赤霉酸种子液的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种赤霉酸种子液的制备方法，包括：将冷冻保藏的GA3菌种接入至种子培养基中进行摇瓶培养，得到悬浮液；将所述悬浮液转入种子罐中进行发酵培养，得到种子液；所述种子罐的培养基包括5～15g/L第二有机氮源、5～15g/L第二小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇。与现有技术相比，本发明专利技术将冷冻菌种直接接入摇瓶，避免了斜面活化剂在斜面生长过程中出现的菌种变异风险，冷冻管能很好地保持菌种的平行性，缩短种子液制备时间，从而保证后续扩大生长的稳定性。

Preparation of gibberellic acid seed solution

The present invention provides a method for preparing chamycin seed liquid, including: connecting the frozen GA3 strains into the seed culture medium for shaking flask culture, obtaining the suspension liquid, transferring the suspension into the seed tank for fermentation and producing the seed liquid, and the medium of the seed tank includes 5 to 15g/L organic nitrogen sources. 5 ~ 15g/L second small molecule organic carbon source, 1 ~ 5g/L potassium dihydrogen phosphate, 0.1 ~ 1g/L Magnesium Sulfate and 0.1 ~ 1g/L polypropylene glycol. Compared with the existing technology, the invention directly connects the cryopreservation bacteria to the shake flask, avoids the risk of strain variation during the slant growth of the inclined surface activator. The cryopreservation tube can maintain the parallelism of the strains well and shorten the preparation time of the seed liquid so as to ensure the stability of the subsequent growth.

