LncRNA的UCA1和UCA1a共有序列对膀胱癌细胞生物学功能影响的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种LncRNA的UCA1和UCA1a共有序列对膀胱癌细胞生物学功能影响的检测方法，包括以下步骤：(1)获得LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a共有序列；(2)构建LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a共有序列过表达载体；(3)设计及合成LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a共有序列干扰siRNA oligo；(4)采用MTT细胞增殖活性检测过表达及干扰LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a共有序列对膀胱癌细胞增殖活性的影响；(5)采用流式细胞术检测过表达及干扰LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a共有序列对膀胱癌细胞周期的影响；(6)采用流式细胞术检测过表达及干扰LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a共有序列对膀胱癌细胞凋亡的影响。本发明专利技术以膀胱癌细胞为例，展开LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a的共有序列的生物学研究，但不限于该膀胱癌细胞，可适用于所有表达LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a的肿瘤细胞。

Detection of UCA1 and UCA1a common sequences of LncRNA on biological function of bladder cancer cells

The present invention discloses a method for detecting the effects of LncRNA UCA1 and UCA1a common sequence on biological function of bladder cancer cells, including the following steps: (1) obtaining the common sequence of LncRNA UCA1 and LncRNA UCA1a; (2) constructing LncRNA UCA1 and LncRNA UCA1a common sequence overexpressed vector; (3) design and synthesize LncRNA The a common sequence interfered with siRNA oligo; (4) the effects of overexpression and interference of LncRNA UCA1 and LncRNA UCA1a co sequence on the proliferation of bladder cancer cells were detected by MTT cell proliferation activity; (5) the effect of overexpression and interference of LncRNA UCA1 and LncRNA UCA1a co sequence on the cell cycle of bladder cancer was detected by flow cytometry; (6) Flow cytometry was used to detect the effects of overexpression and interference of LncRNA and UCA1 LncRNA UCA1a on the apoptosis of bladder cancer cells. The present invention, taking bladder cancer cells as an example, carries out a biological study of the common sequence of LncRNA UCA1 and LncRNA UCA1a, but is not limited to the bladder cancer cells, and can be applied to all tumor cells expressing LncRNA UCA1 and LncRNA UCA1a.

