一种烟草黑胫病菌接种体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种烟草黑胫病菌接种体的制备方法。烟草黑胫病菌菌丝块在２８℃下恒温培养５～６天，培养物置于液体培养基中，１５０转／分钟、２８℃恒温培养７～８天，按３％～５％的体积比将液体菌液置于固体培养基中，在２８℃下恒温培养１０～１２天，合格的固体培养物破碎成菌丝块，再与粗米糠、粗麦麸混匀，平铺，通风晾干，待水分降至３５％～４０％时，即为所需的烟草黑胫病菌接种体。运用该技术可缩短培养时间１０～１５天，培养获得的接种体容易分散，且有效侵染数量大，具有扩大培养的潜力，污染杂菌少。本发明专利技术操作简便，成本低廉，具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种烟草黑胫病菌接种体的制备方法，包括以下步骤：　（１）从发病田块中采集病株，经过分离、纯化、致病力筛选测定，获得强致病力病菌，菌种采用菌丝块水浸法置于１０℃条件下恒温保存，备用；　（２）将烟草黑胫病菌菌丝块移到试管平板培养基上，在２８℃下恒温培养５～６天，选择菌丝纯白色、在平板表面形成一层较致密菌丝层的培养物，用作液体培养菌种；所述的平板培养基配方为：燕麦片３０ｇ，琼脂１７～２０ｇ，蒸馏水１０００ｍｌ，ｐＨ自然；　（３）用解剖刀切取烟草黑胫病菌菌丝块置于液体培养基中，每１００毫升培养液接种菌丝２～４块，１５０转／分钟、２８℃恒温培养７～８天；所述的液体培养基配方为：燕麦片３０ｇ，蒸馏水１０００ｍｌ，ｐＨ自然；培养得到的液体菌液要求：菌丝白色、菌液不浑浊，菌丝不成团，镜检已产生游动孢子囊，并发现液体中有大量带有鞭毛的游动孢子，每毫升孢子含量在１０↑［５］个以上；　（４）按３％～５％的体积比将液体菌液置于盛有固体培养基三角瓶中，在２８℃下恒温培养１０～１２天，所述的固体培养基配方为：粒径１～３ｍｍ的粗米糠和粗麦麸以８∶２的质量比混匀，加入４５％的清水，充分混匀；培养得到的固体培养物要求：菌丝长满整个固体基质，菌丝灰白色，菌丝低温诱导，镜检可产生游动孢子囊，液体中有大量带有鞭毛的游动孢子，每毫升孢子含量在１０↑［５］个以上；　（５）将合格的固体培养物破碎成０．５～１ｃｍ×０．５～１ｃｍ大小的菌丝块，再加入三分之一质量比的新鲜、干燥粗米糠、粗麦麸；米糠和麦麸按８∶２的质量比混匀，搅碎、混匀，平铺，通风晾干２～３天，待水分降至３５％～４０％时，即为所需的烟草黑胫病菌接种体。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：方敦煌，卢秀萍，李永平，宋春满，
申请(专利权)人：云南省烟草科学研究所，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]