一种与番茄抗病性状相关的分子标记克隆及应用制造技术

本发明专利技术属于番茄分子标记制备技术领域。制备得到三段与番茄抗病性状相关的分子标记，它们的核苷酸序列分别如序列表ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１，ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２和ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３所述。定义了这些分子标记的相关碱基的突变位点，检测分析表明，这些碱基突变引起序列标签位点（ＳＴＳ）多态性。本发明专利技术已将Ｔｍ－２↑［ａ］，Ｉ－２，Ｃｆ－９和Ｍｉ等四种抗病基因进行聚合，根据分子标记辅助选择，选育成多抗番茄自交系和Ｆ↓［１］抗病番茄杂交组合。本发明专利技术为番茄分子标记辅助育种有提供了一些有用的分子标记。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蔬菜抗病分子育种
，具体涉及一种与番茄抗病性状相关的分子标记克隆及应用， 为番茄的抗病基因的标记辅助选择提供一种分子标记。
技术介绍
蔬菜作物在农业生产和农业产业结构中占重要地位，也是我国出口创汇的重要作物。蔬菜生产中的病 危害日益严重，每年因病害可使蔬菜作物减产10%—20%，严重时可能导致绝产，因此培育抗病品种是最有 效的控制病害发生的途径。目前蔬菜功能基因组的研究发展很快，番茄已经启动了测序工作， 一些染色体 己经测序超过一半，很多控制抗病基因已经被克隆。但目前抗病育种选育过程中所使用的分子标记与目标 基因存在一定遗传距离，易发生重组交换而分离，影响选择的准确性，且大多数标记产物需要先进行酶切 后才能电泳凝胶分离开来，使用起来很不方便，不利于高通量的筛选。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有现有技术的缺陷，制备一种与番茄抗病性状相关的分子标记及应用，为番 茄的抗病基因的标记辅助选择提供有用的分子标记。本专利技术的技术方案如下申请人制备了 3种与番茄抗病性状相关的分子标记，它的核苷酸序列如序列表SEQ IDN0: 1, SEQID NO: 2和SEQ ID NO: 3所述。在序列表SEQID NO: 1的312bp处有1个A 312-G312的碱基突变，在2298bp处有1个G2298-C2298 的碱基突变，在2299bp处有1个T2299-G2299的碱基突变，导致序列标签位点多态性(STS)。在序列表SEQ ID NO: 2的3477bp处有1个A3477-G3477的碱基突变，在3516bp处有1个T3516-A3516 的碱基突变，在3517bp处有1个G3517-C3517的碱基突变，在3606bp处有1个T3606-C3606的碱基突变， 在3692bp处有1个C3692-G3692的碱基突变，在3693bp-3713bp之间有10bp的碱基插入，导致STS多态 性。在序列表SEQ ID NO: 3的405bp处有1个A405-T405的碱基突变，在485bp处有1个G485-C485的 碱基突变，516bp处有1个A516-C516的碱基突变，在517bp处有1个T517-G517的碱基突变，在530bp 处有1个G530-A530的碱基突变，在610bp处有1个A610-C610的碱基突变，在672bp处有1个G672-A672 的碱基突变，在715bp处有1个T715-C715的碱基突变，在725bp处有1个C725-G725的碱基突变，在806bp 处有1个C806-A806的碱基突变，在847bp处有1个A847-G847的碱基突变，在997bp处有1个A997-C997 的碱基突变，在H45bp处有1个A1145-G1145的碱基突变，在1171bp处有1个T1171-A1171的碱基突变， 在1381bp处有1个A138卜T1381的碱基突变，在1543bp处有1个A1543-C1543的碱基突变，在 1075bp-1081bp之间有6bp的碱基缺失，导致STS多态性。申请人根据上述SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3的序列特征，分别设计引物，发展为 STS标记。所述SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3的引物对分别为SEQ ID NO: 1:正向引物为5' -GCC TCA TTC MC TTC CTT CTG G-3'，反向引物为5' -GCC AGT ATA TM CGG TCT AM C-3'。SEQ ID NO: 2:正向引物为5' -CCA TCT CTC MG GAA CTG CGT C-3',反向引物为5' -GTA GTG GTG TGA GCA ATG GGC A_3,。SEQ ID NO: 3:正向引物为C1:5' ^GTT CTT ATC CTT TAA CAC CCA-3'，反向引物为C2:5' -TCC CTC CAA ATT ATT ACT TCC-3'。更详细的技术方案见《具体实施方式》所述。附图说明序列表SEQIDNO: l是Tm-2a (基因登录号AF536199)分子标记的和核苷酸序列，在312bp处有l 个A 312-G312的碱基突变，在2298bp处有1个G2298-C2298的碱基突变，在2299bp处有1个T2299-G2299 的碱基突变。序列表SEQ ID NO: 2是12 (基因登录号AF118127)分于标记的和核苷酸序列，在3477bp处有1 个A3477-G3477的碱基突变，在3516bp处有1个T3516-A3516的碱基突变，在3517bp处有1个G3517-C3517 的碱基突变，在3606bp处有1个T3606-C3606的碱基突变，在3692bp处有1个C3692-G3692的碱基突变， 在3693bp-3713bp之间有10bp的碱基插入。序列表SEQ ID NO: 3是Cf-9 (基因登录号AJ002236)分子标记的和核苷酸序列。在405bp处有1 个A405-T405的碱基突变，在485bp处有1个G485-C485的碱基突变，516bp处有1个A516-C516的碱基 突变，在517bp处有l个T517-G517的碱基突变，在530bp处有1个G530-A530的碱基突变，在610bp处 有1个A610-C610的碱基突变，在672bp处有1个G672-A672的碱基突变，在715bp处有1个T715-C715 的碱基突变，在725bp处有1个C725-G725的碱基突变，在806bp处有1个C806-A806的碱基突变，在847bp 处有1个A847-G847的碱基突变，在997bp处有1个A997-C997的碱基突变,在1145bp处有1个Al 145-G1145 的碱基突变，在U71bp处有1个T1171-A1171的碱基突变，在1381bp处有1个A1381-T1381的碱基突变， 在1543bp处有1个A1543-C1543的碱基突变，在1075bp-1081bp之间有6bp的碱基缺失。图1: J基因及等位序列在翻译起始之前的intron的比对结果图2: T)z -^基因分子标记对单株的检测。泳道l-6分别为Alll、 A114、 A53、 A115、 A113; 7泳道为 LA1221; CK:空白对照；M: Marker图3:烟草花叶病毒接种不同番茄植株后的叶部特征。A为A53, B为LA1221。图4: /^基因分子标记对单株的PCR检测。l-6分别为A53、 AlOl、 A112、 A114、中蔬五号、中蔬六 号；7-8为LA3847、 LA4026 CK:空白对照M: Marker图5:必W基因分子标记对单株的检测。左为LA2819(抗病)右为A53(敏感对照)；M: Marker图6:根结线虫接种番茄植株的特征。A:番茄植株三叶期接种根接线虫后植株生长势情况。左为LA2819， 右为A53。 B:番茄植株三叶期接种根接线虫后根部特征。左为LA2819，右为A53图7: Cf-9基因分子标记对单株的检测。1泳道为Ont7719， 2-7泳道分别为Ont7717本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与番茄抗病性状相关的分子标记，它的核苷酸序列如序列表ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１所述。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：叶志彪，李汉霞，张余洋，张俊红，刘忠祥，孙亚林，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]