一种新的人基因编码序列、其编码的多肽及制备方法技术

本发明专利技术涉及一种新的人基因核苷酸序列－－人Ｍｙｘ的ｃＤＮＡ序列。该ｃＤＮＡ编码的蛋白是Ｍａｄ家族的成员，它与ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３中从核苷酸１１－６３１位的核苷酸序列有至少７０％的同源性。所述序列蓖麻－具有ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４所示的序列的多肽。此外，还提出了生产具有人Ｍｙｘ蛋白活性的多肽的方法。本发明专利技术为进一步研究Ｍａｄ家庭蛋白在肿瘤治疗中的作用打下了基础。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体地，本专利技术涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本专利技术涉及人Myx的cDNA序列，该cDNA编码的蛋白是Mad家族的成员。本专利技术还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。Mad蛋白是一类含有碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链结构(bHLHZip，basic helix-loop-helix-leucin-zipper)的蛋白家族，能够和另一类bHLHZip蛋白Max家族成员特异形成异源二聚体，发挥转录抑制物的作用，能在分化组织中调节细胞生长(EMBOJ 1995，14(22)5649-5659)。Mad蛋白的发现和原癌基因myc的研究密不可分。myc基因是鸟类AMV病毒在细胞内的同源序列，它最早在鸡中被发现，以后又在哺乳动物中发现了其它形式的myc，组成了一个小的原癌基因家族。和Mad、Max蛋白一样，Myc蛋白也含有bHLHZip结构，这种结构是许多转录因子的共同特征。HLH结构和亮氨酸拉链结构是蛋白间相互作用的位点。Myc蛋白一般不会自身形成同源二聚体，而和Max蛋白形成异源二聚体，结合于DNA特意位点如转录增强子的Ebox基序上。myc基因属于“即刻早期反应”(immediate early response”)基因，它们的表达可被促有丝分裂的刺激信号激活，且不依赖从头开始的蛋白质合成，一般发生于静止细胞转向生长状态的早期，即G0向G1转变时。它们的表达产物有利于S期的DNA合成，在细胞周期中表达水平保持不变。而当细胞进入分化状态，myc的表达即被迅速下调(Ann.Rev_Biochem.1992，61809-860)。不同于Myc蛋白，Max蛋白存在于不增殖的G0细胞，并且在G0/G1转换时它的丰度不变化。它的半衰期远大于Myc，是个非常稳定的蛋白，它的含量也远高于Myc。Max不含有活化转录的活性位点，但Myc和Max形成异源二聚体后，可以提高和DNA结合的亲合力，并提高活性区域的效率(Cell 1993，72211-222)。Mad是又一类Max结合蛋白。迄今为止，有四个Mad家族成员被发现。1993年，美国的Ayer等以Max蛋白为探针筛选λgtll表达文库，找到了人的Madl蛋白。Zervas等用相似的方法找到了另一个Mad蛋白-—人Mxil(Cell 1993，72211-222；223-232)。1995年Ayer同组人员Hurlin等用酵母双杂交法在小鼠胚胎干细胞cDNA库里找到了小鼠的Mad3和Mad4(EMBO J.1995，14(22)5649-5659)。1996年，Wang等人在挪威鼠中得到了Myx(U45986)，与Mad3有着极高的同源性，但未见文献的进一步报道。我们发现的人Myx蛋白和大鼠Mad3、挪威鼠Myx同源性较高，是Mad家族的又一新成员。本专利技术的一个目的是提供一种新的多核苷酸，该多核苷酸编码Mad家族的一个新成员。本专利技术的Mad家族成员被命名为人Myx。本专利技术的另一个目的是提供一种新的Mad家族成员，该蛋白被命名为人Myx蛋白。本专利技术的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的人的Myx多肽的方法。本专利技术还提供了这种人的Myx核酸序列和多肽的应用。在本专利技术的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括编码具有人Myx蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID No.3中从核苷酸11-631位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID No.3中从核苷酸11-631位的核苷酸杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID No.4所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID No.3中从核苷酸11-631位的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种分离的人Myx蛋白多肽，它包括具有SEQ ID No.4氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID No.4序列的多肽。在本专利技术的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。在本专利技术的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。在本专利技术的另一方面，提供了一种产生具有人Myx蛋白活性的多肽的方法，该方法包括(a)将编码具有人Myx蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人Myx蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID No.3中从核苷酸11-631位的核苷酸序列有至少70％的同源性；(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成人Myx蛋白的重组细胞；(c)在适合表达人Myx蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；(d)分离出具有人Myx蛋白活性的多肽。在本专利技术的一个具体实施方案中，本专利技术的分离的多核苷酸全长为737个核苷酸，其详细序列见SEQID No.3，其中开放读框位于11-631位核苷酸。在本专利技术中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。在本专利技术中，术语“人Myx蛋白(或多肽)编码序列”指编码具有人Myx蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ ID NO.3中11-631位核苷酸序列及其简并序列。该简并序列是指，位于SEQ ID NO.3序列的编码框11-631位核苷酸中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与SEQ ID NO.3中11-631位核苷酸序列同源性低至约70％简并序列也能编码出SEQ ID NO.4所述的序列。该术语还包括能在中度严紧条件下，更佳地在高度严紧条件下，与SEQ ID No.3中从核苷酸11-631位的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。该术语还包括与SEQ ID No.3中从核苷酸11-631位的核苷酸序列的同源性至少70％，较佳地至少80％，更佳地至少90％的核苷酸序列。该术语还包括能编码具有与人Myx相同功能的蛋白的、SEQ ID NO.4序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加数个核苷酸。在本专利技术中，“基本纯的”蛋白质或多肽是指其至少占样品总物质的至少20％，较佳地至少50％，更佳地至少80％，最佳地至少90％(按干重或湿重计)。纯度可以用任何合适的方法进行测量，如用柱层析、PAGE或HPLC法测量多肽的纯度。基本纯的多肽基本上不含天然状态下的伴随其的组分。在本专利技术中，术语“人Myx蛋白多肽”指具有人Myx蛋白活性的SEQ ID No.4序列的多肽。该术语还包括具有与人Myx蛋白相同功能的、SEQ ID No.4序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括人Myx蛋白的活性片段和活性衍生物。该多肽的变异形式本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离出的ＤＮＡ分子，其特征在于，它包括：编码具有人Ｍｙｘ蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３中从核苷酸１１－６３１位的核苷酸序列有至少７０％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３中从核苷酸１１－６３１位的核苷酸杂交。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，傅强，赵勇，张宏来，赵寿元，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]