一种短密青霉菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种短密青霉菌广西变种ＹＭＳ－１１０，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为：ＣＣＴＣＣ　　ＮＯ：Ｍ　　２０４０９６，保藏日期为：２００４年１２月１５日。分类命名：Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　　ｂｒｅｖｉｃｏｍｐａｃｔｕｍ　　ｖａｒ．ＹＭＳ－１１０。根据微生物形态学及国外相关资料的描述，结合ＹＭＳ－１１０的各种培养特征和形态特征，将ＹＭＳ－１１０初步定为Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｂｒｅｖｉｃｏｍｐａｃｔｕｍ系的一个变种即Ｐ．ｂｒｅｖｉｃｏｍｐａｃｔｕｍｖａｒ．本发明专利技术还提供了短密青霉菌广西变种ＹＭＳ－１１０在发酵制备霉酚酸中的应用。本发明专利技术所述的短密青霉菌广西变种ＹＭＳ－１１０是目前分离到的一种天然高单位的霉酚酸产生菌，发酵性能优良，极具开发、应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新型微生物及其用途，尤其涉及一种短密青霉菌及其在制备霉酚酸中的应用。
技术介绍
免疫抑制剂在器官移植中用于防治排斥反应，即干扰受体对外来抗原的识别和非自身细胞的清除。1954年，人类第一例同卵双生子间肾脏移植的手术取得成功以后，至今40多年来医学科学在器官移植方面的研究有了很多重大的突破。1978年，环孢素A(cyclosporine A，CsA)的临床使用为器官移植开辟了新纪元。大多数患者肾移植2a存活率已超过80％，而患者生存率也有所提高。近年来，新的免疫抑制剂层出不穷，其中霉酚酸酯就是其中较好的一个。霉酚酸酯(mycophenolate mofetil，MMF)是青霉属产生的具有抗代谢的霉酚酸(mycophenolic acid，MPA)的半合成物，是霉酚酸(MPA)的2-乙基酯类衍生物，脱酯化合形成具有免疫抑制活性的代谢物。MPA是高效、选择性、非竞争性、可逆性抑制次黄嘌呤脱氢酶阻断鸟嘌呤核苷酸的起始合成途径，使鸟嘌呤核苷酸耗尽，进而阻断DNA的合成。MPA选择性的作用于T、B淋巴细胞，抑制其增殖。再在动物肾移植实验及临床肾移植中已证实霉酚酸酯在对肾移植后排斥反应的预防和难治性排斥的治疗中起着重要的作用。抑制淋巴细胞增殖所需的MPA浓度，对大多数淋巴细胞无抑制作用，MPA还能通过直接抑制B细胞的增殖来抑制抗体的形成。治疗量的MMF并不抑制多糖激活人外周淋巴细胞产生白介素-I，也不抑制有丝分裂原激活的外周淋巴细胞合成白介素-II和其受体表达，这点也不同于环孢素、FK-506。此外，MPA介导的体外淋巴细胞三磷酸鸟苷的耗竭可抑制甘露糖和岩藻糖转化成糖蛋白。通过这种机制，MPA可降低淋巴细胞和单核细胞在慢性炎症部位的聚集。
技术实现思路
本专利技术既是为了提供一种新的高单位的霉酚酸产生菌，及该菌种在制备霉酚酸中的应用。本专利技术采用的技术方案是一种短密青霉菌广西变种YMS-110，分类命名为Penicilliumbrevicompactum var.YMS-110，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO.M 204096，保藏日期为2004年12月15日。所述的短密青霉菌变种YMS-110的菌种于1993年4月自广西岑溪土柱山区土壤样品分离得到。所述的短密青霉菌变种YMS-110的菌落特性在PDA上菌丝生长良好，菌落呈灰绿色絮状，菌落表面有少量放射性褶皱，边缘匍匐状，背面黄褐色，分生孢子梗多轮，分枝似帚，帚状枝分枝多，短而紧密，瓶梗为柱形细胞，向上渐变小，分生孢子呈绿色，直径为2～3μm，表面光滑，链状排列。综上所述，根据微生物形态学及国外相关资料的描述，结合YMS-110的各种培养特征和形态特征，将YMS-110初步定为Penicilliumbrevicompactum系的一个变种即P.brevicompactum var.所述的短密青霉菌变种YMS-110可应用于发酵制备霉酚酸。具体的，是用短密青霉菌变种YMS-110以10～20％接种量，在含有水溶性较强的氮源和碳源培养基中，在25～29℃下、130～200rpm转速下培养5～6天，得到所述的霉酚酸。所述的培养基中有效成分含量如下葡萄糖10％； KH2PO40.3％；MgSO40.2％；甘氨酸 0.7％；L-蛋氨酸 0.025％； FeSO4·7H2O 0.0022％；CuSO4·5H2O0.003％； ZnSO4·5H2O 0.024％；MnSO4·5H2O0.0012％。