利用来自酵母的胆固醇酯酶进行的对映纯中间体的酶促合成制造技术

本发明专利技术涉及一种制备可用于合成有价值的药学活性化合物、例如ＭＡＯＢ抑制剂的对映纯中间体的方法以及式（Ⅰ）和（Ⅱ）的新中间体，其中Ｒ↑［２１］、Ｒ↑［２２］、Ｒ↑［２３］和Ｒ↑［２４］如说明书和权利要求书中所定义。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种制备可用于合成有价值的药学活性化合物的对映纯(enantipoure)中间体的方法，并涉及这些新中间体。更具体而言，本专利技术提供了一种制备式I化合物和/或式II化合物的方法，所述的式I化合物是 其中R21、R22和R23彼此独立地是氢或卤素；且R24是氢、甲基或卤素；所述的式II化合物是 其中R1是(C1-C8)-烷基、(C2-C4)-链烯基或式A的基团R3(OCH2CH2)n- (A)其中R3是氢或(C1-C4)-烷基；且n是1、2或3；并且R21、R22、R23和R24具有上文所定义的含义，该方法包括使式III化合物与来自酵母的胆固醇酯酶接触， 其中R1、R21、R22、R23和R24具有上文所定义的含义。在本文所给出的结构式中，楔形键( )表示取代基位于纸平面之上。在本文所给出的结构式中，虚线键( )表示取代基位于纸平面之下。本文所用的术语“烷基”表示含有1至8个碳原子的直链或支链的烃残基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、戊基、己基、庚基、辛基，包括它们的各种异构体。优选地，术语“烷基”表示含有1至5个碳原子的直链或支链的烃残基，其可以是未被取代的或者被一个或一个以上取代基取代。取代基的实例包括羟基、(C1-C4)-烷氧基、(C3-C6)-环烷基、芳基和卤素原子。被取代的烷基的实例包括3-羟基丁基、4-甲氧基丁基、3-乙氧基丙基、3-环己基丙基、苄基、2-苯基乙基、2-氟乙基、2-氯乙基、2，2-二氯乙基、3-溴丙基或2，2，2-三氟乙基等。链烯基的实例包括乙烯基、烯丙基、异丙烯基、丁烯基以及丁烯基的异构体，例如1-或2-丁烯基。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。卤素的实例包括氟、氯和溴。胆固醇酯酶(EC 3.1.1.13)是一族具有广泛特异性的酶，其也被称为胆甾醇酯酶；胆固醇基酯合酶；三萜烯醇(triterpenol)酯酶；胆固醇基酯酶；胆固醇基酯水解酶；固醇酯水解酶或胆固醇酯水解酶。它们属于还包括酯酶、蛋白酶和脂肪酶的水解酶族。来自酵母的胆固醇酯酶的实例包括来自假丝酵母属(Candida)、例如来自柱状假丝酵母(Candida cylindracea)的胆固醇酯酶。例如，胆固醇酯酶可以通过对可商购获得的Lipase MY(Meito Sangyo，日本)(其是由柱状假丝酵母获得的)进行纯化来获得。该纯化可以是部分纯化。可商购获得的来自酵母的胆固醇酯酶的实例有Roche Applied Science，Industrial Products，Enzyme Projects，Sandhofer Str.116，D-68305 Mannheim，德国提供的订货号为例如10129046103(固体制剂)、0393916或0396800(液体制剂)的来自柱状假丝酵母的胆固醇酯酶。因此，在一个实施方案中，本专利技术提供了这样一种方法，其中来自酵母的胆固醇酯酶是柱状假丝酵母的胆固醇酯酶。来自酵母的胆固醇酯酶可以以可溶性形式或者以被固定的形式被使用。如何固定酶的各种选择是本领域技术人员已知的。酶促反应可以在水性系统或在水性-有机系统中进行。底物、即式III化合物可以例如以混悬液形式被应用。其浓度可以为0.5-20％总浓度(w/w)，或者2-10％。式III化合物可以根据已知方法用任选地被取代的氨基苯酚由衣康酸来制备。在一个实施方案中，本专利技术提供了这样一种方法，其中在式III中，R21、R22、R23和R24彼此独立地是氢或氟。在另一个实施方案中，本专利技术提供了这样一种方法，其中在式III中，R21、R22、R23和R24是氢。在另一个实施方案中，本专利技术提供了这样一种方法，其中在式III中，R1是甲基或乙基。在一个实施方案中，本专利技术提供了一种制备(S)-1-(4-羟基苯基)-5-氧代-吡咯烷-3-甲酸和(R)-1-(4-羟基苯基)-5-氧代-吡咯烷-3-甲酸酯的方法，其包括使(RS)-1-(4-羟基苯基)-5-氧代-吡咯烷-3-甲酸酯与来自酵母的胆固醇酯酶接触。