式（Ⅰ）化合物可用于制备１，５－苯并硫氮杂＊类，１，５－苯并硫氮杂＊类可用作酶（如蛋白酶、白介素－１β－转化酶、弹性蛋白酶或血管紧张肽－转化酶）抑制剂，或者ＧＰＣＲ拮抗剂（缩胆囊素、血管紧张肽Ⅱ受体）。本发明专利技术涉及一种制备式（Ⅰ）化合物（其中Ｒ↑［１］、Ｒ↑［２］、Ｒ↑［３］和ｎ如说明书中所描述的）的新方法，该方法包括在含有一种有机共溶剂的水性系统中使式（Ⅱ）化合物（其中Ｒ↑［１］、Ｒ↑［２］、Ｒ↑［３］、ｎ和Ｒ↑［４］如说明书中所描述的）与一种蛋白酶反应。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种制备式I化合物的新的酶催化方法， 其中R1是氢或烷基；R2是氨基保护基团；每个R3独立地是卤素、羧基、烷氧羰基、链烯氧基羰基或苄氧基羰基；n是1或2。在EP0407033A中描述了将不是2-卤素丙酸的2-取代的酸的酯外消旋混合物经酶催化的立体选择性地水解成相应的对映异构酸。在皱落假丝酵母(Candida rugosa)脂肪酶同工酶、有机溶剂(例如甲苯)和还原剂的存在下进行该反应。该方法对立体选择性地生产S-酮洛芬、S-布洛芬、S-非诺洛芬、S-2-苯基丙酸和S-吲哚洛芬尤其有用。在EP0178553中描述了用胰凝乳蛋白酶通过选择性水解相应的烷基酯制备芳族取代的L-氨基酸的方法。在DE2804892中描述了用丝氨酸蛋白酶、特别是枯草蛋白酶Carlsberg水解N-酰基-DL-苏氨酸酯制备光学纯的N-酰基-L-苏氨酸的方法。但是，迄今为止，文献中还没有描述过制备式I化合物的酶催化反应方法。通过化学水解合成式I化合物的尝试导致低产量和起始物质的分解。所以，本专利技术的目的是提供一种新的、创造性的制备取代的2-氨基-3-(2-氨基-苯硫基)-丙酸的方法。可通过本专利技术的方法生产式I化合物，本专利技术提供了一种新的制备式I的取代的2-氨基-3-(2-氨基-苯硫基)-丙酸的方法， 其中R1是氢或烷基；R2是氨基保护基团；每个R3独立地是卤素、羧基、烷氧羰基、链烯氧基羰基或苄氧基羰基；n是1或2，该方法包括在含有一种有机共溶剂的含水体系中使式II化合物与蛋白酶反应， 其中R1、R2、R3和n如上所定义，R4是烷基或苄基。使用本文描述的酶催化方法使得在温和的反应条件下选择性地水解酯成为可能。在本文所给的结构式中，楔形键 表示取代基在纸平面的上方。本文所用术语“烷基”表示含有1到12个碳原子、任选取代的直链或支链的烃残基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基和十二烷基，包括它们的不同异构体。烷基链的适宜的取代基可以是选自1-3个卤素原子(如氟或氯)和C1-4-烷氧基(如甲氧基或乙氧基)。取代的烷基的实例是2-氯乙基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基或2-甲氧基乙基。R1中烷基如上定义并且优选是含有1到7个碳原子的直链或支链烃残基。R1中烷基更优选甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。R4中烷基如上定义并且优选是含有1到7个碳原子的任选取代的直链或支链烃残基。烷基链的适宜取代基可以选自1-3个卤素原子(如氟或氯)和C1-4-烷氧基(如甲氧基或乙氧基)。取代的烷基的实例是2-氯乙基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基或2-甲氧基乙基。R4中烷基更优选是含有1到7个或1到4个碳原子的直链烃残基。其实例是甲基、乙基、丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基。优选的实例是甲基、乙基或丙基。R4中最优选的烷基是甲基。本文所用术语“氨基保护基团”指如在“有机合成中的保护基团”(GreenT.Protective Groups in Organic Synthesis，第5章，John Wiley和Sons，Inc.(1981)，218-287页)中所描述的肽化学中所用的那些基团，如烯丙氧基羰基基团(ALLOC)、低级烷氧基羰基基团(例如叔丁氧基羰基(t-BOC))、取代的低级烷氧基羰基基团(例如三氯乙氧基羰基)、任选取代的芳氧基羰基基团(例如对-硝基苄氧基羰基、苄氧基羰基(Z)或苯氧基羰基)、烷酰基基团(例如甲酰基、乙酰基)、芳酰基基团(例如苯甲酰基)、卤代烷酰基基团(例如三氟乙酰基)或甲硅烷基保护基团(例如叔丁基二甲基甲硅烷基)。优选的氨基保护基团是苄氧基羰基、叔丁氧基羰基、烯丙氧基羰基或苯甲酰基，特别优选的氨基保护基团是叔丁氧基羰基。