一种康定木兰种子组培快繁方法技术

本发明专利技术属于落叶乔木植物种植技术领域，公开了一种康定木兰种子组培快繁方法，外植体的采集时间为5月份。HgCl2消毒15min时污染率9.4％；VC10mg/L时防褐化效果最好；添加6‑BA 1.0mg/L和IBA 0.5mg/L的MS基本培养基，初代培养效果最好；继代分化培养中，培养基MS+6‑BA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+NAA0.1mg/L增值系数4.3；而生根培养以添加IBA0.1mg/L、NAA0.1mg/L及ABT0.2mg/L的1/2MS基本培养基为最佳，生根率为82.93％。移栽基质筛选试验中，腐殖土：蛭石＝1:1条件下康定木兰组培苗生长效果最好，成活率达80％。

A rapid propagation method for seed tissue culture of Kangding Magnolia

The invention belongs to the technical field of the planting of deciduous trees, and discloses a rapid propagation method for the seed tissue culture of the Kangding Magnolia seed. The acquisition time of the explant is in May. 9.4% of the pollution rate of HgCl2 15min VC10mg/L disinfection; anti browning effect is best; add 6 BA 1.0mg/L and IBA 0.5mg/L MS basic medium, the best effect of primary culture; subculture and differentiation culture medium, MS+6 BA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+NAA0.1mg/L added coefficient 4.3; and rooting to add the IBA0.1mg/L NAA0.1mg/L and ABT0.2mg/L 1/2MS the basic medium was the best rooting rate of 82.93%. Humus transplanting substrate screening tests,: vermiculite = 1:1 under the condition of Kangding Mulan plantlet growth effect is the best, the survival rate reached 80%.

