【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用光可裂解标记进行抗原检测本申请要求2015年8月6日提交的美国临时申请号62/201,978的优先权,其全部内容以引用方式并入本文。
技术介绍
1.
本专利技术整体涉及组织学、病理学和分子生物学的领域。更具体地讲,涉及使用光可裂解标记(PCL)进行抗原检测,包括例如进行多重和连续抗原检测。2.相关领域的描述在通常使用的免疫染色方案中,将抗原特异性抗体加入到含有抗原的标本(包括但不限于组织切片、细胞或蛋白质印迹)中并使其与抗原结合。然后使用多种技术中的任一种来检测这种抗原结合性抗体,该技术包括(a)将对第一抗体具有特异性亲和力的第二抗体与荧光团(例如,Cy5)或用于比色检测的酶(例如,HRP)缀合;(b)将对第一抗体具有特异性亲和力的第二抗体与生物素缀合,该生物素随后使用与荧光团(例如,Cy5)或用于比色检测的酶(例如,HRP)缀合的抗生物素蛋白或链霉亲和素进行检测;以及将(c)荧光团(例如,Cy5)或用于比色检测的酶(例如,HRP)或生物素与第一抗体直接缀合。在情况(a)和(b)中,此类技术允许在同一样品上使用约三种抗体,每种抗体被独特地标记。在情况(c)中,此类技术限于与可分别成像的不同标记缀合的约四种抗体。然而,二级抗体之间的非特异性相互作用和检测单独标记的有限能力阻止了更高阶的复合。正在涌现新的多重技术,但许多都有缺点,例如,耗时、昂贵和/或需要广泛优化的一级抗体。需要改进的用于自动化抗原检测的方法和仪器。
技术实现思路
本文提供了使用光可裂解标记进行多重和连续抗原检测的方法。该方法包括检测光可裂解标记的存在,该光可裂解标记通过官能连接基与抗原结合复 ...
【技术保护点】
一种用于检测样品上或样品中至少第一抗原的存在的方法,所述样品包括能够特异性结合所述第一抗原的第一抗原结合复合物,所述方法包括检测所述样品中的光可裂解标记的存在,其中所述光可裂解标记通过官能连接基与所述第一抗原结合复合物缀合,其中所述第一抗原结合复合物与所述第一抗原非共价结合形成式(I)的抗原结合性抗原结合复合物:
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.08.06 US 62/201,9781.一种用于检测样品上或样品中至少第一抗原的存在的方法,所述样品包括能够特异性结合所述第一抗原的第一抗原结合复合物,所述方法包括检测所述样品中的光可裂解标记的存在,其中所述光可裂解标记通过官能连接基与所述第一抗原结合复合物缀合,其中所述第一抗原结合复合物与所述第一抗原非共价结合形成式(I)的抗原结合性抗原结合复合物:其中所述光可裂解标记的存在指示所述第一抗原的存在。2.根据权利要求1所述的方法,还包括光裂解所述光可裂解标记。3.根据权利要求2所述的方法,其中光裂解包括使所述样品暴露于紫外光。4.根据权利要求1所述的方法,其中所述光可裂解标记包括与光可裂解部分共价结合的报道分子部分。5.根据权利要求4所述的方法,其中所述光可裂解部分选自由以下项组成的组:2-硝基苄基基团、苯偶姻基基团、香豆素基基团和对羟基苯甲酰基基团。6.根据权利要求5所述的方法,其中所述光可裂解部分是2-硝基苄基基团。7.根据权利要求6所述的方法,其中所述2-硝基苄基基团包括在所述α-碳和/或所述苯环上的取代。8.根据权利要求1所述的方法,其中所述官能连接基是单链寡核苷酸、至少部分双链寡核苷酸、肽或链烷二基(C≤16)。9.根据权利要求8所述的方法,其中所述部分双链寡核苷酸是完全双链寡核苷酸。10.根据权利要求8所述的方法,其中所述至少部分双链寡核苷酸是发夹寡核苷酸。11.根据权利要求1所述的方法,其中所述第一抗原结合复合物由式(II)定义:其中所述第一抗原结合复合物包括与缀合部分结合的一级抗体,其中所述抗原结合性抗原结合复合物由式(III)进一步定义:12.根据权利要求11所述的方法,其中所述一级抗体被至少一种还原剂修饰。13.根据权利要求12所述的方法,其中所述至少一种还原剂是TCEP或2-MEA。14.根据权利要求11所述的方法,其中所述缀合部分是异双官能连接基。15.根据权利要求14所述的方法,其中所述异双官能连接基是磺基-SMCC或SM(PEG)n。16.根据权利要求11所述的方法,其中所述缀合部分与所述一级抗体共价连接。17.根据权利要求11所述的方法,其中所述缀合部分与所述官能连接基共价连接。18.根据权利要求11所述的方法,其中所述官能连接基是在5'末端具有C6氨基修饰且在3'末端具有光可裂解标记的部分双链寡核苷酸。19.根据权利要求1所述的方法,其中所述第一抗原结合复合物由式(IV)定义:其中所述第一抗原结合复合物包括与第一配体共价结合的一级抗体,其中所述第一配体与第一抗配体非共价结合,其中所述抗原结合性抗原结合复合物由式(V)进一步定义:20.根据权利要求19所述的方法,其中所述方法还包括使所述样品与所述一级抗体和所述第一抗配体顺序地接触。21.根据权利要求19所述的方法,其中所述方法还包括使所述样品与所述一级抗体和所述第一抗配体同时接触。22.根据权利要求19所述的方法,其中所述第一配体是生物素、抗生物素蛋白或链霉亲和素或第一单链寡核苷酸。23.