一种新的人基因编码序列、其编码的多肽及制备方法技术

本发明专利技术涉及一种新的人基因核苷酸序列－－人ＣＤＶ－１的ｃＤＮＡ序列。该ｃＤＮＡ编码的蛋白是小鼠ＣＤＶ－１的一个同系物，它与ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３中从核苷酸１１８－４４１位的核苷酸序列有至少７０％的同源性。所述序列编码一具有ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４所示的序列的多肽。此外，还提出了生产具有人ＣＤＶ－１蛋白活性的多肽的方法。本发明专利技术为进一步研究ＣＤＶ－１相关的致病分子机理打下了基础。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体地，本专利技术涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本专利技术涉及人CDV-1的cDNA序列，该cDNA编码的蛋白是小鼠CDV-1蛋白的同系物。本专利技术还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。内脏皮脂腺病幼鼠(juvenile visceral steatosis mice，JVS mice)带有类Reye综合症表型，表现为脂肪肝、高血氨、低血糖和生长迟缓等(Lab Anim.1989，2283-87)。它们体内缺乏脂肪酸β-氧化作用中的必需载体——肉碱。β-氧化作用主要在细胞线粒体基质内进行。脂肪酸在线粒体膜外被活化成脂酰辅酶A.再与肉碱反应生成脂酰肉碱后才能进入线粒体基质以进行以后的脂肪酸氧化分解作用。用肉碱对JVS鼠进行治疗后，各种症状均消失(J.Biol.Chem.1992，2675032-5035)。1997年，Masuda等人用mRNA差异显示法寻找14天龄的JVS鼠心室中的差异表达基因(FEBS Lett.1997，408221-224)。他们找到四个在JVS鼠心室中表达上调的基因和一个表达下调的新基因CDV(carnitine deficiency-associated gene expressed in ventricle)。CDV有三种mRNA形式，分别为1.1kb、1.3kb和2.6kb长。其中两种短mRNA仅在心脏中发现，它们的cDNA命名为CDV-1而2.6kb的mRNA在心脏、肾脏和脑中有表达，在骨骼肌和肝脏中未见，它的cDNA命名为CDV-1R(CDV-1-related gene)。本专利技术的人CDV-1基因，尚属首次报道。本专利技术的一个目的是提供一种新的多核苷酸，该多核苷酸编码小鼠CDV-1蛋白的一个同系物，本专利技术的小鼠CDV-1蛋白的同系物被命名为人CDV-1。本专利技术的另一个目的是提供一种新的小鼠CDV-1蛋白的同系物，该蛋白被命名为人CDV-1蛋白。本专利技术的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的人的CDV-1多肽的方法。本专利技术还提供了这种人的CDV-1核酸序列和多肽的应用。在本专利技术的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括编码具有人CDV-1蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID No.3中从核苷酸118-441位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID No.3中从核苷酸118-441位的核苷酸杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID No.4所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ IDNo.3中从核苷酸118-441位的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种分离的人CDV-1蛋白多肽，它包括具有SEQ ID No.4氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID No.4序列的多肽。在本专利技术的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。在本专利技术的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。在本专利技术的另一方面，提供了一种产生具有人CDV-1蛋白活性的多肽的方法，该方法包括(a)将编码具有人CDV-1蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人CDV-1蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID No.3中从核苷酸118-441位的核苷酸序列有至少70％的同源性；(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成人CDV-1蛋白的重组细胞(c)在适合表达入CDV-1蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞(d)分离出具有人CDV-1蛋白活性的多肽。在本专利技术的一个具体实施方案中，本专利技术的分离的多核苷酸全长为498个核苷酸，其详细序列见SEQID No.3，其中开放读框位于118-441位核苷酸。在本专利技术中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。在本专利技术中，术语“人CDV-1蛋白(或多肽)编码序列”指编码具有人CDV-1蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ ID NO.3中118-441位核苷酸序列及其简并序列。该简并序列是指，位于SEQ ID NO.3序列的编码框118-441位核苷酸中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与SEQ ID NO.3中118-441位核苷酸序列同源性低至约70％简并序列也能编码出SEQ ID NO.4所述的序列。该术语还包括能在中度严紧条件下。更佳地在高度严紧条件下，与SEQ ID No.3中从核苷酸118-441位的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。还术语还包括与SEQ ID No.3中从核苷酸118-441位的核苷酸序列的同源性至少70％，较佳地至少80％，更佳地至少90％的核苷酸序列。该术语还包括能编码具有与人CDV-1相同功能的蛋白的、SEQ ID NO.4序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加数个核苷酸。在本专利技术中，“基本纯的”蛋白质或多肽是指其至少占样品总物质的至少20％，较佳地至少50％，更佳地至少80％，最佳地至少90％(按干重或湿重计)。纯度可以用任何合适的方法进行测量，如用柱层析、PAGE或HPLC法测量多肽的纯度。基本纯的多肽基本上不含天然状态下的伴随其的组分。在本专利技术中，术语“人CDV-1蛋白多肽”指具有人CDV-1蛋白活性的SEQ ID No.4序列的多肽。该术语还包括具有与人CDV-1蛋白相同功能的、SEQ ID No.4序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括人CDV-1蛋白的活性片段和活性衍生物。该多肽的变异形式包括同源序列、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严谨度条件下能与人CDV-1 DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用抗人CDV-1多肽的抗血清获得的多肽或蛋白。本专利技术还提供了其他多肽，如包含人CDV-1多肽或其片段的融合蛋白。除了几乎全长的多肽外，本专利技术还包括了人CDV-1多肽的可溶性片段。通常，该片段具有人CDV-1多肽编码序列的至少约10个连续氨基酸，通常至少约30个连续氨基酸，较佳地至少约50个连续氨基酸，更佳地至少约80个连续氨基酸，最佳地至少约100个连续氨基酸。专利技术还提供人CDV-1蛋白或多肽的类似物。这些类似物与天然人CDV-1多肽的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离出的ＤＮＡ分子，其特征在于，它包括：编码具有人ＣＤＶ－１蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３中从核苷酸１１８－４４１位的核苷酸序列有至少７０％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与 ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３中从核苷酸１１８－４４１位的核苷酸杂交。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，傅强，赵勇，张宏来，赵寿元，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]