本专利技术所述的短密青霉菌广西变种YMS-110及其应用的有益效果体现在所述的短密青霉菌广西变种YMS-110是目前分离到的一种天然高单位的霉酚酸产生菌，发酵性能优良，极具开发、应用前景。附图说明本专利技术所述的短密青霉菌广西变种YMS-110，在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏号为CCTCC NOM 204096，保藏日期为2004年12月15日。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但不能将方案中所涉及的方法及技术参数理解为对本专利技术的限制。实施例1短密青霉菌变种YMS-110的菌落特征1.材料和方法1.1菌种YMS-1101.2培养基1.2.1马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)土豆丁200g，用1000ml水煮沸30分钟，纱布过滤待用。土豆汁20％葡萄糖 2％琼脂 2％pH 自然121℃高压蒸汽灭菌15分钟1.2.2麦芽汁琼脂将发酵啤酒的原料(未加酒花)，稀释至12柏林，加琼脂15克，溶化后分装，121℃高压蒸汽灭菌15分钟。1.2.3酵母麦芽汁琼脂酵母膏 3.0g葡萄糖 10.0g麦芽汁 3.0g蒸馏水 1000g蛋白胨 5.0g琼脂 20.0g121℃高压蒸汽灭菌15分钟1.2.4察氏琼脂蔗糖 30gNaNO333gMgSO4·7H2O0.5gKCl 0.5gFeSO4·5H2O0.01gK2HPO41g琼脂 15g蒸馏水1000ml121℃高压蒸汽灭菌15分钟1.3方法将菌株按下列方法分别置于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、麦芽汁琼脂、酵母麦芽汁琼脂、察氏琼脂上培养，观察该种菌株的特性①载片培养菌株接种在载片中央的小块培养基上，加上盖玻片，28℃培养15天观察结果。②插片培养将盖玻片插入已接种的培养基里，28℃培养20天观察结果。③培养物观察肉眼或借助放大镜及低倍镜观察菌落特征，用高倍镜及电子显微镜观察个体形态特征。1.4结果描述1.4.1菌落特征YMS-110在PDA上菌丝生长良好，菌落呈灰绿色絮状，菌落表面有少量放射性褶皱，边缘匍匐状，背面黄褐色，7天菌落直径为7mm。分生孢子梗多轮，分枝似帚，帚状枝分枝多，短而紧密。瓶梗为柱形细胞，向上渐变小。分生孢子呈绿色，直径为2～3μm，表面光滑，链状排列。1.4.2 YMS-110在其他培养基上的菌落特征(见表1)表1YMS-110在其他培养基上的菌落特征 1.5结论根据微生物形态学及国外相关资料的描述，结合YMS-110的各种培养特征和形态特征，将YMS-110初步定为Penicillium brevicompactum系的一个变种即P.brevicompactum var.实施例2发酵培养制备霉酚酸2.1种子库菌种培养及保存培养基土豆葡萄糖琼脂(PDA)土豆丁200g，用1000ml水煮沸30分钟，纱布过滤待用。土豆汁20％葡萄糖2％琼脂 2％pH 自然培养温度27℃～28℃培养时间10天保存方法培养10天的斜面孢子加入30％甘油，洗下孢子，将孢子悬液分装在10ml试管中，-70℃保存。2.2摇瓶种子培养2.2.1培养基葡萄糖 1％酵母浸出粉 0.1％麦芽浸出粉 0.1％蛋白胨 0.2％pH 6.5培养温度27℃～28℃培养时间2天装量500ml三角瓶装上述培养基100ml接种量2％摇床转速220～240rpm2.2.2种子质量指标菌浓15～20％镜检无杂菌，染色较深且均匀，菌丝粗壮，有结球现象。2.3种子罐种子培养基2.3.1培养基葡萄糖 1％酵母浸出粉 0.1％麦芽浸出粉 0.1％蛋白胨 0.2％pH 6.5装量150L种子罐内装培养基50L培养温度28±0.5℃培养时间48～76小时空气流量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种短密青霉菌广西变种ＹＭＳ－１１０，分类命名为Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｂｒｅｖｉｃｏｍｐａｃｔｕｍｖａｒ．ＹＭＳ－１１０，由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为：ＣＣＴＣＣＮＯ：Ｍ２０４０９６，保藏日期为：２００４年１２月１５日 。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱健，高兴蓉，陈晓霞，朱亮，
申请(专利权)人：杭州华东医药集团生物工程研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]