本发明专利技术公开一株真菌Ｘｙｌａｒｉａ ｓｐ．ＦＤＹＳ－１及其制备的生物制剂与在防治松材线虫中的应用。真菌Ｘｙｌａｒｉａ ｓｐ．ＦＤＹＳ－１，于２００８年２月２５日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为ＣＣＴＣＣ ＮＯ：Ｍ２０８０２５。本发明专利技术将Ｘｙｌａｒｉａ ｓｐ．ＦＤＹＳ－１接种至马铃薯葡萄糖液体培养基或马铃薯蔗糖液体培养基中，培养基的ｐＨ为５～８，培养温度为２６℃～２９℃，无光照条件下培养３～５天后，将培养液离心过滤，收集滤液即得生物制剂，该生物制剂对于松材线虫具有高致死活性，且热稳定性好，来源环保无毒性，选择性强，对生态环境影响小。本发明专利技术的菌株Ｘｙｌａｒｉａ ｓｐ．ＦＤＹＳ－１的培养条件要求低，产生活性物质的能力基本保持遗传稳定，具有很好的开发应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物农药领域，具体涉及一株真菌^^n'a sp. FDYS-1 及其制备的生物制剂与在防治松材线虫中的应用。技术背景松材线虫病是松树的一种毁灭性病害。该病通常来势凶猛，染病 松树死亡率极高，被称为"森林的癌症"和"无烟的森林火灾"。我 国自1982年在南京中山陵首次发现该病，现已蔓延至江苏、浙江、安 徽、山东、湖北、广东、江西、重庆、贵州等12个省份的113个县(区)， 发生面积超过73hm2，死亡松树200万株，造成林业经济、森林生态的 巨大损失和自然景观的严重破坏，并对我国广大适生区的松林构成严 重威胁。目前对松材线虫病的防治主要针对其传媒昆虫和松材线虫本身， 而当前研究的松材线虫控制因子主要包括产毒真菌、抗生素和杀虫植 物等。在产毒真菌方面，孙建华报道总状共头霉(&"c印^/o^^m racemo ^)对松材线虫有极强的杀线虫活性。向红琼等发现用乙酸 乙酯从粗皮侧耳麦粒培养物中提取的粗毒素，对松材线虫有较强的毒 性。李国红等发现一种侧耳属(尸/wra加sp.)真菌，12h内对松材线 虫的致病率可达90%以上，且其活性组分存在于发酵液中，不需诱导能稳定生成，水溶性，对热不敏感。张克勤等发现/^^fo/^/o恥C加'fl^ZveraaWa ZD1菌株通过液体和麦粒固体培养后，可从代谢产物中提 取有效的水溶和脂溶性物质制备成杀线虫生物毒素；Q^yowora ca仿cwpa ZD2菌株通过液体和固体发酵后，可制备成对松材线虫具 毒杀活性的生物制剂。董锦艳等发现粉红粘帚霉(G/k/a^謂ro^訓) Gr87菌株采用常规固体发酵及提取分离的方法，可以获得6种对松材 线虫有毒杀活性的化合物，这些化合物可单独或组合制备杀线虫生物 农药。可见，寻找对松材线虫有毒性作用的真菌已经逐渐成为研究的热点。使君子是传统的杀虫药用植物，自身能产生杀虫成分，基于植物 内生真菌能产生与其宿主相同或相似的活性成分这一观点，如果以使 君子植物内生真菌为筛选对象，应该可以获得对松材线虫有毒杀活性 的菌株，从而为线虫的生物防治奠定基础，目前尚未有相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种具杀线虫活性 的真菌ly/an'a sp. FDYS-1 。本专利技术的另一个目的在于提供由上述真菌X;^nb sp. FDYS-1的 代谢产物制备而得的生物制剂，该生物制剂具有较高的松材线虫致死 活性。本专利技术的另一个目的在于提供上述生物制剂的制备方法。 本专利技术的另一个目的在于提供上述真菌Xy/"n'a sp. FDYS-1及其代谢产物在松材线虫防治中的应用。本专利技术的上述目的是通过如下方案予以实现的真菌J^/an'fl sp. FDYS-1分离自广州华南植物园栽培的使君子 (gw'WMa//""&caL.)健康叶片，该菌为子囊菌中炭角菌属Q^/aWa sp.)的菌株FDYS-1，在PDA培养基上菌落为纯白色，辐射状，表 面稍有褶叠，未见产孢结构，菌株的ITS序列与GenBank中登陆号 为EF423534.1的Xylaria sp.同源性达99%，菌株X少/an'a sp. FDYS-1 己于2008年1月25日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为 CCTCCNO: M 208025。一种生物制剂，是由杀线虫活性菌株^^n'a sp. FDYS-1经液体 发酵后提取制备而得，其制备方法为将X少/an^sp. FDYS-1接种至 pH为5 8的液体培养基，于26。