【技术实现步骤摘要】
赤霉酸种子液的制备方法
本专利技术属于赤霉酸制备
，尤其涉及一种赤霉酸种子液的制备方法。
技术介绍
赤霉酸是通过一种赤霉菌发酵培养代谢得到的一类次级代谢产物，被分离、鉴定和命名的一种有116种，其中在农业中应用最广泛的就是GA3，在我国农业生产中发挥着巨大的作用。GA3具有非常高的植物调节活性，对各种农作物的生长和发育都有很明显的调节作用。在北方，GA3主要应用于葡萄、红枣、山楂、油桃等经济作物上，在花期喷洒一定浓度赤霉酸溶液可以有效提高果树的坐果率，促进果实生长发育，果树产量提高20％～30％左右。在南方，赤霉酸主要应用于杂交水稻制种上，调节水稻父母本在同一时间开花，使母本授粉率大幅提高，进一步提高了杂交水稻种子的产量，降低了种子的生产成本，为农民减轻了负担。目前赤霉酸发酵行业的通用种子培养基主要为以下组分：葡萄糖0.5％，可溶性淀粉3％，花生饼粉0.3％，黄豆饼粉0.5％，MgSO4·7H2O0.1％，KH2PO40.1％，pH自然。按照以下制备方法制备：从GA3保藏菌种斜面取1～2环菌种接至种子摇瓶中，震荡培养；然后将GA3菌种接种到种子罐中进行培养，得到悬浮液；再将得到的悬浮液继续在种子罐内培养，最后接种到发酵罐内进行发酵，得到发酵液。但GA3菌种需多次活化，使菌种的遗传稳定性面临更多的考验，大规模生产不同批次的产酸水平可能存在较大的差异性。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种赤霉酸种子液的制备方法，该制备方法无需经斜面活化的过程。本专利技术提供了一种赤霉酸种子液的制备方法，包括：S1)将冷冻保藏的GA3菌种接入至种子培养基中进行摇瓶培养，得到悬浮液；所述种子培养基包括5～15g/L第一有机氮源、5～15g/L第一小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇；S2)将所述悬浮液转入种子罐中进行发酵培养，得到种子液；所述种子罐的培养基包括5～15g/L第二有机氮源、5～15g/L第二小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇。优选的，所述步骤S2)还包括：发酵培养后，转入二级种子罐中继续发酵培养，得到种子液；所述二级种子罐的培养基包括5～15g/L第三有机氮源、5～15g/L第三小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇。优选的，所述第一有机氮源、第二有机氮源与第三有机氮源各自独立地选自大豆蛋白、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉与鱼粉中的一种或多种。优选的，所述第一小分子有机碳源、第二小分子有机碳源与第三小分子有机碳源各自独立地选自蔗糖、葡萄糖、糖蜜、淀粉糊精、甘露糖与半乳糖中的一种或多种。优选的，所述步骤S1)中摇瓶培养的温度为28℃～30℃；摇瓶培养的时间为60～80h。优选的，所述步骤S2)中发酵培养的温度为28℃～30℃；发酵培养的时间为48～72h；发酵培养的压力为0.01～0.05MPa；所述发酵培养的空气流量为60～70Nm3/h。优选的，所述步骤S2)中继续发酵培养的温度为28℃～30℃；继续发酵培养的时间为15～25h；继续发酵培养的压力为0.01～0.05MPa；所述继续发酵培养的空气流量为600～800Nm3/h。优选的，所述种子培养基包括10g/L第一有机氮源、10g/L第一小分子有机碳源、3g/L磷酸二氢钾、0.6g/L硫酸镁与0.5g/L聚丙二醇；所述种子罐的培养基包括10g/L第二有机氮源、10g/L第二小分子有机碳源、3g/L磷酸二氢钾、0.6g/L硫酸镁与0.5g/L聚丙二醇；所述二级种子罐的培养基包括10g/L第三有机氮源、10g/L第三小分子有机碳源、3g/L磷酸二氢钾、0.6g/L硫酸镁与0.5g/L聚丙二醇。优选的，所述种子罐的培养基与二级种子罐的培养基的pH值各自独立地为4.5～5.5。本专利技术提供了一种赤霉酸种子液的制备方法，包括：S1)将冷冻保藏的GA3菌种接入至种子培养基中进行摇瓶培养，得到悬浮液；所述种子培养基包括5～15g/L第一有机氮源、5～15g/L第一小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇；S2)将所述悬浮液转入种子罐中进行发酵培养，得到种子液；所述种子罐的培养基包括5～15g/L第二有机氮源、5～15g/L第二小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇。与现有技术相比，本专利技术将冷冻菌种直接接入摇瓶，避免了斜面活化剂在斜面生长过程中出现的菌种变异风险，冷冻管能很好地保持菌种的平行性，从而保证后续扩大生长的稳定性。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供了一种赤霉酸种子液的制备方法，包括：S1)将冷冻保藏的GA3菌种接入至种子培养基中进行摇瓶培养，得到悬浮液；所述种子培养基包括5～15g/L第一有机氮源、5～15g/L第一小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇；S2)将所述悬浮液转入种子罐中进行发酵培养，得到种子液；所述种子罐的培养基包括5～15g/L第二有机氮源、5～15g/L第二小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇。本专利技术对所有原料的来源并没有特殊的限制，为市售即可。将冷冻保藏的GA3菌种接种至种子培养基中进行摇瓶培养，得到悬浮液；所述GA3菌种的接种量优选为种子培养液体积的0.4％～1.2％，更优选为0.5％～1％，再优选为0.6％～1％，再优选为0.8％～1％；所述种子培养基包括5～15g/L第一有机氮源、5～15g/L第一小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇，优选包括8～12g/L第一有机氮源、8～12g/L第一小分子有机碳源、2～4g/L磷酸二氢钾、0.3～0.8g/L硫酸镁与0.3～0.8g/L聚丙二醇，更优选包括9～11g/L第一有机氮源、9～11g/L第一小分子有机碳源、2～4g/L磷酸二氢钾、0.5～0.7g/L硫酸镁与0.4～0.5g/L聚丙二醇，再优选包括10g/L第一有机氮源、10g/L第一小分子有机碳源、3g/L磷酸二氢钾、0.6g/L硫酸镁与0.5g/L聚丙二醇；所述第一有机氮源为本领域技术人员熟知的有机氮源即可，并无特殊的限制，本专利技术中优选为大豆蛋白、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉与鱼粉中的一种或多种；有机氮源在微生物分泌的蛋白酶的作用下，分解成氨基酸，被菌体吸收后作为菌体蛋白质等的组成部分，并且有机氮源除提供菌体生长繁殖的营养外，还可作为产物前体；所述第一小分子有机碳源为本领域技术人员熟知的小分子有机碳源即可，并无特殊的限制，本专利技术中优选为蔗糖、葡萄糖、糖蜜、淀粉糊精、甘露糖与半乳糖中的一种或多种；小分子有机碳源可为微生物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种赤霉酸种子液的制备方法，其特征在于，包括：S1)将冷冻保藏的GA3菌种接入至种子培养基中进行摇瓶培养，得到悬浮液；所述种子培养基包括5～15g/L第一有机氮源、5～15g/L第一小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇；S2)将所述悬浮液转入种子罐中进行发酵培养，得到种子液；所述种子罐的培养基包括5～15g/L第二有机氮源、5～15g/L第二小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇。

【技术特征摘要】
1.一种赤霉酸种子液的制备方法，其特征在于，包括：S1)将冷冻保藏的GA3菌种接入至种子培养基中进行摇瓶培养，得到悬浮液；所述种子培养基包括5～15g/L第一有机氮源、5～15g/L第一小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇；S2)将所述悬浮液转入种子罐中进行发酵培养，得到种子液；所述种子罐的培养基包括5～15g/L第二有机氮源、5～15g/L第二小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2)还包括：发酵培养后，转入二级种子罐中继续发酵培养，得到种子液；所述二级种子罐的培养基包括5～15g/L第三有机氮源、5～15g/L第三小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述第一有机氮源、第二有机氮源与第三有机氮源各自独立地选自大豆蛋白、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉与鱼粉中的一种或多种。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述第一小分子有机碳源、第二小分子有机碳源与第三小分子有机碳源各自独立地选自蔗糖、葡萄糖、糖蜜、淀粉糊精、甘露糖与半乳糖中的一种或多种。...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘健，杨宝强，沈颂娣，熊仁科，齐昊，
申请(专利权)人：四川龙蟒福生科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：四川,51