本发明专利技术公开了一种鲁氏毛霉ＸＪＹＬ ＨＮ０５１２及采用该菌种发酵生产木聚糖酶的方法，该菌种在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏时间为２００８年１月１８日，保藏号为ＣＣＴＣＣ ＮＯ：Ｍ２０８０１４。该方法是将所述的鲁氏毛霉ＨＮ０５１２菌种接入含有木聚糖、酵母粉、蛋白胨及其他营养物质的发酵培养基中进行发酵培养，有氧条件下诱导发酵生产木聚糖酶。所生产的木聚糖酶，具有较宽的ｐＨ适应性和较高的温度耐受力，在食品、饲料、造纸、能源、纺织工业方面均有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，特别涉及一种鲁氏毛霉XJYL HN0512及其诱 导生产木聚糖酶的方法。
技术介绍
木聚糖酶(E. C 3. 2. 1. 8)是一类以内切方式降解木聚糖分子中4-木 糖苷键的酶类，能将木聚糖水解成寡聚木糖和木糖。这些低聚木糖具有显著增 殖肠道中双歧杆菌的效果，可提高人和牲畜免疫力，减少各种疾病；作为农作 物的生长剌激剂和生长促进剂，提高农作物产量；提高纸浆的产率，改善纸张 质量。因此，在食品、饲料、造纸、能源、纺织工业中存在巨大潜力和广阔的 应用前景。木聚糖酶在自然界分布相当广泛，在海洋及陆地细菌、海洋藻类、真菌和 反刍动物瘤胃、蜗牛、甲壳动物、陆地植物组织和各种无脊椎动物中都存在。 己报道的能产木聚糖酶的微生物有细菌、链霉菌、曲霉、青霉和木霉等，但至 今未见毛霉属真菌产木聚糖酶的报道。人们研究和应用最多的是细菌、曲霉和 木霉产木聚糖酶。其中存在的局限主要有所产木聚糖酶受pH最适范围和温 度耐受力的影响，应用范围受到限制。如中国专利申请号为200510042557的发 明专利申请公开了短小芽孢杆菌，所生产的酶最适作用温度为45 55'C，最适 作用pH为6.5 7.5。其缺点在于所产木聚糖酶不具有耐高温耐强碱的能力。 中国专利申请号为02131439.X的专利技术专利申请公开了 了利用短小芽孢杆菌 (Bacilluspumilus) BP19 CGMCC NO: 0779产生适用于造纸及伺料工业的碱性 木聚糖酶。其缺点在于所产木聚糖酶不适用于在酸性条件下作用。
技术实现思路
为了解决上述现有技术的不足，本专利技术的首要目的在于提供一种能够发酵 生产木聚糖酶的真菌菌种鲁氏毛霉，即鲁氏毛霉XJYLHN0512。本专利技术的另一 目的在于提供上述鲁氏毛霉XJYL HN0512发酵生产木聚糖4酶的方法，可获得高产、用途广泛的木聚糖酶产品。本专利技术以酵母粉、蛋白胨和木聚糖等为原料，调节发酵液初始pH值为6.5 7.5，接入鲁氏毛霉HN0512， 发酵生产木聚糖酶，采用的发酵温度为25-C 35i:。本专利技术的目的通过下述技术方案实现本专利技术鲁氏毛霉为^t/"cor raw// (Calmette) Wehmer XJYL HN0512,又名淀粉霉".ra脂7 Calmette) XJYL HN0512，以下简称为鲁氏毛霉HN0512;所述鲁氏毛霉属于毛霉属的菌种， 该菌种在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏时间为2008年1月18日，保藏 号为CCTCC NO: M 208014。上述鲁氏毛霉HN0512菌种具有如下的性质1、 形态特征-菌落浅黄色，薄棉絮状。孢囊梗具有短的、稀疏的假轴状分枝。孢子囊直 径35 65^m，囊轴近球形，20 30xl5 25jjm。孢囊孢子近球形或拟椭圆形， 单个无色，聚集在孢囊中呈浅褐色，4.5 5.5 x3 4拜(见图l、 2、 3)。2、 分子生物学特征菌株HN0512的ITS1-5.8S-ITS2区的全部序列和18S以及28S rDNA的部 分序列，总长633bp。