一种通过循环差减进行大规模cDNA克隆和测序的方法技术

本发明专利技术提供了一种ｃＤＮＡ循环差减测序方法，它包括步骤：（１）以生物体的组织为材料，构建高质量的ｃＤＮＡ起始文库；（２）按设定的分档Ｃ↓［ｏ］ｔ值，对步骤（１）的ｃＤＮＡ起始文库进行均质化，从而得到对应于分档Ｃ↓［ｏ］ｔ值的ｃＤＮＡ均质化文库；（３）对于前一步骤的各ｃＤＮＡ均质化库，挑选克隆进行ＤＮＡ测序；（４）利用已测序的ｃＤＮＡ克隆，对前一步骤中的ｃＤＮＡ均质化库进行杂交差减；（５）重复步骤（３）和（４）１－５，０００次。还可在该方法中增加预先杂交差减步骤。该方法可高效而全面地测定某组织或物种的ｃＤＮＡ。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种ｃＤＮＡ测序方法，其特征在于，它包括以下步骤：（１）以生物体的组织为材料，构建ｃＤＮＡ起始文库，其中该文库中的插入片段长度为０．５－３．０ｋｂ；（２）按设定的分档Ｃ↓［ｏ］ｔ值，对步骤（１）的ｃＤＮＡ起始文库进行均质化，从而得到 对应于分档Ｃ↓［ｏ］ｔ值的ｃＤＮＡ均质化文库，其中Ｃ↓［ｏ］是总ＤＮＡ浓度，单位是以核苷酸数计的摩尔每升而ｔ是复性时间，单位是秒；（３）对于前一步骤的各ｃＤＮＡ均质化库，分别挑选５－５００个克隆进行ＤＮＡ测序；（４）用已测序的ｃＤＮ Ａ克隆来合成对应于已测序列的探针，并将该合成的探针与前一步骤中的ｃＤＮＡ均质化库进行杂交差减，从而从该ｃＤＮＡ库中除去已测序的ｃＤＮＡ克隆，并形成差减化处理过的均质化ｃＤＮＡ库；（５）重复步骤（３）和（４）１－５，０００次。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海生元基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]