根据权利要求22所述的方法,其中所述第一抗配体是抗生物素蛋白或链霉亲和素、生物素或与所述第一单链寡核苷酸至少部分互补的第二单链寡核苷酸。24.根据权利要求19所述的方法,其中所述光可裂解标记通过官能连接基与所述第一抗配体共价结合。25.根据权利要求24所述的方法,其中两次出现的所述相同的光可裂解标记通过官能连接基与所述第一抗配体共价结合。26.根据权利要求24所述的方法,其中两种不同的光可裂解标记通过官能连接基与所述第一抗配体共价结合。27.根据权利要求24所述的方法,其中所述官能连接基是单链寡核苷酸、至少部分双链寡核苷酸、肽或链烷二基(C≤16)。28.根据权利要求27所述的方法,其中所述部分双链寡核苷酸是完全双链寡核苷酸。29.根据权利要求27所述的方法,其中所述至少部分双链寡核苷酸是发夹寡核苷酸。30.根据权利要求1所述的方法,其中所述第一抗原结合复合物由式(VI)定义:其中所述第一抗原结合复合物包括与第一配体共价结合的一级抗体,其中所述第一配体与第一抗配体非共价结合,其中所述第二配体与所述第一抗配体非共价结合,其中所述抗原结合性抗原结合复合物由式(VII)进一步定义:31.根据权利要求30所述的方法,其中所述方法还包括使所述样品与所述一级抗体、所述第一抗配体和/或所述第二配体顺序地接触。32.根据权利要求30所述的方法,其中所述方法还包括使所述样品与所述一级抗体、所述第一抗配体和/或所述第二配体同时接触。33.根据权利要求30所述的方法,其中所述光可裂解标记通过官能连接基与所述第二配体共价结合。34.根据权利要求33所述的方法,其中两次出现的所述相同的光可裂解标记通过官能连接基与所述第二配体共价结合。35.根据权利要求33所述的方法,其中两种不同的光可裂解标记通过官能连接基与所述第二配体共价结合。36.根据权利要求33所述的方法,其中所述官能连接基是单链寡核苷酸、至少部分双链寡核苷酸、肽或链烷二基(C≤16)。37.根据权利要求36所述的方法,其中所述部分双链寡核苷酸是完全双链寡核苷酸。38.根据权利要求36所述的方法,其中所述至少部分双链寡核苷酸是发夹寡核苷酸。39.根据权利要求30所述的方法,其中所述第一配体是生物素或抗生物素蛋白或链霉亲和素。40.根据权利要求30所述的方法,其中所述第一抗配体是抗生物素蛋白或链霉亲和素或生物素。41.根据权利要求30所述的方法,其中所述第二配体是生物素或抗生物素蛋白或链霉亲和素。42.根据权利要求1所述的方法,其中所述第一抗原结合复合物由式(VIII)定义:其中所述第一抗原结合复合物包括由二级抗体结合的一级抗体,其中所述二级抗体与第一配体共价结合,其中所述第一配体与第一抗配体非共价结合,其中所述抗原结合性抗原结合复合物由式(IX)进一步定义:43.根据权利要求42所述的方法,其中所述方法还包括使所述样品与所述一级抗体、所述二级抗体和/或所述第一抗配体顺序地接触。44.根据权利要求42所述的方法,其中所述方法还包括使所述样品与所述一级抗体、所述二级抗体和/或所述第一抗配体同时接触。45.根据权利要求42所述的方法,其中所述第一配体是生物素、抗生物素蛋白或链霉亲和素或第一单链寡核苷酸。46.根据权利要求45所述的方法,其中所述第一抗配体是抗生物素蛋白或链霉亲和素、生物素或与所述第一单链寡核苷酸至少部分互补的第二单链寡核苷酸。47.根据权利要求42所述的方法,其中所述光可裂解标记通过官能连接基与所述第一抗配体共价结合。48.根据权利要求47所述的方法,其中两次出现的所述相同的光可裂解标记通过官能连接基与所述第一抗配体共价结合。49.根据权利要求47所述的方法,其中两种不同的光可裂解标记通过官能连接基与所述第一抗配体共价结合。50.根据权利要求47所述的方法,其中所述官能连接基是单链寡核苷酸、至少部分双链寡核苷酸、肽或链烷二基(C≤16)。51.根据权利要求50所述的方法,其中所述部分双链寡核苷酸是完全双链寡核苷酸。52.根据权利要求50所述的方法,其中所述至少部分双链寡核苷酸是发夹寡核苷酸。53.根据权利要求1所述的方法,其中所述第一抗原结合复合物由式(X)定义:其中所述第一抗原结合复合物包括由二级抗体结合的一级抗体,其中所述二级抗体与第一配体共价结合,其中所述第一配体与第一抗配体非共价结合,其中所述第二配体与所述第一抗配体非共价结合,其中所述抗原结合性抗原结合复合物由式(XI)进一步定义:54.根据权利要求53所述的方法,其中所述方法还包括使所述样品与所述一级抗体、所述二级抗体、所述第一抗配体和/或所述第二配体顺序地接触。55.根据权利要求53所述的方法,其中所述方法还包括使所述样品与所述一级抗体、所述二级抗体、所述第一抗配体和/或所述第二配体同时接触。56.根据权利要求53所述的方法,其中所述光可裂解标记通过官能连接基与所述第二配体共价结合。57.根据权利要求56所述的方法,其中两次出现的所述相同的光可裂解标记通过官能连接基与所述第二配体共价结合。58.根据权利要求56所述的方法,其中两种不同的光可裂解标记通过官能连接基与所述第二配体共价结合。59.根据权利要求56所...
【专利技术属性】
技术研发人员:M·希利,X·陈,J·王,W·吴,S·彼得里琴科,S·张,S·弗莱,
申请(专利权)人:激光基因公司,
类型:发明
国别省市:美国,US
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