毒和原生动物等。放线菌作为抗生素的重要产生菌，被用以筛选具有杀线虫活性的菌株，目前国际上广泛用于防治昆虫、螨类和线虫的阿维菌素就是一种放线菌的代谢产物。放线菌与真菌和细菌一样，是植物寄生线虫的重要天敌生物之一，在自然界中调节着线虫的种群数量，而且放线菌产生的次生代谢产物具有丰富的结构多样性，因此放线菌作为线虫的生防因子展现出巨大的潜力。沙阿霉素链霉菌易于繁殖，适应环境能力强，对人畜无毒，具有很强的环境适应性和环境友好性，在生物防治中起着重要的作用，具有很大的开发利用价值。相关研究表明沙阿霉素链霉菌有促生和生防作用，而沙阿霉素链霉菌对大豆胞囊线虫病的防治还尚未有报道。针对生产上存在这一问题，通过系统筛选获得一株放线菌，利用该菌或该菌的代谢产物处理大豆种子，可诱导大豆在种子萌发和生长期间产生对大豆胞囊线虫的抗性，从而解决了大豆胞囊线虫病的问题。
技术实现思路
：本专利技术的目的是选择一株菌株对大豆种子处理后可以诱导苗期大豆对胞囊线虫产生明显的抗性，将菌株按常规液体发酵培养后，可以用该菌的代谢产物，开发出处理大豆种子的种子处理剂，经过处理的大豆种子可以诱导大豆产生对大豆胞囊线虫的抗性。本专利技术筛选获得的一株放线菌菌株是沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)Snea182，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号中国科学院微生物研究所；保藏日期：2016年10月26日；保藏登记入册的编号:CGMCCNo.13155。沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)Snea182是从中国黑龙江省黑河市爱辉区西峰山乡大豆田中筛选出的一株对大豆具有强诱导活性的放线菌菌株。本专利技术通过研究发现，土壤放线菌有很多株放线菌都具有一定的诱导大豆抗胞囊线虫的能力，从这些放线菌中筛选出一株性状相对较好的菌株——沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)Snea182进行了进一步的研究。本专利技术还涉及用于诱导大豆产生抗胞囊线虫抗性的放线菌代谢物，其是由本专利技术的放线菌菌株沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)Snea182经过常规的液体发酵培养后获得。本专利技术的放线菌菌株沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)Snea182是通过培养皿培养后，再经扩大发酵培养来制备，其具体方法如下：1.培养皿培养培养基配方为高氏一号培养基：可溶性淀粉20g、NaCl0.5g、KNO31g、K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O0.5g、FeSO40.01g、琼脂15-20g、pH7.2-7.4、蒸馏水1000mL。2.液体发酵培养其中液体发酵培养基配方为：以重量百分比计，可溶性淀粉20g、NaCl0.5g、KNO31g、K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O0.5g、FeSO40.01g、pH7.2-7.4、蒸馏水1000mL。将菌种接种到250mL三角瓶(每瓶装100mL)液体培养基中，25℃～28℃下，摇床转速以150r·min-1～180r·min-1、发酵5-7d，优选7d。液体发酵的菌种可以通过大型发酵罐进行规模生产，其产品为发酵液或发酵液的制成品。本专利技术还涉及一种大豆种子处理剂，其包含有效量的本专利技术所述的沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)Snea182本身或其代谢物作为有效活性成分。本专利技术的沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)Snea182或其代谢物具有对大豆的诱导活性，可用于大豆的种子处理，处理后的大豆对大豆胞囊线虫的胞囊形成具有很好的抑制作用，解决了大豆胞囊线虫病的难题。具体实施方式：为了更详细地进一步阐明而不是为了限制本专利技术，给出了下列实施例。实施例1：沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)Snea182的培养首先对沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)Snea182菌株进行发酵培养，然后对发酵培养后的代谢产物进行大豆诱导活性试验，确定其对大豆的诱导作用。将沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)Snea182的菌体接种到培养基上，培养基配方为高氏一号培养基，即成分：可溶性淀粉20g、NaCl0.5g、KNO31g、K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O0.5g、FeSO40.01g、琼脂15-20g、pH7.2-7.4、蒸馏水1000mL，25℃培养2d-3d。再将菌种接种到250mL三角瓶(每瓶装100mL)液体培养基中，培养基配方为：以重量百分比计，可溶性淀粉20g、NaCl0.5g、KNO31g、K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O0.5g、FeSO40.01g、pH7.2-7.4、蒸馏水1000mL。发酵温度为25-28℃，摇床转速150r·min-1～180r·min-1、发酵时间5-7d。形成的发酵液或发酵液的制成品可以直接或间接处理大豆种子。被处理的大豆种子可以减轻由于大豆胞囊线虫病害所造成的危害。实施例2：沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)Snea182的发酵基本同实施例1，不同之处是将液体培养的菌种接种到1000L的发酵罐进行发酵，在25℃下培养，pH为7.2，发酵7d。实施例3：沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)Snea182诱导大豆系统抗性的验证利用裂根试验设计(split-rootsystem)探讨了菌株Snea182对大豆胞囊线虫的诱导系统抗性。裂根试验中的挑战根系和应答根系彼此在空间上完全隔离，应答根系中的Snea182发酵液与大豆胞囊线虫没有直接接触，菌株对线虫的控制作用完全依赖于其对植株的诱导抗性。该测定方法可靠，已被广泛应用于生防微生物对土传病害的系统诱导抗性研究。1.制备试验用制剂按前述液体发酵培养方法制备沙阿霉素链霉菌Snea182的发酵液，待备用。2.制备试验用线虫大豆胞囊线虫(Heter本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株处理大豆种子后具有诱导大豆抗大豆胞囊线虫的放线菌菌株，其特征在于：该菌株为沙阿霉素链霉菌(Streptomyces zaomyceticus)，已于2016年10月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.13155。

【技术特征摘要】
1.一株处理大豆种子后具有诱导大豆抗大豆胞囊线虫的放线菌菌株，其特征在于：该菌株为沙阿霉素链霉菌(Streptomyceszaomyceticus)，已于2016年10月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.13155。2.权利要求1所述的放线菌菌株的液体发酵方法，其特征在于：液体发酵培养基配方为：以重量百分比计，可溶性淀粉20g，NaCl0.5g，KNO31g，K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O0.5g，FeSO40.01g，pH7.2-7.4，水1000mL，发酵温度为25-28℃，摇床转速150r·min-1～180r·min-1、发酵时间7d。3.根据权利要求2所述的液体发酵方法，其特征在于：所述的发酵时间为7d。4.具有诱导...

【专利技术属性】
技术研发人员：项鹏，李宝华，张武，鹿文成，李红鹏，
申请(专利权)人：项鹏，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23