【技术实现步骤摘要】
LncRNA的UCA1和UCA1a共有序列对膀胱癌细胞生物学功能影响的检测方法
本专利技术属于生物医学
，特别是涉及一种LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列在肿瘤细胞中的生物学功能研究，具体指该段序列对膀胱癌细胞的生物学研究，但不限于膀胱细胞。
技术介绍
LncRNA是一类转录本长度超过200nt的RNA分子，自身不能编码蛋白，曾因不编码蛋白而被称为“噪音RNA”。近年来的研究发现，LncRNA可以RNA的形式在多种层面上调节基因的表达，如表观遗传学、转录调控以及转录后调控等。在人膀胱移行细胞癌细胞系BLZ-211中，UCA1基因可转录生成三个有明显差异的转录本，分别命名为UCA1、UCA1a(CUDR)和UCA1b，长度依次为1400bp、2200bp和2700bp。目前已证实，转录本UCA1和UCA1a(CUDR)均属于LncRNA。其中，UCA1在膀胱癌细胞中被首次发现并报道与膀胱癌的发生发展密切相关，UCA1可与BRG1结合，拮抗BRG1结合到抑癌基因P21启动子区，从而促进膀胱癌5637细胞的增殖。UCA1在膀胱癌细胞以及组织中高表达，可通过cAMP/CREB途径影响PI3K-AKT依赖的信号转导通路，从而影响细胞周期。此外，UCA1在膀胱癌中的表达水平与病人耐药性以及预后密切相关，可作为膀胱癌诊断的肿瘤标记物。然而，UCA1a(CUDR)在膀胱癌细胞中参与调控的生物学功能及其机制的报道较少。以往的研究表明，UCA1a(CUDR)在各种人类肿瘤，包括膀胱癌、结肠癌、宫颈癌和肺癌等表达水平较高，与癌症的发生密切相关。已经证实UCA1a(CUDR)能促进膀胱癌细胞的增殖，抑制细胞的凋亡，起到促癌的作用。我们以往的研究发现，LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a(CUDR)之间含有一段共有序列，通过核苷酸序列比对发现这段共有序列长度为1265bp，是否具有生物学功能目前尚不清楚。因此本专利技术人探索LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a(CUDR)共有序列是否可作为LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a(CUDR)的核心序列在膀胱癌的发生发展中发挥作用。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题是提供一种LncRNA的UCA1和UCA1a共有序列对膀胱癌细胞生物学功能影响的检测方法，以膀胱癌细胞为例，展开LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a的共有序列的生物学研究，但不限于该膀胱癌细胞，可适用于所有表达LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a的肿瘤细胞。为解决上述技术问题，本专利技术采用的一个技术方案是：一种LncRNA的UCA1和UCA1a共有序列对膀胱癌细胞生物学功能影响的检测方法，包括以下步骤：(1)获得LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列；(2)构建LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列过表达载体；(3)设计及合成LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列干扰siRNAoligo；(4)采用MTT细胞增殖活性检测过表达及干扰LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列对膀胱癌细胞增殖活性的影响；(5)采用流式细胞术检测过表达及干扰LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列对膀胱癌细胞周期的影响；(6)采用流式细胞术检测过表达及干扰LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列对膀胱癌细胞凋亡的影响。进一步地说，所述步骤(1)中的共有序列用生物信息学软件(NCBI)分别获得LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a(CUDR)各自的序列，通过Simvector4.5软件获得LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a(CUDR)之间1265bp完全相同的共有序列。进一步地说，所述步骤(2)中的载体选用pCDNA3.1(+)。进一步地说，所述步骤(2)中过表达载体的酶切位点是BamHI和EcoRI。进一步地说，所述步骤(3)中共有序列干扰siRNAoligo的上游序列为:5’-CUCAAGCCUACUCUCAUGATT-3’；下游序列为:5’-UCAUGAGAGUAGGCUUGAGTT-3’。进一步地说，所述膀胱癌细胞选用UMUC3细胞和5637细胞。本专利技术的有益效果是：本专利技术以膀胱癌细胞为例，结合LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a的共有序列展开其生物学研究，研究发现，通过体外转染过表达LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a的共有序列，膀胱癌细胞UMUC3的增殖活性明显增加，细胞凋亡降低，细胞周期G0/G1降低、S期增加；体外转染共有序列干扰siRNA序列后细胞增殖活性降低，膀胱癌细胞5637凋亡增加，细胞周期G0/G1增加、S期降低。由此可见，LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a的共有序列作为核心序列，在肿瘤细胞的增殖、凋亡和周期等生物学过程中发挥了重要的功能，具有一定临床应用价值及开发前景。附图说明图1为LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a(CUDR)核酸序列比对结果；图2为LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a(CUDR)共有序列核苷酸序列；图3为LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a(CUDR)共有序列构建示意图；图4为RT-PCR检测UCA1、UCA1a、USS过表达质粒转染UMUC3细胞后UCA1、UCA1a和USS的表达水平图；图5为RT-PCR检测siRNA-1-89、siRNA-2-864转染5637细胞后UCA1(siRNA-1-89)、USS(siRNA-2-864)的表达水平图；图6为MTT检测过表达UCA1、UCA1a和USS对UMUC3细胞增殖的影响图；图7为MTT检测敲低表达UCA1(siRNA-1-89)、USS(siRNA-2-864)对5637细胞增殖的影响图；图8为流式细胞仪检测过表达UCA1、UCA1a、USS对UMUC3细胞周期的影响图；图9为流式细胞仪检测敲低表达UCA1(siRNA-1-89)、USS(siRNA-2-864)对5637细胞周期的影响图；图10为流式细胞仪检测过表达UCA1、UCA1a、USS对UMUC3细胞凋亡影响图；图11为流式细胞仪检测敲低UCA1(siRNA-1-89)、USS(siRNA-2-864)对5637细胞凋亡影响图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术的较佳实施例进行详细阐述，以使本专利技术的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本专利技术的保护范围做出更为清楚明确的界定。实施例1获得LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a(CUDR)的共有序列用生物信息学软件(NCBI)分别获得LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a(CUDR)各自的序列，如图1所示，通过Simvector4.5软件获得LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a(CUDR)之间1265bp完全相同的共有序列。实施例2构建共有序列过表达质粒(1)获取目的基因如图2所示，针对共有序列，生物公司进行全基因合成。(2)目的基因与质粒双酶切a、酶切位点：BamHI和EcoRIb、双酶切插入片段及载体：表1.双酶切体系如下：酶切条件：Step1：37℃2h；Step2：68℃15min。(3)载本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种LncRNA的UCA1和UCA1ɑ共有序列对膀胱癌细胞生物学功能影响的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)获得LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a共有序列；(2)构建LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a共有序列过表达载体；(3)设计及合成LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a共有序列干扰siRNA oligo；(4)采用MTT细胞增殖活性检测过表达及干扰LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a共有序列对膀胱癌细胞增殖活性的影响；(5)采用流式细胞术检测过表达及干扰LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a共有序列对膀胱癌细胞周期的影响；(6)采用流式细胞术检测过表达及干扰LncRNA UCA1和LncRNA UCA1a共有序列对膀胱癌细胞凋亡的影响。

【技术特征摘要】
1.一种LncRNA的UCA1和UCA1ɑ共有序列对膀胱癌细胞生物学功能影响的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)获得LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列；(2)构建LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列过表达载体；(3)设计及合成LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列干扰siRNAoligo；(4)采用MTT细胞增殖活性检测过表达及干扰LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列对膀胱癌细胞增殖活性的影响；(5)采用流式细胞术检测过表达及干扰LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列对膀胱癌细胞周期的影响；(6)采用流式细胞术检测过表达及干扰LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a共有序列对膀胱癌细胞凋亡的影响。2.根据权利要求1所述的一种LncRNA的UCA1和UCA1ɑ共有序列对膀胱癌细胞生物学功能影响的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中的共有序列用生物信息学软件(NCBI)分别获得LncRNAUCA1和LncRNAUCA1a(CUDR)各自的序列，通过...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宇，
申请(专利权)人：陕西中医药大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61