【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种产ＰＤＯＲ的基因工程菌，其特征是：Ａ、材料克雷伯肺炎杆菌（ＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＤＳＭ２０２６），Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３），ｐＭＤ１８－Ｔ，质粒ｐＥＴ－１５ｂ，上述材料在尊重保护知识产权的情况下均方便获得或购得；Ｂ、生产ＰＤＯＲ工程菌的构建用煮沸法从ＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＤＳＭ２０２６菌株上提取总ＤＮＡ；以５’－ＧＧＣＣＣＡＴＡＴＧＡＧＣＴＡＴＣＧＴＡＴＧＴＴＴＧＡＴＴＡＴＣ－３’为前引；５’－ＡＣＴＴＧＧＡＴＣＣＴＣＡＧＡＡＴＧＣＣＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＴ－３’为后引；采用ＰＣＲ扩增得到目的基因ｄｈａＴ，１％琼脂糖电泳分离，切胶回收；参照美国Ｓａｍｂｒｏｏｋ等编写的《分子克隆实验指南》第三版的基因插入方法，将目的基因ｄｈａＴ插入ｐＭＤ１８－Ｔ，得到重组质粒ｐＭＤ－ｄｈａＴ，再将ｐＭＤ－ｄｈａＴ和ｐＥＴ－１５ｂ分别用ＮｄｅⅠ和ＢａｍＨⅠ酶切，按照Ｔ４ＤＮＡＬｉｇａｔｉｏｎ（Ｂｉｏｌａｂ）的说明书设计连接体系，并进行粘端连接，连接产物转化至用ＣａＣｌ↓［２］法制备的感受态ＢＬ２１（ＤＥ３）；用１００μｇ／ｍＬ氨苄青霉素（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ，Ａ...
【技术特征摘要】
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