一种用于增强猪疫苗免疫效果的蛋白质及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于增强猪疫苗免疫效果的蛋白质及其应用，涉及基因工程领域。该用于增强猪疫苗免疫效果的蛋白质，其氨基酸序列如(a)或(b)所示：(a)SEQ ID NO.1；(b)将SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有与SEQ ID NO.1具有相同的促进免疫活性功能的衍生序列。其应用于与市售疫苗联合免疫，可提高抗原免疫活性，增强疫苗免疫效果，非常适用于猪病毒病的预防。

A protein for enhancing immunity effect of pig vaccine and its application

The invention relates to a protein for enhancing the immunity effect of pig vaccine and its application, and relates to the field of genetic engineering. The protein used to enhance the immune effect of the swine vaccine, its amino acid sequence such as (a) or (b) shows: (a) SEQ ID NO.1; (b) the amino acid sequence of SEQ ID ID NO.1 is replaced and / or / or added with the amino acid residues of one or more amino acid residues and has a derivative sequence that has the same immune activity as that of SEQ ID ID. It should be used in combination with commercially available vaccines, which can enhance the immune activity of antigen and enhance the immune effect of vaccine, which is very suitable for the prevention of swine virus disease.

【技术实现步骤摘要】
一种用于增强猪疫苗免疫效果的蛋白质及其应用
本专利技术涉及基因工程领域，且特别涉及一种用于增强猪疫苗免疫效果的蛋白质及其应用。
技术介绍
由病毒、细菌等病原微生物侵染动物所引起的各种传染性疾病严重制约了各个国家和地区养殖业的健康发展，同时也对人类健康存在巨大隐患。因此，对动物传染性疾病的防治措施研究具有重大的经济价值和社会意义，疫苗免疫是当前预防和控制传染病的主要措施，但目前使用的常规疫苗并不理想，存在免疫效率低与安全性差的两大难题。因此，在安全剂量疫苗接种下增强疫苗的免疫效果，成为当今疫苗开发研究的焦点。细胞因子是由免疫效应细胞和相关细胞产生的，具有重要生物学活性的细胞调节蛋白，以其安全性、有效性、种类多、工艺简单，且能有效地增强机体的细胞免疫和体液免疫反应，作为免疫佐剂越来越受到重视。白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)是在2005年发现的一种前炎症细胞因子，属于IL-1家族新成员，主要由上皮细胞、内皮细胞、纤维母细胞和平滑肌细胞表达。IL-33不仅能激发TH1免疫应答，还能激发TH2及细胞毒性T细胞(CD8+)免疫，这对于病原体侵入的预防和清除是非常重要的。最近有研究表明，将鼠白细胞介素-33与流感疫苗采用滴鼻免疫的方式联合免疫小鼠，IgG和sIgA抗体显著增高，Th1及Th2型细胞因子明显增多，并且能够抵抗致死性攻击。但市面上对于细胞因子作为免疫佐剂的应用较少。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种用于增强猪疫苗免疫效果的蛋白质，其能够与市售疫苗联合免疫，可提高抗原免疫活性，增强疫苗免疫效果，非常适用于猪病毒病的预防。本专利技术的第二目的在于提供一种编码上述蛋白质的核酸分子。本专利技术的第三目的在于提供一种包含上述核酸分子的载体。本专利技术的第四目的在于提供一种含有上述核酸分子的重组细胞，其中，蛋白质在重组细胞高效表达，且表达量达重组细胞总蛋白的50％以上。本专利技术的第五目的在于提供上述蛋白质、上述核酸分子、上述载体、或上述重组细胞在制备猪用疫苗免疫增强剂中的应用。本专利技术的第六目的在于提供一种猪用疫苗免疫增强剂，其与市售疫苗联合免疫，有效增强疫苗的免疫效果。本专利技术的第七目的在于提供一种上述蛋白质的制备方法，该方法其操作简单，周期短，成本低廉，特异性好，反应灵敏，制备的浓度较高，利于大量制备。本专利技术的第八目的在于提供一种猪用疫苗，其包括上述蛋白质。本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。本专利技术提出一种用于增强猪疫苗免疫效果的蛋白质，其氨基酸序列如(a)或(b)所示：(a)SEQIDNO.1；(b)将SEQIDNO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有与SEQIDNO.1具有相同的促进免疫活性功能的衍生序列。编码上述蛋白质的核酸分子。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，上述核酸分子的碱基序列如SEQIDNO.2所示。一种载体，其含有上述核酸分子。