具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质制造技术

本案涉及一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，所述的配基为组氨酸的羧基和2‑氨基苯并噻唑的氨基反应后形成的双功能配基。本发明专利技术以组氨酸和2‑氨基苯并噻唑为双功能配基制备新型的疏水性电荷诱导层析介质，既保留了传统疏水性电荷诱导层析的优点，引入双功能基团的概念，优化配基的空间排布，提高抗体结合的选择性，因此具有独特的分离性能。

Hydrophobic charge induced chromatography media with bifunctional groups

This case involves a hydrophobic charge induced chromatography medium with a bifunctional group, including a chromatography matrix and a ligand. The chromatography matrix is hydrophilic porous microspheres with hydroxyl groups. The ligand is a bifunctional ligand after the reaction of the carboxyl group of histidine and the amino group of 2 amino benzothiazole. A novel hydrophobic charge induced chromatography medium is prepared with histidine and 2 amino benzothiazole as a bifunctional ligand, which not only preserves the advantages of traditional hydrophobic charge induction chromatography, but also introduces the concept of double functional groups, optimizes the space arrangement of the ligand, and improves the selectivity of antibody binding. Therefore, it has unique separability. Yes.

【技术实现步骤摘要】
具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质
本专利技术涉及一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，属于生物化工领域中的蛋白层析分离技术。
技术介绍
抗体根据制备方法的不同可以分为：以纯化的抗原免疫动物获得的血清多克隆抗体；通过杂交瘤细胞技术制备的单克隆抗体；通过基因工程手段研制的基因工程抗体，无论采用何种制备方法都要对获得的抗体进行分离纯化。目前根据抗体来源、用途以及抗体本身的特性的不同，在能达到最终要求的情况下，使用尽可能少的纯化步骤，提高收率，可以有效的提高纯化效率。在具体应用中采用不同的分离方法相结合的方式以获得符合要求的抗体。一般将抗体分离纯化过程分为三个步骤：样品的粗提；粗提物精制；抗体纯化。其中样品的粗提主要包括除细胞碎片、除核酸以及应用盐析法获得较高纯度的抗体粗提物；粗提物精制主要包括除盐及小分子物质；抗体的纯化主要包括应用不同的色谱方法及其组合方法对抗体进行进一步的纯化。其中亲和层析利用目标抗体和特异性功能基团可逆的结合，实现生物活性物质的高效分离纯化，是最常用的抗体纯化手段，但亲和配基多为大分子蛋白类物质，其存在成本高，易失活以及结合稳定性差等缺点，新型的亲和配基及新的吸附原理进年来得到广泛研究。
技术实现思路
针对现有技术中存在的技术问题，本案提供一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质。为实现上述目的，本案通过以下技术方案实现：一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其中，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，所述的配基为组氨酸的羧基和2-氨基苯并噻唑的氨基反应后形成的双功能配基。优选的是，所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其中，所述的层析基质为具有多孔结构和表面羟基的亲水性微球。优选的是，所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其中，所述层析基质为PGMA—EDMA微球。一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质的制备方法，其中，包括如下步骤：1)将层析基质抽干后，加入0.1-0.5倍层析基质质量的20％v/v二甲基亚砜、0.1-1倍层析基质质量的溴化氰和0.3-0.7倍层析基质质量的氢氧化钠，25℃下150rpm摇床中活化30-50小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；2)将活化层析基质和0.1-0.5倍层析基质质量的N-溴代丁二酰亚胺混合进行溴代醇化，25℃下150rpm摇床中反应1-5小时，抽滤，用去离子水洗涤得到溴代醇化的层析基质；3)将溴代醇化的层析基质和0.4-0.6倍层析基质质量的组氨酸以及0.5-1M碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的pH为10-12，25℃下150rpm摇床中反应4-8小时，得到组氨酸偶联的介质；4)取组氨酸偶联的介质，分别用体积百分比为20％、50％和80％的丙酮溶液清洗，再用乙酸乙酯清洗，加入0.4-0.8倍层析基质质量的乙酸乙酯、N-羟乙基酞酰亚胺和1,3-二环己基碳二亚胺，N-羟乙基酞酰亚胺浓度为0.1-0.5g/ml，1,3-二环己基碳二亚胺浓度为0.3-0.8g/ml，25℃振荡10-20小时，得到N-羟乙基酞酰亚胺活化的介质；5)取N-羟乙基酞酰亚胺活化的介质，依次用体积百分比为50％和80％的丁酮溶液清洗，去离子水洗涤，加入0.2-1.5倍层析基质质量的20mg/ml2-氨基苯并噻唑溶液，25℃下200rpm水浴摇床中反应24-36小时；最后将介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有2-6倍层析基质质量的乙二胺和三乙胺中，25℃下150rpm摇床中反应4-10小时，去离子水洗涤，得到具有组氨酸和2-氨基苯并噻唑双功能配基的疏水性电荷诱导层析介质，其配基密度为60-100μmol/ml。