富硒联合固氮菌及其冷冻干粉、液体和固体肥料的制法制造技术

本发明专利技术提出了富硒联合固氮菌剂及其冷冻干粉、液体肥料和固体肥料的制法，富硒联合固氮菌液的培养基是由Ｎａ↓［２］ＳｅＯ↓［３］、蛋白胨、酵母膏、稀土水溶液、ＮａＣｌ、水等组成，经过茄子瓶分别接入三种菌株：固氮粪产碱杆菌其代号为Ａ１５，固氮巨大芽胞杆菌其代号为Ｎ１３，固氮阴沟肠杆菌其代号为Ｅ２６。摇瓶扩大培养、种子罐培养发酵罐液体发酵、防腐处理调整ｐＨ值，而制得，即为液体菌肥；发酵罐发酵后，经过真空冷冻干燥的技术常规操作即得冷冻干粉。其固体肥料的培养基包括草炭、鸡粪、石膏、稀土、ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］、Ｎａ↓［２］ＳｅＯ↓［３］.５Ｈ↓［２］Ｏ，接入发酵罐发酵的菌种，经过堆料发酵、即得成品。本发明专利技术工艺合理成熟、适于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及联合固氮工程菌
，具体涉及富硒联合固氮菌及其冷冻干粉、液体和固体肥料的制法。
技术介绍
固氮菌肥的开发，是建设新农业影响深远的科技革命，它在促进农作物的生长、提高其抗逆性，增加产量的同时，还可以克服化肥对土壤所造成的板结、荒漠，对于自然生态、环境保护、绿色食品等领域，都将产生积极的影响，随着建设现代化农业伟大工程实施步伐的加快，联合固态氮菌肥的开发呈现着光明的前景，然而由于联合固氮菌肥自身的条件所限，对农作物的抗逆性、促生长、增产量有着明显的效果，但对于改善农作物的品质方面如健身保健功能却显得逊色，随着人们生活质量的不断提高，人们对农作物的要求在满足其基本的生理需要的同时，希望能收到强身健身保健的功效。现代科学表明经过生化反应的硒，是很容易被人体吸收的，而且在强身健脑、增强免疫力、抗衰老等方面，都具有显著的功效，培养含有硒的微生物菌种并制成肥料，经过生化反应生成具有强身保健功能的农作物，该肥能够降低各种农药的使用量，是人们期盼的绿色生态环保型生物肥。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提出了工艺合理、成熟、稳定性好，可靠性大，对农作物的生长具有抗病力强、增产、改善品质等明显效果的富硒的联合固氮菌及其冷冻干粉、液体和固体肥料。本专利技术是采用这样的技术方案本实现的。一种富硒联合固氮菌的制法(一)、其培养基的组分重量比为Na2SeO30.8-1.0％蛋白胨 0.9-1.1％酵母膏 0.4-0.6％NaCl 0.4-0.6％色氨酸 50μg/ml20％稀土水溶液 1-2％水 其余用水培养基配制好后装入茄子瓶按50μg/ml加入色氨酸，经灭菌后按5％-10％接种，在30℃-34℃200rmp，摇瓶发酵24-48小时；(二)、种子罐按其容积的60％注入培养基灭菌后，温度降到50℃以下时，按35ug/ml注入色氨酸，温度低于35℃后按5-10％接入第(一)步完成的菌种；(三)、011号罐A15单独发酵，012号罐N13.E26混合发酵，其发酵条件为温度30-35℃。压力0.05Mpa，空气流量1∶0.2-0.3，转速200rmp时间8-10h，其后压入大罐，两罐压出比为2∶1，取样为OD000＞1，PH＞7.5，镜检菌体形态；(四)、大罐灭菌后，温度低于50℃，注入色氨酸，按25μg/ml，温度低于35℃时，接入第(三)步完成的菌种1-3％，在温度30℃-35℃。压力0.05Mpa、空气流量1∶0.2-0.3、转速200rmp下，发酵6-8h，取样OD＞0.9、PH＞7-8.5，IAA值0.3-0.4，镜检菌数大于108个/ml；(五)、加防腐剂、保护剂、调整PH至7-7.5，符合相关标准要求，(六)、封装产品；得富硒联合固氮菌剂亦即其液体肥料。所述接种其菌种为中科院微生物所提供的固氮粪产碱杆菌，固氮巨大芽胞杆菌，固氮阴沟肠杆菌。所述的灭菌条件为温度120℃-125℃，压力0.1-0.15MPa，时间20-25min。富硒联合固氮菌冷冻干粉的制法，在上述制法的第(5)步后按技术常规操作制得冷冻干粉。富硒联合固氮菌固体肥料的制法，培养基组合重量比为草炭土 50-70％鸡粪干 25-35％石膏0.8-1.2％稀土1-2％KH2PO40.4-0.6％Na2SeO3.5H2O 0.8-1.8％葡萄糖 1.8-2.2％NaCl1.8-2.2％6-Ba0.08-0.12％ PH值 6-7水含量 60-65％制法将草炭、鸡粪干燥、粉碎、过筛与各组分混合均匀，加入10％的EM菌剂，含水量在60-65％、PH值6-7，配制好培养基。培养基建堆发酵灭菌，条件60-70℃，36-48h。当温度降到30℃以下后接入按上述制法第(四)步发酵后的菌种，再经30-35℃，24-36小时的堆料发酵，测试各种指标符合相关的标准要求即得固体富硒固氮菌肥。