术语“烷氧基羰基”表示连接到羰基基团(＞C＝O)的C1-7-烷氧基。烷氧基的实例是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、1-仲丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基和庚氧基，包括它们的不同异构体。烷氧基羰基基团的实例是甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、叔丁氧基羰基等。优选的低级烷氧基羰基是叔丁氧基羰基。术语“链烯氧基羰基”表示连接到羰基基团(＞C＝O)的链烯氧基。本文所用术语“链烯基”表示具有2到8个碳原子、优选2到4个碳原子并且具有至少一个烯烃双键的未取代或取代的烃链基，包括它们的不同异构体。实例是乙烯基、烯丙基或异丙烯基。R3的优选的“链烯氧基羰基”是烯丙氧基羰基或异丙烯氧基羰基，更优选的是烯丙氧基羰基。术语卤素表示氟、氯、溴或碘。优选的卤素是溴。数字n可以是1或2，优选数字n是1。取代基R3可以在任何可能的位置连接到苯环。如果n是1，R3可以在苯环的3、4、5或6位。优选地，R3取代基处于4位。如果n是2，两个R3取代基可以相互独立地位于苯环的3、4、5或6位。本专利技术的一个优选的实施方案是一种制备式I化合物的方法，其特征是式II化合物是 其中R1、R2、R3、R4和n如上定义。在本专利技术进一步优选的实施方案中，R1是氢或烷基。更优选R1是氢；R2是氨基保护基团。更优选R2是氨基保护基团；每个R3独立地是卤素、羧基或链烯氧基羰基；R4是烷基或苄基。更优选R4是烷基；n是1或2。更优选n是1。在本专利技术另一个优选的实施方案中，在含有有机共溶剂的含水体系中，在pH 4.0-10、优选6.0-8.5下用蛋白酶实施该方法。在将式II的底物酶催化水解后，通过酸化和随后萃取分离对映体纯的式I产物。式II化合物可用于L或D对映异构体的任何可能的混合物中。优选用外消旋混合物或者只含有L-异构体的混合物完成转化。当使用异构体混合物时，在酸化反应介质之前通过萃取步骤除去未反应的D-酯并随后萃取L-酸。催化反应的适宜的酶是蛋白酶，优选微生物来源的廉价散装蛋白酶，更优选为芽孢杆菌蛋白酶(象Novo Nordisk生产的Savinase)或枯草蛋白酶例如Novo Nordisk的枯草蛋白酶Carlsbeg(Alkalase)或者Solvay生产的枯草蛋白酶(蛋白酶-L)或者曲霉蛋白酶(象Amano的Prozyme 6)或者Tritachium蛋白酶(Fluka的Proteinase K)。该反应的作为催化剂的最优选的酶是枯草蛋白酶Carlsberg(例如Norvo Nordisk的Alcalase)。作为备选方案，这些酶可以以固定的形式使用。反应在含有有机共溶剂如不水混溶的溶剂或者水可混合的有机共溶剂的含水体系中进行。水不混溶的溶剂可以以任何比例用于水相中，优选的比例是25-75％(v/v)。水混溶的有机共溶剂的用量可以高至酶的耐受量，通常是5-25％(v/v)，但是不能超过50％(v/v)，例如对于枯草蛋白酶Carlsberg就是如此。反应的反应温度为0℃到50℃，优选反应温度是15℃到40℃之间，最优选的反应温度是15℃到25℃之间。对于水相，可以使用本领域进行生化转化的常用缓冲溶液，例如最高1M，优选约5mM到50mM的磷酸钠或磷酸钾缓冲液。这种缓冲溶液还可以含有一种常用盐如氯化钠或氯化钾，以及LiSCN、Na2SO4或一种多羟基醇例如糖；该盐浓度最高1M。适宜的有机共溶剂是技术上常用的溶剂。实本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备式Ⅰ化合物的方法 ＊＊＊ Ⅰ 其中 Ｒ↑［１］是氢或烷基； Ｒ↑［２］是氨基保护基团； 每个Ｒ↑［３］独立地是卤素、羧基、烷氧羰基、链烯氧基羰基或苄氧基羰基； ｎ是１或２， 该方法包括： 在含有一种有机共溶剂的水性系统中，使式Ⅱ化合物与一种蛋白酶反应： ＊＊＊ Ⅱ 其中Ｒ↑［１］、Ｒ↑［２］、Ｒ↑［３］和ｎ如上定义，Ｒ↑［４］是烷基或苄基。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：K布莱谢尔，S博思威克，H伊丁，M罗杰斯埃文斯，S施密德，HM佟，B沃兹，
申请(专利权)人：弗哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]
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