一种提高乳杆菌抵御冷冻胁迫的方法，属于生物工程技术领域。本发明专利技术为一种通过在培养液中外源添加谷胱甘肽从而提高乳杆菌冷冻胁迫抗性的方法。主要包括外源谷胱甘肽的添加和乳杆菌的培养。通过整套方法，可以在３－５天内快速的得到具有冷冻耐受能力的目的菌。谷胱甘肽的外源添加，有效提高了乳杆菌在冷冻胁迫条件下的存活率，减少了乳杆菌在传统保藏条件下的死亡率。此外，由于谷胱甘肽对人畜安全无害并具有保健作用，这一思路可以用于奶制品工业发酵剂与冻干粉的制作过程。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术为一种通过外源添加谷胱甘 肽从而提高乳杆菌冷冻胁迫抗性的方法，主要包括外源谷胱甘肽的添加和乳杆 菌的培养，属于生物工程
技术介绍
乳杆菌是一类使用广泛的益生菌，在食品发酵行业被广泛应用。由于乳杆菌的最适生长温度一般在30°C-37。C，而在实际生产中，起酵物的冷冻保藏、低 温培育和发酵产品的冷藏过程都将使乳杆菌要经历远低于最适生长温度的冷冻 条件，从而影响其生命力。研究发现，乳杆菌胞内谷胱甘肽含量的增加能显著提高其对于冷冻胁迫的 耐受能力，但部分乳杆菌本身不具备合成谷胱甘肽的能力，或合成谷胱甘肽的 能力较弱。通过在培养液中外源添加一定量的谷胱甘肽，提高乳杆菌胞内谷胱 甘肽浓度，从而提高乳杆菌对于冷冻条件的适应能力。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，从而提高乳杆 菌对于冷冻条件的适应能力。本专利技术的技术方案的详细描述 ，通 过乳杆菌的前处理过程和乳杆菌的培养过程，在乳杆菌的培养过程之前通过在培养液中外源添加4.8 mmol/L的谷胱甘肽，从而显著提高乳杆菌菌体在冷冻保 藏条件下的存活率。所述的提高乳杆菌抵御冷冻胁迫的方法(1) 乳杆菌的前处理过程a) 挑乳杆菌单菌落接种到MMRS培养液中，30。C静置培养过夜；b) 将步骤a)所得培养液按2% v/v接种至20 mL MMRS培养液中，在培养 零时刻添加谷胱甘肽至终浓度4.8 mmol/L;(2) 乳杆菌的培养过程c) 将步骤b)所得培养液置于30。C静置培养36h至稳定中后期，10000 rpm 离心5min收集菌体。相关培养基MMRS培养基10g/L蛋白胨，8g/L牛肉膏，4g/L酵母膏，20g/L葡萄糖， 5g/L麦芽糖，5g/L醋酸钠，2g/L柠檬酸铵，lg/L吐温80， 2g/L磷酸氢二钾，0.2 g/L七水硫酸镁，0.05 g/L四水硫酸锰，pH调节至6.2。本专利技术的有益效果 ，主要包括外源 谷胱甘肽的添加和乳杆菌的培养。通过整套方法，可以在3-5天内快速的得到具 有冷冻耐受能力的目的菌。谷胱甘肽的外源添加，有效提高了乳杆菌在冷冻胁 迫条件下的生存力，减少了乳杆菌在传统保藏条件下的死亡率。此外，由于谷 胱甘肽对人畜安全无害并具有保健作用，这一思路可以用于奶制品工业发酵剂 与冻千粉的制作过程。 具体实施例方式实施例1按照上文所述方法，在添加4.8mmol/L谷胱甘肽的MMRS培养液中，按 2% (v/v)接种量接入活化的旧金山乳杆菌DSM20451T [APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, July 2007， p. 44694476 Vol. 73, No. 14，30°C静置培养至稳定中后期(36 h)， 10000 rpm离心5 min收集菌体。在4°C 和-20。C下胁迫30d后考察细胞存活率。与未添加谷胱甘肽的对照组相比，细胞 在4°C的存活率由原始菌的0.09%提高到0.70%，存活率提高7.8倍；在-20。C 的存活率由原始菌的0.60%提高到3.53%，存活率提高5.9倍。实施例2按照上文所述方法，在添加4.8mmol/L谷胱甘肽的MMRS培养液中，按 2% (v/v)接种量接入活化的旧金山乳杆菌DSM20451T， 30°C静置培养至稳定中 后期(36 h)， 10000 rpm离心5 min收集菌体。在4°C和-20。C下胁迫15 d后考察 细胞重培养情况。与未添加谷胱甘肽的对照组相比，细胞在4。C的胁迫后重培 养中，细胞的延迟期由32h縮短为18.5h，细胞在-20。C的胁迫后重培养中，细 胞的延迟期由24h縮短为12h。权利要求1、，其特征是通过乳杆菌的前处理过程和乳杆菌的培养过程，在乳杆菌的培养过程之前通过在培养液中外源添加4.8mmol/L的谷胱甘肽，从而显著提高乳杆菌菌体在冷冻保藏条件下的存活率。2、 根据权利要求1所述的提高乳杆菌抵御冷冻胁迫的方法，其特征是(1) 乳杆菌的前处理过程a) 挑乳杆菌单菌落接种到MMRS培养液中，30。C静置培养过夜；b) 将步骤a)所得培养液按2% v/v接种至20 mL MMRS培养液中，在培养 零时刻添加谷胱甘肽至终浓度4.8 mmol/L;(2) 乳杆菌的培养过程c) 将步骤b)所得培养液置于30。C静置培养36h至稳定中后期，10000 rpm 离心5 min收集菌体。全文摘要，属于生物工程
本专利技术为一种通过在培养液中外源添加谷胱甘肽从而提高乳杆菌冷冻胁迫抗性的方法。主要包括外源谷胱甘肽的添加和乳杆菌的培养。通过整套方法，可以在3-5天内快速的得到具有冷冻耐受能力的目的菌。谷胱甘肽的外源添加，有效提高了乳杆菌在冷冻胁迫条件下的存活率，减少了乳杆菌在传统保藏条件下的死亡率。此外，由于谷胱甘肽对人畜安全无害并具有保健作用，这一思路可以用于奶制品工业发酵剂与冻干粉的制作过程。文档编号C12N1/36GK101451118SQ200810242708公开日2009年6月10日 申请日期2008年12月15日 优先权日2008年12月15日专利技术者堵国成, 廖鲜艳, 娟 张, 峰 薛, 坚 陈 申请人:江南大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种提高乳杆菌抵御冷冻胁迫的方法，其特征是通过乳杆菌的前处理过程和乳杆菌的培养过程，在乳杆菌的培养过程之前通过在培养液中外源添加４．８ｍｍｏｌ／Ｌ的谷胱甘肽，从而显著提高乳杆菌菌体在冷冻保藏条件下的存活率。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，张娟，堵国成，廖鲜艳，薛峰，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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