一种莎草醌及类似物在诱导干细胞成骨分化方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种莎草醌及类似物在诱导干细胞成骨分化方面的应用。本发明专利技术发现莎草醌及其类似物去甲莎草醌、羟基莎草醌具有多种药理活性，比如可以作为CIK细胞和NK细胞的冻存保护剂，可以促进CIK细胞和NK细胞体外增殖，可以促进脂肪干细胞成骨分化；本发明专利技术还提供了莎草醌及其类似物的单开环衍生物、双开环衍生物及其制备方法，莎草醌及其类似物的单开环衍生物、双开环衍生物可以促进CIK细胞体外增殖。经检索，现有技术没有公开过莎草醌及其类似物促进CIK细胞、NK细胞增殖和促进干细胞成骨分化的用途，也没有莎草醌及其类似物的单呋喃环、双呋喃环开环衍生物的报道。

【技术实现步骤摘要】
一种莎草醌及类似物在诱导干细胞成骨分化方面的应用
本专利技术属于化学领域，涉及已知天然产物的开发利用，具体涉及莎草醌及其类似物去甲莎草醌、羟基莎草醌在促进CIK细胞、NK细胞增殖和促进干细胞分化方面的应用，还涉及莎草醌及其类似物的单开环衍生物、双开环衍生物及其制备方法和在CIK细胞培养中的应用。
技术介绍
莎草醌及其类似物去甲莎草醌、羟基莎草醌为从两歧飘拂草的全草中分离得到的三种醌类化合物，其化学结构等信息如下所示。关于这三种化合物的研究极少，相关活性报道几乎为空白。申请人研究发现，这三种化合物具有优异的促进CIK细胞、NK细胞增殖和促进干细胞分化的作用。而且，在用于促进CIK细胞增殖的用途时，母核上的呋喃环开环后活性显著进一步增强。经检索，现有技术没有公开过莎草醌及其类似物促进CIK细胞、NK细胞增殖和促进干细胞分化的用途，也没有莎草醌及其类似物的单呋喃环、双呋喃环开环衍生物的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于填补现有技术的不足，提供莎草醌及其类似物去甲莎草醌、羟基莎草醌在促进CIK细胞、NK细胞增殖和促进干细胞分化方面的应用，还提供莎草醌及其类似物的单开环衍生物、双开环衍生物及其制备方法和在CIK细胞培养中的应用。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：一种莎草醌及其类似物的单开环衍生物，化学结构如下：上述单开环衍生物的制备方法，包括如下步骤：步骤S1，将如下化学结构的原料添加到用挥发性酸调至pH值6.2-6.4的酸性水溶液中；步骤S2，将上述溶液移入反应釜中，密闭后在170-190℃温度下进行水热反应，反应时间为8-12h，反应结束后自然降到常温；步骤S3，加热浓缩使挥发性酸挥发，剩余水溶液冷冻干燥即得。优选地，挥发性酸优选盐酸、硝酸、甲酸。优选地，1mL酸性水溶液添加3-5mg原料。上述单开环衍生物在CIK细胞体外培养方面的应用。一种莎草醌及其类似物的双开环衍生物，化学结构如下：上述双开环衍生物的制备方法，包括如下步骤：步骤S1，将如下化学结构的原料添加到用挥发性酸调至pH值5.3-5.5的酸性水溶液中；步骤S2，将上述溶液移入反应釜中，密闭后在170-190℃温度下进行水热反应，反应时间为8-12h，反应结束后自然降到常温；步骤S3，加热浓缩使挥发性酸挥发，剩余水溶液冷冻干燥即得。优选地，挥发性酸优选盐酸、硝酸、甲酸。优选地，1mL酸性水溶液添加3-5mg原料。上述双开环衍生物在CIK细胞体外培养方面的应用。如下化学结构的莎草醌及其类似物在CIK细胞冻存复苏和体外培养方面的应用：优选地，所述的应用为：将莎草醌及其类似物添加到冻存液中提高CIK细胞复苏率。优选地，所述的应用为：将莎草醌及其类似物添加到培养液中提高CIK细胞增殖率。如下化学结构的莎草醌及其类似物在NK细胞冻存复苏和体外培养方面的应用：优选地，所述的应用为：将莎草醌及其类似物添加到冻存液中提高NK细胞复苏率。优选地，所述的应用为：将莎草醌及其类似物添加到培养液中提高NK细胞增殖率。如下化学结构的莎草醌及其类似物在诱导干细胞成骨分化方面的应用：优选地，所述干细胞为脂肪干细胞。本专利技术发现：莎草醌及其类似物去甲莎草醌、羟基莎草醌具有多种药理活性，比如可以作为CIK细胞和NK细胞的冻存保护剂，可以促进CIK细胞和NK细胞体外增殖，可以促进脂肪干细胞成骨分化；本专利技术还提供了莎草醌及其类似物的单开环衍生物、双开环衍生物及其制备方法，莎草醌及其类似物的单开环衍生物、双开环衍生物可以促进CIK细胞体外增殖。