【技术实现步骤摘要】
一种康定木兰种子组培快繁方法
本专利技术属于落叶乔木植物种植
，尤其涉及一种康定木兰种子组培快繁方法。
技术介绍
康定木兰为落叶乔木，小枝粗壮，无毛，淡黄绿色，叶纸质，倒卵形或椭圆形，上面绿色有光泽，下面灰绿色或具白粉，若叶有时是红，花先叶开放，大而芳香，花被片9～12，倒卵形至狭卵形，长8～12cm，内面白色，外面粉红色或紫红色，种子为不规则倒卵球形，黑红色。先开花后长叶，3至4月开花，7至9月结果。康定木兰是四川特有品种，分布区域极窄，主要分布于川西泸定县海螺沟、燕子沟、雨洒坪及九龙县洪坝等海拔2000～2500m的湿润沟谷地带。该树种分布区域小，数量少，处于濒临灭绝的边缘。因康定木兰未被列人国家重点保护珍稀植物名录,一直未能得到官方的正式保护，因自然繁殖率低而濒临灭绝。综上所述，现有技术存在的问题是：目前康定木兰的扦插和嫁接技术，扦插技术成活率低，所需材料较多，对母树损伤较大；扦插技术受季节影响大，一年只能扦插1-2次，繁殖速度慢；扦插获得种苗遗传基因一致，不利于保护生物多样性。嫁接技术用于果树是合适的，但不适合用于植物保护领域。本专利技术解决了快速繁殖获得大量种苗的目的，同时保护了遗传多样性。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种康定木兰种子组培快繁方法。本专利技术是这样实现的，通过组培达到快速获得大量种苗的目的，减少了取材对母树的损伤；保护了该物种的遗传多样性。一种康定木兰种子组培快繁方法，所述康定木兰种子组培快繁方法包括以下步骤：步骤一，取当年生枝条带芽茎段，自来水冲洗干净其顶芽和带芽茎段表面，去除叶片保留叶柄，洗衣粉溶液浸泡；外植体用流水冲洗；外植体的表面灭菌及接种，将外植体放置在无菌的广口瓶中，用75％的酒精浸泡20-30s，无菌水冲洗两次，之后用0.1％的升汞灭菌，并在升汞溶液中加入3滴土温，茎段灭菌时间10-15min，用无菌水冲洗一次；步骤二，以带芽茎段外植体接种到培养基中，6-BA1.5mg/L、IBA0.5mg/L、NAA0.2mg/L诱导丛生芽和腋芽萌发；步骤三，芽增殖培养BA0.2mg/L、ZT0.2mg/L、NAA0.1mg/L增殖；步骤四，组培苗的生根培养，添加IBA0.1mg/L、NAA0.1mg/L及ABT0.2mg/L的1/2MS基本培养基；步骤五，长势良好的组培苗转入添加IBA0.1mg/L、NAA0.1mg/L及ABT0.2mg/L的1/2MS基本培养基培；步骤六，将有生根组培苗的培养瓶放置于室温自然光照条件下炼苗5d，在自来水下冲洗干净基部残留的培养基，用0.1％的多菌灵溶液消毒3-5min；用清水洗净，栽种到预先消毒处理过的基质中，基质用营养钵分装，每钵栽种1株，浇水淋透，保湿遮荫。进一步，所述康定木兰种子组培快繁方法培养条件白天温度24±1℃、夜晚温度21±1℃，光照时数14h/d，光照强度为1500～2000lx；培养基中添加琼脂量为0.75％，蔗糖3％，pH灭菌前为5.8-6.0。进一步，所述升汞消毒时间10min。进一步，所述保湿遮荫之后1周再浇水1次，15d喷施1次营养液，进行常规管理。本专利技术的另一目的在于提供一种采用所述康定木兰种子组培快繁方法繁殖的康定木兰。本专利技术外植体的采集时间为5月份。HgCl2消毒15min时污染率最低，为9.4％；VC10mg/L时防褐化效果最好，且启动率也高；添加6-BA1.0mg/L和IBA0.5mg/L的MS基本培养基，初代培养效果最好；继代分化培养中，培养基MS+6-BA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+NAA0.1mg/L对增值效果最好，增值系数可达4.3；而生根培养以添加IBA0.1mg/L、NAA0.1mg/L及ABT0.2mg/L的1/2MS基本培养基为最佳，生根率为82.93％。移栽基质筛选试验中，腐殖土：蛭石＝1:1条件下康定木兰组培苗生长效果最好，成活率达80％。本专利技术利用组织培养技术繁殖苗木，不受季节、时间的影响，可大大提高繁殖系数和工作效率，进行规模化和商业化生产；微型繁殖材料的低温保存不仅节约空间，一旦有需要即可恢复生长，扩大繁殖；利用微型繁殖技术还能获得高度一致同时具有良好表型的群体，可获得无病毒苗木，在种质资源保存和加速良种化进程等方面具有十分重要的意义。同时组织培养是生物技术的一个平台，已经成为现代植物科隆技术中必不可少的环节。本专利技术采用单因子试验和正交试验，通过培养基营养条件对康定木兰植株再生的影响，用生长诱导值来综合评估愈伤组织诱导及生长过程中的情况，能在短期内准确筛选出适宜培养基，且可靠性高。附图说明图1是本专利技术实施例提供的康定木兰种子组培快繁方法流程图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。下面结合附图对本专利技术的应用原理作详细的描述。如图1所示，本专利技术实施例提供的康定木兰种子组培快繁方法包括以下步骤：S101：晴天午后取当年生枝条带芽茎段，用自来水冲洗干净其顶芽和带芽茎段表面，去除叶片保留叶柄，洗衣粉溶液浸泡，用软毛刷轻轻刷洗叶柄基部，将测洗后的外植体用流水冲洗；在超净工作台上进行外植体的表面灭菌及接种，将外植体放置在无菌的广口瓶中，用75％的酒精浸泡20-30s，无菌水冲洗两次，之后用0.1％的升汞灭菌，并在升汞溶液中加入3滴土温，茎段灭菌时间10-15min，用无菌水冲洗一次；S102：以带芽茎段外植体接种到培养基中，6-BA1.5mg/L、IBA0.5mg/L、NAA0.2mg/L诱导丛生芽和腋芽萌发；S103：芽增殖培养BA0.2mg/L、ZT0.2mg/L、NAA0.1mg/L增殖；S104：组培苗的生根培养，添加IBA0.1mg/L、NAA0.1mg/L及ABT0.2mg/L的1/2MS基本培养基；腐殖土：蛭石＝1:1条件下康定木兰组培苗生长；S105：长势良好的组培苗转入添加IBA0.1mg/L、NAA0.1mg/L及ABT0.2mg/L的1/2MS基本培养基培养14天后，芽基部开始形成白色凸点，培养30天长出较多的白色不定根；S106：将有生根组培苗的培养瓶放置于室温自然光照条件下炼苗5d，后揭开封口膜，用镊子轻轻夹出小苗，在自来水下冲洗干净基部残留的培养基，用0.1％的多菌灵溶液消毒3-5min；用清水洗净，栽种到预先消毒处理过的基质中，基质用营养钵分装，每钵栽种1株，浇水淋透，适当保湿遮荫；1周后再浇水1次，15d喷施1次营养液，进行常规管理。腐殖土：蛭石＝1:1为体积比。下面结合试验对本专利技术的应用原理作进一步的描述。(1)培养条件培养条件主要是温度和光照强度的控制和调节，白天温度24±1℃、夜晚温度21±1℃，光照时数14h/d，光照强度为1500～2000lx。培养基中添加琼脂量为0.75％，蔗糖3％，pH灭菌前为5.8-6.0。(2)外植体消毒晴天午后取当年生枝条带芽茎段。带回实验室后先用自来水冲洗干净其顶芽和带芽茎段表面，去除叶片保留叶柄，洗衣粉溶液浸泡，用软毛刷轻轻刷洗叶柄基部，将测洗后的外植体用流水冲洗。然后在超净工作台上进行外植体的表面灭菌及接种，将外植体放置在无菌的广口瓶中，用7本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种康定木兰种子组培快繁方法，其特征在于，所述康定木兰种子组培快繁方法包括以下步骤：步骤一，取当年生枝条带芽茎段，自来水冲洗干净其顶芽和带芽茎段表面，去除叶片保留叶柄，洗衣粉溶液浸泡；外植体用流水冲洗；外植体的表面灭菌及接种，将外植体放置在无菌的广口瓶中，用75％的酒精浸泡20‑30s，无菌水冲洗两次，之后用0.1％的升汞灭菌，并在升汞溶液中加入3滴土温，茎段灭菌时间10‑15min，用无菌水冲洗一次；步骤二，以带芽茎段外植体接种到培养基中，6‑BA1.5mg/L、IBA0.5mg/L、NAA 0.2mg/L诱导丛生芽和腋芽萌发；步骤三，芽增殖培养BA0.2mg/L、ZT 0.2mg/L、NAA 0.1mg/L增殖；步骤四，组培苗的生根培养，添加IBA0.1mg/L、NAA0.1mg/L及ABT0.2mg/L的1/2MS基本培养基；步骤五，长势良好的组培苗转入添加IBA0.1mg/L、NAA0.1mg/L及ABT0.2mg/L的1/2MS基本培养基培；步骤六，将有生根组培苗的培养瓶放置于室温自然光照条件下炼苗5d，在自来水下冲洗干净基部残留的培养基，用0.1％的多菌灵溶液消毒3‑5min；用清水洗净，栽种到预先消毒处理过的基质中，基质用营养钵分装，每钵栽种1株，浇水淋透，保湿遮荫。...

