本发明专利技术“一株可分泌PPRV‑H mAb的杂交瘤细胞株PPRV‐H4C12、其分泌的PPRV‑H mAb及包含该PPRV‑H mAb的胶体金免疫层析试纸条”，属于动物疫病检测领域。所述杂交瘤细胞株PPRV‐H4C12的保藏号为CGMCC No.13383。所述小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体由所述的杂交瘤细胞株PPRV‑H4C12分泌而得。所述试纸条包括所述抗体。该试纸条具有操作简便、成本低廉、现场操作、无需专业仪器、人员，结果直观可见，可快速、特异的检测血清中小反刍兽疫病毒H蛋白抗体。本发明专利技术适用于疫苗免疫动物中和抗体水平的快速现场评估。
【技术实现步骤摘要】
用于检测小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条
本专利技术属于动物疫病检测领域，具体涉及一株可分泌PPRV-HmAb的杂交瘤细胞株PPRV‐H4C12、其分泌的PPRV-HmAb及包含该PPRV-HmAb的胶体金免疫层析试纸条。
技术介绍
小反刍兽疫(Pestedespetitsruminants，PPR)又被称为小反刍兽假性牛瘟，是由小反刍兽疫病毒(Pestedespetitsruminantsvirus，PPRV)引起山羊、绵羊以及包括野生动物在内的多种小反刍动物的一种急性、烈性传染病。目前PPR已被世界动物卫生组织(OIE)规定为法定报告传染病，我国农业部也将其列为一类动物疫病。PPR主要流行于撒哈拉以南的非洲、阿拉伯半岛和整个印度次大陆。2007年7月我国西藏地区首次发生PPR疫情，此后我国新疆、甘肃、内蒙古等多个省份均有该疫情发生的报道。PPR因其具有极高的发病率和死亡率(70～80％)，在流行国家和地区对当地畜牧业造成了毁灭性的打击，给当地农场主和牧民造成严重的经济损失。因此，对PPR疫情的监测和防控关系到我国养羊业的健康发展，并具有重要的公共卫生意义。小反刍兽疫病毒属于副粘病毒科麻疹病毒属成员，其基因组为单股负链RNA，基因组全长为15,948nt，编码N、P、M、F、H、L6个结构蛋白和C、V两个非结构蛋白。在病毒的这些结构蛋白中，N蛋白保守性最强、抗原性也最稳定，能够刺激机体产生强烈的免疫应答，在PPRV的阳性血清中，针对N蛋白的抗体占主导地位，但是此抗体并不能起到中和病毒的作用，主要用于诊断研究，常作为诊断抗原。在病毒侵入宿主细胞的过程中H蛋白起到重要的作用，当病毒侵染细胞时，病毒通过H蛋白与宿主细胞的受体结合，然后病毒囊膜与细胞膜融合，使核衣壳进入受体细胞胞浆内，衣壳蛋白去蛋白化后，病毒基因组开始转录过程。H蛋白具有很强的免疫原性，能够刺激机体产生中和抗体，从而抑制病毒入侵宿主细胞。因些，通过检测血清中的H蛋白抗体水平，可以对PPRV疫苗免疫情况进行评估。目前，常用的实验室诊断技术分为：病毒分离培养、血清学检测和抗原检测。主要包括病毒分离、病毒中和试验(VN)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、琼脂凝胶免疫扩散(AGID)、对流免疫电泳(CIEP)、聚合酶链式反应(RT-PCR)、胶体金免疫层析以及其他分子生物学等检测方法。VN是国际贸易指定试验，但此方法检测时间长，检测的血清样品对细胞形态有较大影响，结果判定带有一定的主观性。PCR和竞争ELISA是被OIE指定为标准的检测方法，也是目前应用最为广泛的检测方法，但这两种方法都需要在实验室仪器设备配合的条件下才能完成。胶体金免疫层析技术是一种快速的诊断方法，与ELISA方法相比，它省去了繁琐的加样、洗涤步骤。因而这种分析技术操作简单快速,分析结果清楚,易于判断,且无须仪器,非常适用于现场快速检测。目前，国内外还没有检测H蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条，无法现场检测血清中H蛋白的抗体水平，进行快速免疫评估。因此，建立这种迅速简便、针对H蛋白抗体的现场检测技术是一个亟待解决的难题。
技术实现思路
基于本领域存在的上述空白和需求，本专利技术采用全病毒免疫动物的方法筛选得到一株可稳定分泌小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体(PestedespetitsruminantsvirusHproteinmonoclonalantibody,PPRV-HmAb)的杂交瘤细胞株PPRV-H4C12，并利用其分泌的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体(PPRV-HmAb)进行胶体金标记，制成试纸条，用于检测小反刍兽疫病毒H蛋白抗体。基于所述杂交瘤细胞株分泌的PPRV-HmAb制成的胶体金试纸条在检测小反刍兽疫病毒H蛋白抗体方面具有高度的敏感性、特异性和准确率。本专利技术的技术方案如下：本专利技术的第一个方面提供一株可分泌小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株PPRV-H4C12，其保藏号为CGMCCNo.13383。本专利技术采用小反刍兽疫全病毒做为免疫原对小鼠进行免疫，并将免疫后的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行细胞融合获得一批杂交瘤细胞，并筛选鉴定出一株可高效、稳定地分泌小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体(PestedespetitsruminantsvirusHproteinmonoclonalantibody,PPRV-HmAb)的杂交瘤细胞株PPRV-H4C12，该细胞株连续传代培养20代后，其分泌的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体PPRV-HmAb的效价还能保持在1:2560。本领域技术人员熟知，采用全病毒免疫动物，动物体内发生的免疫反应可针对免疫原病毒的不同蛋白，即不同的抗原位点发生免疫反应，因而产生针对不同蛋白的不同抗体，动物体内免疫反应的发生机制和抗体产生过程是不确定的，可随机针对小反刍兽疫病毒内的N、P、M、F、H、L6个结构蛋白和C、V两个非结构蛋白产生不同的抗体。本专利技术的第二个方面提供一种小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体，其特征在于，由所述的杂交瘤细胞株PPRV-H4C12分泌而得。