附图说明图1为莎草醌及其类似物的单开环衍生物对CIK细胞体外增殖的影响；图2为莎草醌及其类似物的双开环衍生物对CIK细胞体外增殖的影响；图3为莎草醌及其类似物对CIK细胞冻存复苏(A)及体外增殖(B)的影响；图4为莎草醌及其类似物对NK细胞冻存复苏(A)及体外增殖(B)的影响；图5为莎草醌及其类似物对脂肪干细胞成骨分化的影响。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。实施例1：莎草醌及其类似物的单开环衍生物的制备首先，将莎草醌、去甲莎草醌、羟基莎草醌分别添加到酸性水溶液(去离子水用盐酸调节pH值至6.3，当然也可以用硝酸或甲酸等其他挥发性酸替代)中，1mL酸性水溶液添加4mg原料。然后将该溶液移入反应釜中，密闭后在180℃温度下进行水热反应，反应时间为10h，反应结束后自然降到常温。最后，加热浓缩，待溶液pH近中性时冷冻干燥即得莎草醌单开环衍生物、去甲莎草醌单开环衍生物、羟基莎草醌单开环衍生物，纯度均在95％以上。莎草醌单开环衍生物、去甲莎草醌单开环衍生物、羟基莎草醌单开环衍生物核磁数据见表1-3。实施例2：莎草醌及其类似物的双开环衍生物的制备首先，将莎草醌、去甲莎草醌、羟基莎草醌分别添加到酸性水溶液(去离子水用盐酸调节pH值至5.4，当然也可以用硝酸或甲酸等其他挥发性酸替代)中，1mL酸性水溶液添加4mg原料。然后将该溶液移入反应釜中，密闭后在180℃温度下进行水热反应，反应时间为10h，反应结束后自然降到常温。最后，加热浓缩，待溶液pH近中性时冷冻干燥即得莎草醌双开环衍生物、去甲莎草醌双开环衍生物、羟基莎草醌双开环衍生物，纯度均在95％以上。莎草醌双开环衍生物、去甲莎草醌双开环衍生物、羟基莎草醌双开环衍生物核磁数据见表1-3。表1莎草醌、莎草醌单开环衍生物、莎草醌双开环衍生物的核磁数据比较表2去甲莎草醌、去甲莎草醌单开环衍生物、去甲莎草醌双开环衍生物的核磁数据比较表3羟基莎草醌、羟基莎草醌单开环衍生物、羟基莎草醌双开环衍生物的核磁数据比较实施例3：莎草醌及其类似物提高CIK细胞冻存复苏率1、实验材料AIM-VCTSTM培养基购自Gibco公司，重组人白细胞介素2(rhIL-2)购自双鹭药业；淋巴细胞分离液购自NycomedPharma公司(NycomedPharmaAS，Oslo，Norway)，APC标记的抗CD56(CD56-APC)、PE标记的CD4(CD4-PE)、PerCP标记的CD3(CD3-PerCP)、APC-H7标记的CD8(CD8-APC-H7)单克隆抗体均购自BD公司。2、CIK细胞的分离、培养扩增、流式检测抽取健康志愿者的外周血至含有肝素钠的离心管中，离心获得血清和全血细胞，将全血细胞经密度梯度离心获得单个核细胞(PBMCs)。收集的PBMCs重悬于含10％灭活的自体血浆的AIM-VCTSTM培养基，调整细胞密度1.5×106/ml左右，并加入IFN-γ(1000U/ml)，细胞置37℃、5％CO2培养箱中培养，24h后加入抗CD3McAb(50ng/ml)、rhIL-2(500U/ml)和rhIL-1α(300U/ml)。之后每隔2天添加含有5％自体血浆、1000U/mlrhIL-2的AIM-VCTSTM培养基，每次补液后将细胞密度控制为1.5×106/ml。流式检测：取培养14天的CIK细胞，1000r/min离心5min后用1×PBS洗1次，1500r/min离心5min，调整细胞数约为7.5×105/管/100μl，加CD4-PE、CD3-PerCP、CD8-APC-H7、CD56-APC各2μl，吹匀，避光孵育20min，PBS洗1次，最后以本文档来自技高网...

【技术保护点】
如下化学结构的莎草醌及其类似物在诱导干细胞成骨分化方面的应用。

【技术特征摘要】
1.如下化学结构的莎草醌及其类似物在诱导干细胞成骨分化方面的应用。...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟弦，王倩，付俊毅，林溪，
申请(专利权)人：钟弦，
类型：发明
国别省市：江苏,32