优选的是，所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质的制备方法，其中，所述的乙二胺和三乙胺的体积比为1:1。本专利技术的有益效果是：本专利技术以组氨酸和2-氨基苯并噻唑为双功能配基制备新型的疏水性电荷诱导层析介质，既保留了传统疏水性电荷诱导层析的优点，引入双功能基团的概念，优化配基的空间排布，提高抗体结合的选择性，因此具有独特的分离性能。采用溴化氰活化偶联组氨酸，并通过酰胺键与2-氨基苯并噻唑进一步偶联，所得介质性能稳定，清洗再生方便。本专利技术的关键在于引入了组氨基侧链咪唑基团，与2-氨基苯并噻唑配基形成空间互补，赋予了新介质独特的双功能基团分布，大大改善了传统单一基团结合选择性有限的缺点，提高了抗体结合的选择性，显示出良好的抗体分离应用前景。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。实施例1一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质的制备方法，其中，包括如下步骤：取PGMA—EDMA微球10g，加入2g20％v/v二甲基亚砜、2g溴化氰和3g氢氧化钠，27℃下200rpm摇床中活化30小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；将活化层析基质和2gN-溴代丁二酰亚胺混合进行溴代醇化，27℃下200rpm摇床中反应2小时，抽滤，用去离子水洗涤得到溴代醇化的层析基质；将溴代醇化的层析基质和4g组氨酸以及0.5M碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的pH为10，27℃下200rpm摇床中反应6小时，得到组氨酸偶联的介质；取组氨酸偶联的介质，分别用体积百分比为20％、50％和80％的丙酮溶液清洗，再用乙酸乙酯清洗，加入5g乙酸乙酯、N-羟乙基酞酰亚胺和1,3-二环己基碳二亚胺，N-羟乙基酞酰亚胺浓度为0.2g/ml，1,3-二环己基碳二亚胺浓度为0.6g/ml，27℃振荡10小时，得到N-羟乙基酞酰亚胺活化的介质；取N-羟乙基酞酰亚胺活化的介质，依次用体积百分比为50％和80％的丁酮溶液清洗，去离子水洗涤，加入2g20mg/ml2-氨基苯并噻唑溶液，27℃下200rpm水浴摇床中反应24小时；最后将介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有20g乙二胺和三乙胺中，27℃下200rpm摇床中反应4小时，去离子水洗涤，得到具有组氨酸和2-氨基苯并噻唑双功能配基的疏水性电荷诱导层析介质，其配基密度为60μmol/ml，乙二胺和三乙胺的体积比为1:1。实施例2一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质的制备方法，其中，包括如下步骤：取PGMA—EDMA微球10g，，加入3g20％v/v二甲基亚砜、2g溴化氰和5g氢氧化钠，27℃下200rpm摇床中活化32小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；将活化层析基质和2gN-溴代丁二酰亚胺混合进行溴代醇化，27℃下200rpm摇床中反应3小时，抽滤，用去离子水洗涤得到溴代醇化的层析基质；将溴代醇化的层析基质和5g组氨酸以及0.6M碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的pH为10，27℃下200rpm摇床中反应6小时，得到组氨酸偶联的介质；取组氨酸偶联的介质，分别用体积百分比为20％、50％和80％的丙酮溶液清洗，再用乙酸乙酯清洗，加入6g乙酸乙酯、N-羟乙基酞酰亚胺和1,3-二环己基碳二亚胺，N-羟乙基酞酰亚胺浓度为0.3g/ml，1,3-二环己基碳二亚胺浓度为0.4g/ml，27℃振荡12小时，得到N-羟乙基酞酰亚胺活化的介质；取N-羟乙基酞酰亚胺活化的介质，依次用体积百分比为50％和80％的丁酮溶液清洗，去离子水洗涤，加入3g20本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其特征在于，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，所述的配基为组氨酸的羧基和2‑氨基苯并噻唑的氨基反应后形成的双功能配基。

【技术特征摘要】
1.一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其特征在于，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，所述的配基为组氨酸的羧基和2-氨基苯并噻唑的氨基反应后形成的双功能配基。2.如权利要求1所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其特征在于，所述的层析基质为具有多孔结构和表面羟基的亲水性微球。3.如权利要求1或2所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其特征在于层析基质为PGMA—EDMA微球。4.一种如权利要求1所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将层析基质抽干后，加入0.1-0.5倍层析基质质量的20％v/v二甲基亚砜、0.1-1倍层析基质质量的溴化氰和0.3-0.7倍层析基质质量的氢氧化钠，25℃下150rpm摇床中活化30-50小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；2)将活化层析基质和0.1-0.5倍层析基质质量的N-溴代丁二酰亚胺混合进行溴代醇化，25℃下150rpm摇床中反应1-5小时，抽滤，用去离子水洗涤得到溴代醇化的层析基质；3)将溴代醇化的层析基质和0.4-0.6倍层析基质质量的组氨酸以及0.5-1M碳酸钠缓冲液混合...

【专利技术属性】
技术研发人员：瞿欢欢，朱至放，
申请(专利权)人：苏州博进生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32