与现有技术相比本专利技术的优点在于本专利技术的多菌株发酵工艺，利用微生物发酵使农作物难以吸收和利用的无机硒转化为农作物能够充分吸收和利用的有机硒。培养基的配制方法、灭菌处理等生产工艺先进，采用建堆发酵的科学方法，替代了传统的高温灭菌的繁锁方式，降低了生产成本，提高了硒的转化率。具有好的稳定性和大的可靠性；所生产的工程菌剂活菌数、存活期、杂菌数都超过行业标准化和农科院原子能所要求的标准；在对玉米、蔬菜、果树等农作物试验结果，表现出生长良好，抗病力强、增产，改善品质等明显效果。本专利技术可促使硒的生化反应，为人体补硒提供硒源，发挥其强身健体的保健功效。添加稀土元素，对农作物的生长起到了很好的调节和优化作用。具体实施例方式下面通过实施例来对本专利技术作详细地描述。富硒联合固氮菌的制法 (一)先配制培养基，其培养基的组分重量比为Na2SeO31％蛋白胨 1％酵母膏 0.5％NaCl 0.5％20％稀土水溶液 2％水 其余用水各组分混和均匀，配制好后装入茄子瓶按50μg/ml加入色氨酸，经灭菌后，按5-10％接种，在30℃-34℃、200rmp，发酵24-48小时。本专利技术所采用的菌株为中科院微生物所提供的固氮粪产碱杆菌，其代号为A15，固氮巨大芽胞杆菌，其代号为N13，固氮阴沟肠杆菌，其代号为E26。(二)、种子罐按其容积的60％注入培养基，灭菌后，温度降到50℃以下时，按35μg/ml注入色氨酸，温度低于35℃后，按5-10％接入第(一)步种所制的菌液。(三)、011号罐A15单独发酵，012罐N13，E26混合，其发酵条件为温度30℃-35℃压力0.05MPa、空气流量1∶0.2-0.3，转速200rmp，时间8-10小时，其后压入大罐，两罐压出比为2∶1，取样为OD000＞0.6---1.2，PH＞7-8.5，IAA含量0.3-0.4，镜检菌体形态，活菌数个/ml＞108。(四)、大罐按其容量的60％注入培养基，经灭菌后，温度低于50℃时，按25μg/ml注入色氨酸，温度低于35℃时，接入第(三)步种所制的菌液1-3％，在温度30℃-35℃，压力0.05MPa，空气流量1∶0.2-0.3，转速200rmp下，发酵6-8小时，取样OD＞1.9、PH＞8.5、IAA(阳性)含量0.37，镜检、活菌数大于108个/ml。(五)、加防腐剂、保护剂、调整PH值、使PH在7-7.5间，符合标准。(六)、封装产品，即得富硒联合固氮菌剂亦即其液体肥料。所述的液体菌液的灭菌条件为温度120℃-125℃、压力0.1-0.15MPa，时间为20-25min。富硒联合氮菌冷冻干粉的制法在上述(五)步后，按冷冻干燥的技术常规操作，即得富硒联合固氮菌冷冻干粉。富硒联合固氮菌固体肥料的制法，其培养基组分重量比为草炭土 60％鸡粪干 30％石膏 1％稀土 2％KH2PO40.5％Na2SeO3.5H2O 1％葡萄糖 2％NaCL 2％6-Ba 0.1％含水量 60-65％ PH6.5-7先将草炭土、鸡粪干燥、粉碎、过筛与各组分混合均匀，加入10％的EM菌剂，含水量60％-65％，PH值6-7，配制好培养基，培养基在室内或室外(室温25-30℃为宜)建堆发酵灭菌。建堆方法底宽100cm，堆高80cm，上宽60cm。长无限。料温50-70℃，36-48h的条件下本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种富硒联合固氮菌的制法，其特征在于：（一）、其培养基的组分重量比为：Ｎａ↓［２］ＳｅＯ↓［３］.５Ｈ↓［２］Ｏ０．８－１．０％蛋白胨０．９－１．１％酵母膏０．４－０．６％ＮａＣｌ０．４－０．６％色氨酸５０μｇ／ｍｌ２０％浓度的稀土水溶液１－２％水其余用水培养基配制好后装入茄子瓶按５０μｇ／ｍｌ加入色氨酸，经灭菌后按５％－１０％接种，在３０℃－３４℃２００ｒｍｐ／分下，摇瓶发酵２４－４８小时；（二）、种子罐按其容积的６０％注入培养基灭菌后，温度降入５０℃以下时，按３５μｇ／ｍｌ注入色氨酸，温度低于３５℃后按５－１０％接种；（三）、０１１号罐Ａ１５单独发酵，０１２号罐Ｎ１３．Ｅ２６混合发酵，其发酵条件为温度３０－３５℃，压力０．０５ＭＰａ，空气流量１∶０．２－０．３，转速２００ｒｍｐ时间８－１０ｈ，其后压入大罐，两罐压出比为２∶１，取样为ＯＤ↓［０００］＞１，ＰＨ＞７．５，镜检菌体形态；（四）、大罐灭菌后，温度低于５０℃，注入色氨酸，按２５μｇ／ｍｌ，温度低于３５℃时，接种１－３％，在温度３０℃－３５℃、压力０．０５Ｍｐａ、空气流量１∶０．２－０．３、转速２００ｒｍｐ下，发酵６－８ｈ，取样ＯＤ＞０．９、ＰＨ＞７，ＩＡＡ值：０．３７，镜检活菌数大于１０↑［８］个／ｍｌ；（五）、加防腐剂、保护剂，调整ＰＨ至７－７．５，符合相关标准要求，（六）、封装产品，得富硒联合固氮菌剂亦即其液体肥料。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：崔澎，
申请(专利权)人：崔澎，
类型：发明
国别省市：21[中国|辽宁]