一种重组细胞，其含有上述载体。上述蛋白质、上述核酸分子、上述载体、或上述重组细胞在制备猪用疫苗免疫增强剂中的应用。一种猪用疫苗免疫增强剂，其包括：上述蛋白质或上述重组细胞。一种上述蛋白质的制备方法，其包括如下步骤：培养上述重组细胞，从培养产物中分离、纯化得到蛋白质。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，上述重组细胞为大肠杆菌。一种猪用疫苗，其包括上述蛋白质。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：用于增强猪疫苗免疫效果的蛋白质在大肠杆菌中能高效表达，表达量达菌体总蛋白的50％以上，且其制备操作简单、周期短、成本低廉、特异性好。将其应用于增强猪疫苗免疫，同时具体将其与市售疫苗联合免疫，可提高抗原免疫活性，增强疫苗免疫效果，非常适用于猪病毒病的预防，易于大范围推广应用。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例1提供的核酸分子的琼脂糖凝胶电泳示意图；图2为本专利技术实施例3提供的纯化后IL-33蛋白SDS-PAGE电泳结果示意图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。以下结合实施例对本专利技术的特征和性能作进一步的详细描述。需要说明的是，IL-33的N末端没有明显的信号肽，IL-33作为大的前蛋白原形式产生和分泌，该前蛋白原需要充分加工以释放成熟的生物活性形式，其成熟蛋白分子量约为18kDa。猪IL-33蛋白编码276个氨基酸，全长蛋白质的第120位氨基酸被选择作为N-末端氨基酸。因此本专利技术用于增强猪疫苗免疫效果的蛋白质，专利技术人选择表达IL-33C端(第120-276位氨基酸)，将其蛋白产物作为佐剂，与市售疫苗联合免疫，从而增强疫苗的免疫效果，该蛋白质的选择，为专利技术人经过创造性的劳动所得。还需要说明的是，本专利技术所例举的实施例中，RNA提取试剂盒、RT-PCR试剂盒均购自Promega公司；pMD-19T载体、大肠杆菌DH5a感受态细胞均购自上海生工生物工程技术服务有限公司。NcoⅠ酶、XhoⅠ酶、pET28a(+)和T4DNA连接酶均购自TaKaRa公司，大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞购自上海生工生物工程技术服务有限公司。内毒素清除树脂购自上海生工生物工程技术服务有限公司。将序列1所示的蛋白质命名为IL-33，将IL-33的编码基因命名为IL-33，将得到的含有IL-33的pMD-19T载体命名为pMD19-IL-33。实施例1获取用于增强猪疫苗免疫效果的蛋白质的核酸分子，方法如下：猪总RNA的提取：参照Promega公司的RNA提取试剂盒说明书，从猪脾脏或淋巴结等组织中提取猪总RNA。IL-33目的基因的反转录及PCR：根据Promega公司的RT-PCR试剂盒进行反转录，获得IL-33-mRNA的cDNA。参照猪IL-33基因序列(GeneBank号：AB292180)，设计如下引物：IL-33-F120：cccatatgagtatcaaagaacattctgctIL-33-R276：ccctcgagcattaagtttgagagcttaaatg以cDNA为模板，用设计的引物进行PCR扩增：PCR反应条件如下：95℃预变性5分钟，1个循环；95℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸30秒，共35个循环；72℃终延伸5分钟。并对PCR扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，结果如图1所示，其中图1中泳道M为DNAMarker，泳道1为阴性对照，泳道2为目的基因，经图1可得，目的基因的大小约470bp，与实际大小相符。将PCR产物亚克隆入pMD-19T载体，转化大肠杆菌DH5a，挑取阳性单克隆进行基因测序，测序结果表明，PCR产物如序列表的序列2所示。序列2所示基因编码序列1所示的蛋白质。当然，在其他的实施例中，也可以直接采用化学合成的方式获取序列2所示的编码基因。实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于增强猪疫苗免疫效果的蛋白质，其特征在于，其氨基酸序列如(a)或(b)所示：(a)SEQ ID NO.1；(b)将SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有与SEQ ID NO.1具有相同的促进免疫活性功能的衍生序列。

【技术特征摘要】
1.一种用于增强猪疫苗免疫效果的蛋白质，其特征在于，其氨基酸序列如(a)或(b)所示：(a)SEQIDNO.1；(b)将SEQIDNO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有与SEQIDNO.1具有相同的促进免疫活性功能的衍生序列。2.编码如权利要求1所述的蛋白质的核酸分子。3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，其碱基序列如SEQIDNO.2所示。4.一种载体，其特征在于，其含有权利要求2-3任一项所述的核酸分子。5.一种重组细胞，其特征在于，其含有如权利要求4所述的载体。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：周远成，蔡雨函，牛婷，代洪波，李碧，钟颖，卓秀萍，廖果，林燕，王雪涛，
申请(专利权)人：四川华神兽用生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51