【技术特征摘要】
1.一种康定木兰种子组培快繁方法，其特征在于，所述康定木兰种子组培快繁方法包括以下步骤：步骤一，取当年生枝条带芽茎段，自来水冲洗干净其顶芽和带芽茎段表面，去除叶片保留叶柄，洗衣粉溶液浸泡；外植体用流水冲洗；外植体的表面灭菌及接种，将外植体放置在无菌的广口瓶中，用75％的酒精浸泡20-30s，无菌水冲洗两次，之后用0.1％的升汞灭菌，并在升汞溶液中加入3滴土温，茎段灭菌时间10-15min，用无菌水冲洗一次；步骤二，以带芽茎段外植体接种到培养基中，6-BA1.5mg/L、IBA0.5mg/L、NAA0.2mg/L诱导丛生芽和腋芽萌发；步骤三，芽增殖培养BA0.2mg/L、ZT0.2mg/L、NAA0.1mg/L增殖；步骤四，组培苗的生根培养，添加IBA0.1mg/L、NAA0.1mg/L及ABT0.2mg/L的1/2MS基本培养基；步骤五，长势良好的组培苗转入添加IBA0.1mg/L、NAA0.1mg/L及ABT0...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡进耀，蒋炜，别鹏飞，向莉，王虹，马月琴，
申请(专利权)人：绵阳师范学院，
类型：发明
国别省市：四川,51