该抗体经后续的胶体金试纸条检测效果验证是一种很好的用来制备小反刍兽疫病毒H蛋白抗体检测试剂的抗体材料。本专利技术所述的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体，由小反刍兽疫病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌产生。此杂交瘤细胞株的获得是将纯化的小反刍兽疫全病毒免疫小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合后,进一步亚克隆,筛选出分泌抗小反刍兽疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经WesternBlot鉴定，优选出一株可稳定分泌抗小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体(PPRV-HmAb)的杂交瘤细胞株，命名为4C12。杂交瘤细胞株PPRV-H4C12已于2016年12月9日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰路1号院3号，中国科学院微生物研究所，简称CGMCC，邮编100101)保藏，分类命名为杂交瘤细胞，保藏号为：CGMCCNo.13383。在一些实施例中，所述小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体的亚型为IgG1，Kappa链。本专利技术的第三个方面提供了所述的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体在制备小反刍兽疫病毒H蛋白抗体检测试剂中的应用。本专利技术的第四个方面提供一种用于检测样品中是否含有小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条，其包括：用于设置在固相载体上的胶体金标记的所述的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体，以及，用于设置在固相载体上并用于结合和/或捕获小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的小反刍兽疫病毒H蛋白抗原；所述固相载体上，按所述样品的层析流动方向，胶体金标记的所述小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体的设置位置位于小反刍兽疫病毒H蛋白抗原的设置位置的上游。本专利技术的胶体金免疫层析试纸条检测样品中是否含有小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的检测原理在于，如果样品中存在小反刍兽疫病毒H蛋白抗体，那么它会与设置在试纸条上的胶体金标记的所述的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体(Au-PPRV-HmAb)一起层析涌动，流向小反刍兽疫病毒H蛋白抗原(PPRV-H)的设置位置，样品中的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体与胶体金标记的所述的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体(Au-PPRV-HmAb)竞争结合小反本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株可分泌小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株PPRV‐H4C12，其保藏号为CGMCC No.13383。
【技术特征摘要】
2017.08.02 CN 20171065016381.一株可分泌小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株PPRV‐H4C12，其保藏号为CGMCCNo.13383。2.一种小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株PPRV-H4C12分泌而得。3.根据权利要求2所述的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体的亚型为IgG1，Kappa链。4.权利要求2或3所述的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体在制备小反刍兽疫病毒检测试剂中的应用。5.用于检测样品中是否含有小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，包括：用于设置在固相载体上的胶体金标记的权利要求2所述的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体，以及，用于设置在固相载体上并用于结合和/或捕获小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的小反刍兽疫病毒H蛋白抗原；所述固相载体上，按所述样品的层析流动方向，胶体金标记的权利要求2所述的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体的设置位置位于小反刍兽疫病毒H蛋白抗原的设置位置的上游。6.根据权利要求4所述的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述胶体金标记的权利要求2所述的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体设置在所述固相载体上形成结合区；所述小反刍兽疫病毒H蛋白抗原设置...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈西钊，孙明，田克恭，吴培星，迟立超，冯向辉，孔汉金，申屠芬琴，张丽，
申请(专利权)人：北京世纪元亨动物防疫技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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