The invention relates to a method for large-scale production of purified tetrodotoxin by using puffer fish viscera as raw material, and its product can be used for detoxification, analgesia and antihypertensive drug preparations. To solve the current methods of extraction and purification of tetrodotoxin is various, but these methods are more or less there are some defects, such as high performance liquid chromatography with high purity of the output there are also expensive equipment (high pressure liquid chromatography) problems, and such as impregnation fractionation has lower efficiency, the product purity is not high, provides a method for large-scale extraction and preparation of tetrodotoxin, this method has the advantages of simple process, high efficiency, high yield, good quality, the product purity is higher than 99.5%, directly in line with the biological research and clinical application requirements. Another purpose of the present invention is to provide various preparations containing the tetrodotoxin product prepared by this method.
【技术实现步骤摘要】
一种制备高纯河豚毒素的方法
本专利技术涉及一种化学物质提取领域,尤其涉及一种以河豚鱼内脏为原料规模化、高效地提取生产高纯河豚毒素的方法。其产品可用于戒毒、镇痛及降压药物制剂。
技术介绍
河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)是一种由河豚鱼内脏提取的低分子量生物碱类物质。由于其独特的化学结构使其成为细胞钠离子通道专一阻断剂。因此其在生物学研究领域作为生物试剂有着不可替代的位置。河豚毒素在医学临床上所显示的药理学作用,早在上世纪30年代就已有用于临床介断生物碱类成瘾性病症的报道。在镇痛治疗方面也不断有报道推出。因此,其无论在生物学研究领域还是在医学临床应用方面,都显示了十分重要的地位。TTX是典型的钠离子通道阻断剂,它能选择性与肌肉、神经细胞的细胞膜表面的钠离子通道受体结合,阻断电压依赖性钠离子通道,从而阻滞动物电位,抑制神经肌肉间兴奋的传导,导致与之相关的生理机能的障碍,主要造成肌肉和神经的麻痹。构效关系表明,TTX的活性基团是1,2,3位的胍氨基和附近的C-4,C-9,C-10位的羟基,胍基在生理pH值下发生质子化,形成正电活性区域与钠离子通道受体蛋白的负电性羰基相互作用,从而阻碍离子进入通道。钠离子受体至少有6个特异性靶分子结合位点,TTX是与钠通道受体部位I结合。TTX受体位于可兴奋细胞膜外侧、钠通道外口附近,TTX与受体部位结合,阻碍钠离子接近通道外口。研究表明,TTX特异性作用于钠通道,对钾、钙通道和神经肌肉的突触及胆碱指酶无直接影响。此外,毒素能通过血脑屏障进入中枢,对中枢产生明显的抑制作用。总的来说,TTX对呼吸和心血管的抑制是对中枢和外 ...
【技术保护点】
一种制备高纯河豚毒素的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:1)将河豚内脏捣碎、匀浆,倒入pH值为3.5‑4.5的醋酸水溶液加热煮沸,冷却后加入与醋酸水溶液等体积的甲醇‑水溶液,经200‑300r/m转速搅拌后用筛绢过滤收集滤液,滤渣重复上述操作3‑5次,将滤液合并后以板框压滤机压滤得到橙黄色毒液;2)橙黄色毒液浓缩脱脂后,在低温条件下以活性炭脱色纯化,滤出活性炭,再加入大孔吸附剂同时以90‑120r/m转速搅拌进一步吸附纯化,反应30‑35min,布氏漏斗抽滤得到浅黄色毒液;3)将浅黄色毒液通过阳离子交换树脂柱,至树脂吸附至饱和状态后以去离子水洗阳离子交换树脂柱,再以醋酸‑醇‑水体系溶液洗脱,收集洗脱液;4)对洗脱液进行冷冻干燥和减压浓缩,至洗脱液体积减少至原体积的1/3‑1/4得到浓缩河豚毒素毒液,以纳滤膜对浓缩河豚毒素毒液进行纳滤收集滤液,再对滤液重复进行三次纳滤处理,得到无杂质河豚毒素毒液;5)将无杂质河豚毒素毒液通过交联葡聚糖凝胶柱,以去离子水洗交联葡聚糖凝胶柱,再用pH值为3‑4的醋酸水溶液洗脱,收集洗脱液得到液态河豚毒素粗品;6)向液态河豚毒素粗品中滴加氨水调节pH至9 ...
【技术特征摘要】
1.一种制备高纯河豚毒素的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:1)将河豚内脏捣碎、匀浆,倒入pH值为3.5-4.5的醋酸水溶液加热煮沸,冷却后加入与醋酸水溶液等体积的甲醇-水溶液,经200-300r/m转速搅拌后用筛绢过滤收集滤液,滤渣重复上述操作3-5次,将滤液合并后以板框压滤机压滤得到橙黄色毒液;2)橙黄色毒液浓缩脱脂后,在低温条件下以活性炭脱色纯化,滤出活性炭,再加入大孔吸附剂同时以90-120r/m转速搅拌进一步吸附纯化,反应30-35min,布氏漏斗抽滤得到浅黄色毒液;3)将浅黄色毒液通过阳离子交换树脂柱,至树脂吸附至饱和状态后以去离子水洗阳离子交换树脂柱,再以醋酸-醇-水体系溶液洗脱,收集洗脱液;4)对洗脱液进行冷冻干燥和减压浓缩,至洗脱液体积减少至原体积的1/3-1/4得到浓缩河豚毒素毒液,以纳滤膜对浓缩河豚毒素毒液进行纳滤收集滤液,再对滤液重复进行三次纳滤处理,得到无杂质河豚毒素毒液;5)将无杂质河豚毒素毒液通过交联葡聚糖凝胶柱,以去离子水洗交联葡聚糖凝胶柱,再用pH值为3-4的醋酸水溶液洗脱,收集洗脱液得到液态河豚毒素粗品;6)向液态河豚毒素粗品中滴加氨水调节pH至9-10,优选调节pH至9.2-9.5,在低温减压环境下静置20-24h,得到河豚毒素粗品;7)将河豚毒素粗品溶于以醋酸-醇体系溶液溶解,再滴加氨水调节pH至9-10,优选调节pH至9.2-9.5,在低温减压环境下静置20-24h,得到所需河豚毒素。2.根据权利要求1所述的一种制备高纯河豚毒素的方法,其特征在于,步骤1)中甲醇-水溶液中甲醇含量为8-10%,筛绢孔径为350目...
【专利技术属性】
技术研发人员:曾军杰,张小军,陈思,卢义博,李奇富,
申请(专利权)人:浙江省海洋水产研究所,江苏美正生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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