C 29。C无光照条件下120 r/min振 荡培养3~5天，将含菌丝的发酵液放入离心管中，离心过滤除去菌丝， 收集滤液即得。上述液体培养基为马铃薯葡萄糖液体培养基(PD)或马铃薯蔗 糖液体培养基(PS)。实验证明上述生物制剂对松材线虫有毒杀活性，对线虫的致死 率可达99%，且经12rC处理20min也不失活；真菌Xy/an'a sp. FDYS-1 产生毒杀松材线虫的活性物质的能力基本保持遗传稳定，连续继代6 代后对线虫的致死率仍达90.43%。因此，本专利技术的真菌^;/fln'asp. FDYS-1及其代谢产物(如上述 的由发酵培养液制备的生物制剂)可用于松材线虫的防治。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果l.本专利技术的生物制剂对松材线虫具有高致死活性，热稳定性好，经12rC处理20min也 不失活，而且该生物制剂来源环保无毒性，选择性强，对人畜安全， 对生态环境影响小；2.本专利技术采用的々/anb sp. FDYS-1菌株，其培 养条件要求低，且产生活性物质的能力基本保持遗传稳定，连续继代 6代后对线虫的致死率仍高达卯.43%，具有很好的开发应用前景。 附图说明图1为Xy/fln'a sp. FDYS-1在PDA培养基上的菌落正面图； 图2为X少/an'a sp. FDYS-1在PDA培养基上的菌落背面图； 图3为义>^;女sp. FDYS-1经不同培养液培养后滤液的杀线虫活性；图4为^/an'a sp. FDYS-1在不同培养温度下培养后滤液的杀线 虫活性；图5为J^/aWa sp. FDYS-1在不同初始pH值下培养后滤液的杀 线虫活性；图6为Xy/anh sp. FDYS-1在不同培养代数后滤液的杀线虫活性。具体实施方式各种培养基配方PDA培养基称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml 煮沸半个小时，纱布过滤，再加20g葡萄糖和17 20g琼脂，充分溶 解后趁热纱布过滤，12rC灭菌20分钟后，冷却后贮存备用。 PD培养液马铃薯200g，葡萄糖20g，水1000ml。 PS培养液马铃薯200g，蔗糖20g，水1000ml。PC培养液马铃薯200g，胡萝卜100克，水1000ml。 马丁氏培养液蛋白胨5g,葡萄糖10g， MgS04*7H20 0.5g，KH2P04lg，水1000ml。Czapek培养液蔗糖30g， NaN03 2g， K2HP04 1 g， MgS04'7H200.5g， KC10.5g， FeSO40.01g，水lOOOml。改良Fries 3号培养液蔗糖20g，酒石酸铵5g， NHtNOslg,KH2P04lg， MgS04.7H20 0.5g， NaClO.lg， CaCl2'2H20 0.13g，玉米浆lg，水lOOOml。实施例1 Xj^/nVi sp. FDYS-1的分离及其对松材线虫的活性 采集广州华南植物园使君子植物的健康叶片，自来水冲洗干净，晾干水分后剪成约1.5x1.5cm的小块，进行表面消毒，其具体步骤如 下先用70%酒精漂洗30s，再用0.1%升汞漂洗lmin，接着再用70% 酒精漂洗30s后，无菌水冲洗4次，在无菌滤纸上吸干水分即可。采用漂洗液检验法和组织印迹法检验表面消毒效果漂洗液检验 法即吸取最后一次无菌水冲洗的冲洗液0.2mL，涂布于PDA平板上； 组织印迹法即用灭过菌的镊子将经上述表面消毒的材料移植至PDA 平板上，接触5min后取出。处理后的PDA平板于于26士rC无光照 条件下培养7d后，若发现皿中无菌落出现，证明材料表面消毒彻底； 否则，需重新分离。将上述表面消毒处理过的材料在无菌状态下剪切成0.5x0.5cm的 小块(剪去0.5cm的边缘)，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种真菌Ｘｙｌａｒｉａｓｐ．ＦＤＹＳ－１，该菌株属于炭角菌属，于２００８年２月２５日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为ＣＣＴＣＣＮＯ：Ｍ２０８０２５。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：向梅梅，姜子德，袁永平，
申请(专利权)人：仲恺农业技术学院，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。