序列如下1tttggaggaa aaaaaaaaag aacaaggttt ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattaa 61 ataatcaata attttggctt gtccattatt atctatttac tgtgaactgt attattactt 121 gacgcttgag ggatgctcca ctgctataag gataggcgat ggagatgcta accgagtcat 181 aatcaagctt aggcttggta tcctattatt atttaccaaa agaattcaga attaatattg 241 taacatagac ctaaaaaatc tataaaacaa cttttaacaa cggatctctt ggttctcgca 301 tcgatgaaga acgtagcaaa gtgcgataac tagtgtgaat tgcatattca gtgaatcatc 361 gagtctttga acgcaacttg cgctcattgg tattccaatg agcacgcctg tttcagtatc 421 aaaacaaacc ctctatccaa cattttgttg aataggaata ctgagagtct cttgatctat 481 tctgatctcg aacctcttga aatgtacaaa ggcctgatct tgtttgaatg cctgaacttt 541 tttttaatat aaagagaagc tcttgcggta aactgtgctg gggcctccca aataatactt 601 tttttaaatt tgatctgaaa tcaggcggat acc。3、培养条件培养温度25°C 35°C。培养方式有氧培养本专利技术所用的菌种来源以木聚糖作为唯一碳源分离出高产、高纯度的木聚糖酶生产菌株。获得本专利技术菌种鲁氏毛霉HN0512的方法，按下述方法进行 甘化厂蔗渣堆放地土样用无菌水分别按10'2 10-6梯度稀释后涂布于富集 培养基，25 35。C培养24 48小时，挑出单菌落溶于10mL的生理盐水中， 分别制成10-2 10—6梯度浓度的菌液，各吸取0.15mL于筛选培养基，28'C培 养24 72小时；分离得到的单个菌落进一步接种于以木聚糖为唯一碳源的复 筛培养基中25 35'C培养3 6天，挑选单个菌落分别接于发酵培养基中，温 度条件25 35'C摇床培养72 96小时，测定木聚糖酶活力，选择酶活力最高 为5330.13U/L的菌株作为本专利技术的菌种鲁氏毛霉HN0512，用斜面PDA培养 基4'C保存。上述所采用的各培养基组成如下富集培养基(100ml):木聚糖lg，酵母粉0.5g， K2HP043H20 O.lg， MgS047H20 0.05g，琼脂粉1.5g， 2X(w/v)去氧胆酸钠溶液2ml，链霉素溶液 (10000u/ml) 0.33ml， 0.1。/。(w/v)孟加拉红0.33ml。筛选培养基(100ml):木聚糖lg，琼脂粉1.5g， K2HP043H20 O.lg, MgS047H20 0.05g， 2。/。(w/v)去氧胆酸钠溶液2ml， 0.1。/。(w/v)孟加拉红0.33ml， 链霉素溶液(10000u/ml) 0.33ml。复筛培养基(100ml):木聚糖lg，琼脂粉1.5g， K2HP043H20 O.lg， MgSO47H2O0.05g， (NH4)2SO40.1g。发酵培养基(100ml):木聚糖1.0g 2.0g ，酵母粉0.5g 1.5g,蛋白胨 0.5g 1.5g， FeS04 0.02 0.04g, CaCl2 0.05 0.15g， Tween80 0.05ml ， MgSO47H2O0.02 0.04g，维生素0.001 0.003g，调pH为6.5 7.5。PDA培养基(100ml) : 土豆汁20g，葡萄糖2g，琼脂粉2g， K2HP04'3H20 O.lg, MgSO47H2O0.05g。采用上述鲁氏毛霉HN0512菌种发酵生产木聚糖酶的方法，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鲁氏毛霉，其特征在于：所述鲁氏毛霉为Ｍｕｃｏｒ ｒｏｕｘｉｉ（Ｃａｌｍｅｔｔｅ）Ｗｅｈｍｅｒ ＸＪＹＬ ＨＮ０５１２即鲁氏毛霉ＨＮ０５１２，所述鲁氏毛霉属于毛霉属的菌种，该菌种在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏时间为２００８年１月１８日，保藏号为ＣＣＴＣＣ ＮＯ：Ｍ２０８０１４。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姚冬生，邢克克，吴葵，刘大岭，谢春芳，梁郁强，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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