可以使用已知可用于生物化学转化的常见缓冲液如磷酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液等。缓冲液浓度可以为不超过1M，或者为约3mM至约250mM。所述酶促反应可以在存在有机助溶剂(co-solvent)的情况下进行。所述有机助溶剂可以是水可混溶性的或水不可混溶性的助溶剂。当存在水可混溶性有机助溶剂时，其总浓度可以为不超过30％或不超过25％。水不可混溶性有机助溶剂可以以任何比例、以总浓度被使用。有机助溶剂的实例包括技术上常见的溶剂如醚类(例如四氢呋喃、二烷或叔丁基甲基醚(TBME))、低级醇(例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、叔丁醇)、酯类(例如乙酸乙酯)、极性非质子溶剂(例如二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺或丙酮)和链烷烃(例如庚烷)或环烷烃(例如环己烷或甲基环己烷)。因此，在一个实施方案中，本专利技术提供了这样一种方法，其中酶促反应在存在有机助溶剂的情况下进行，所述的有机助溶剂选自水不可混溶性助溶剂，例如TBME、庚烷；环己烷和甲基环己烷。在另一个实施方案中，本专利技术提供了这样一种方法，其中酶促反应在存在环己烷或甲基环己烷的情况下进行。所述酶促反应可以在存在水溶性添加剂的情况下进行，例如在存在盐、多元醇、聚乙二醇或其衍生物的情况下进行。添加剂可对酶具有活化、选择性触发或稳定作用。盐的实例包括氯化钠或氯化钾，也可以是其它添加剂例如LiSCN、Na2SO4和Mg2SO4。特别地，水性缓冲液可含有已知是酶活化剂的镁离子。盐可以以不超过1M或不超过0.5M的浓度存在。因此，在一个实施方案中，本专利技术提供了这样一种方法，其中酶促反应在存在镁盐的情况下进行。多元醇的实例包括甘油和糖。多元醇可以以不超过水相40％(w/w)的浓度存在。任选地为单-或二甲基醚形式的聚乙二醇(PEG)可以以不超过50％(w/v)或以5％至25％的浓度被使用。例如，可以使用任选地为单-或二甲基醚形式的4kD至6kD的聚乙二醇。在加入酶后，可以将反应混合物的pH维持在所选择的pH-值下，例如所述酶促反应可以在pH 3.5至pH 10.0或pH 4.0至pH 8.0或pH 5.5至pH 7.0的pH下进行。用本领域技术人员已知的方法维持恒定的pH值，例如控制性地加入碱例如氢氧化钠或氢氧化钾或碳酸氢钠或碳酸氢钾的水溶液或者选择具有足够缓冲容量的缓冲液。所述酶促反应可以在4℃至45℃的温度下或在15℃至35℃的温度下或在26℃至32℃的温度下进行。反应终止后，可以通过萃取将式I化合物和式II化合物分离出来。例如，可以通过用适宜的有机溶剂例如二氯甲烷萃取反应混合物来对式II化合物进行常规后处理。将溶液浓缩后，式II化合物可析出结晶，从而可以容易地增加其光学纯度。残留在水相中的对映体形式的(antipodal)式I化合物可以通过随后在更低pH值下对水相进行萃取来分离。这通常可以通过对保留的水相进行酸化和将所形成的沉淀滤出或者通过用适宜的有机溶剂例如乙酸乙酯进行萃取来实现。将溶液浓缩后，式I化合物可析出结晶，从而可以增加其光学纯度。因此，在一个实施方案中，本专利技术提供了一种制备式I化合物和/或式II化合物的方法，其包括(a)使式III化合物与来自酵母本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备式Ⅰ化合物和／或式Ⅱ化合物的方法，所述的式Ⅰ化合物是＊＊＊（Ⅰ）其中Ｒ↑［２１］、Ｒ↑［２２］和Ｒ↑［２３］彼此独立地是氢或卤素；且Ｒ↑［２４］是氢、甲基或卤素；所述的式Ⅱ化合物是 ＊＊＊（Ⅱ）其中Ｒ↑［１］是（Ｃ↓［１］－Ｃ↓［８］）－烷基、（Ｃ↓［２］－Ｃ↓［４］）－链烯基或式Ａ的基团Ｒ↑［３］（ＯＣＨ↓［２］ＣＨ↓［２］）↓［ｎ］－（Ａ）其中Ｒ↑［３］是氢或 （Ｃ↓［１］－Ｃ↓［４］）－烷基；且ｎ是１、２或３；并且Ｒ↑［２１］、Ｒ↑［２２］、Ｒ↑［２３］和Ｒ↑［２４］具有上文所定义的含义，该方法包括使式Ⅲ化合物与来自酵母的胆固醇酯酶接触，＊＊＊（Ⅲ）其 中Ｒ↑［１］、Ｒ↑［２１］、Ｒ↑［２２］、Ｒ↑［２３］和Ｒ↑［２４］具有上文所定义的含义。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：H伊丁，D克鲁梅纳赫，B沃尔兹，W沃斯特尔，
申请(专利权)人：弗哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]