利用固定化分枝杆菌细胞脱除汽油中有机硫的方法技术

一种利用固定化分枝杆菌细胞脱除汽油中有机硫的方法，其步骤顺序如下：　　　　（１）菌种选择：选用分枝杆菌中古的分枝杆菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｇｏｏｄｉｉ）ＤＳＭ　　４４４９２，草分枝杆菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｐｈｌｅｉ）ＡＴＣＣ　　１１７２８之一；　　　　（２）斜面培养：将上述菌株接种于含有质量百分比为１．５～２．０％的琼脂糖并加有０．１～１．０ｍｍｏｌ／Ｌ　　ＤＢＴ的ＭＡＭ固体斜面培养基上，３０～５０℃培养菌体２０～２６小时；　　　　（３）一级种子培养：将步骤（２）培养的菌体，无菌条件下用接种环接１～４环于２０～１００ｍＬ含有０．１～１．０ｍｍｏｌ／Ｌ　　ＤＢＴ的ＭＡＭ液体培养基中，３０～５０℃条件下，在摇床上振荡培养２０～２６小时，制得一级种子；　　　　（４）扩大培养：以体积比为５％的接种量，接一级种子于３００～１０００ｍＬ含有０．１～１．０ｍｍｏｌ／Ｌ　　ＤＢＴ的ＭＡＭ液体培养基中，３０～５０℃条件下，在摇床上振荡培养２０～２６小时，制得二级种子；　　　　（５）发酵罐培养：以体积比为５％的接种量，接二级种子于１．８～８Ｌ含有０．１～１．０ｍｍｏｌ／Ｌ　　ＤＢＴ的ＭＡＭ液体培养基中，３０～５０℃条件下，培养２０～２６小时；　　　　（６）收集菌体：在５０００ｇ条件下离心５～８分钟，收集步骤（５）制得的菌体，并用生理盐水洗涤２～３次；之后用生理盐水悬浮并加入表面活性剂，使表面活性剂的质量百分比浓度为０．０５～５％，得菌体细胞；　　　　（７）溶解海藻酸钠：用生理盐水配制质量百分比浓度为０．５～３％的海藻酸钠溶液，配制时，剧烈搅拌或在６０℃下水浴加热以保证充分溶解；　　　　（８）向步骤（７）所得的海藻酸钠溶液中加入质量百分比为０．０５～５％的表面活性剂；　　　　（９）向步骤（８）所得的溶液中加入步骤（６）所得的菌体细胞，使菌体浓度达到１０～３０克干细胞／升；　　　　（１０）用生理盐水配制质量百分比浓度为０．５～５％的ＣａＣｌ↓［２］溶液，并在所得的ＣａＣｌ↓［２］溶液中加入质量百分比为０．０５～５％的表面活性剂；　　　　（１１）将步骤（９）所得的菌体细胞悬浮液，以直径０．２～２ｍｍ的液滴滴入步骤（１０）所得的溶液中；充分交联０．５～６小时，形成固定化细胞体系；　　　　（１２）处理样品：在１００～１０００毫升的反应体系中，以每升２５～５００克的量加入步骤（１１）所得的固定化细胞，作为生物催化剂；加入水相和汽油，使水相和汽油的比例为３～１０∶１，在３０～４５℃条件下，１８０转／分钟振荡１６～２８小时，进行样品处理；　　　　（１３）分离样品：以１０，０００ｇ离心５～１０分钟分离步骤（１２）中处理后的样品，得到油相样品；　　　　（１４）样品检测：取１～５μＬ步骤（１３）中的油相样品，使用ＷＫ－２Ｄ微机综合动态微库仑分析仪（江苏电分析仪器厂）进行检测，测定汽油中残留的硫含量，得出脱除率。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：许平，李福利，冯进辉，马翠卿，杨春玉，王霞，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：