一种新的多肽--翻译起始因子辅助因子28和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－翻译起始因子辅助因子２８，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的翻译起始因子辅助因子２８的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--翻译起始因子辅助因子28，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。蛋白质的生物合成是遗传信息的翻译过程。翻译过程需要mRNA、核糖体、各种氨基酸、tRNA，还需要各种蛋白因子的参与，它们包括起始因子、延伸因子、终止因子。eIF如eIF1、eIF2、eIF3、eIF4等为真核生物合成起始因子。实验显示，Met-tRNAI·eIF-2·GTP三元复合物的形成是真核生物蛋白合成起始过程的第一步，第二步是Met-tRNAI与40S核糖体亚基结合，然后Met-tRNAI·40S·mRNA复合物形成，以上两步骤受数种辅助蛋白因子调控(Gupta et al.1993；Hershey1991；Mer rick and Hershey 1996)。在第一步中GTP结合eIF-2，形成二元复合物，然后与Met-tRNAImet结合，GTP结合于eIF-2增强了eIF-2对Met-tRNAImet的亲合性，辅助因子eIF2C可使三元复合物增强稳定性， 阻止它的分解，在第二步中辅助因子eIF2C也起着稳定Met-tRNAI·40S·mRNA复合物的作用(Roy etal.,1988) 。eIF2C首先在家兔网状细胞溶菌素中分离得到，分子量为140KD，它易降解，三个降解多肽为94KD、50KD与25KD。eIF2C基因开放读框序列解码813个氨基酸，它的起始AUG位于翻译的强信号序列(CGAGAUGG)中，在-3与+4位置含有嘌呤，在3’端的非编码区域未发现多聚腺苷酸。克隆的eIF2CcDNA总的GC含量占60％，比一些人翻译起始因子eIF-2α(GC 40％)、eIF-2 (GC 42％)、eIF-2γ(GC 43％)GC含量相对高。eIF2C基因开放读框序列解码多肽为90KD，其分子量与兔网状细胞溶菌素中的140KDeIF2C的差异提示了翻译后的修饰，用MOTIF查询程序发现了两个N-糖基化位点、两个酰胺化位点、八个N-十四烷酰化位点、多个磷酸化位点。兔网状细胞溶菌素中纯化的94KD多肽是一个糖基化蛋白，有高的等电点，富含带电氨基酸(Cheng zou et al.,1998)本专利技术的人翻译起始因子辅助因子28基因与家兔eIF2C 90基因在蛋白水平上有80％的同源性(同源蛋白号AF005355)，其结构域相似于eIF2C基因家族的特征性结构域---GC含量较高、存在翻译后的修饰、可能有数个N-糖基化位点、酰胺化位点、N-十四烷酰化位点及多个磷酸化位点，基于以上各点，故认为本专利技术的新基因为一编码人翻译起始因子辅助因子基因家族的基因，命名为人翻译起始因子辅助因子28。并以此推断其结构域与eIF2C基因家族结构域相似，具有相似的生物学功能。在家兔肾cDNA也找到了eIF2C，提示eIF2C基因是兔染色体中的简单重复序列(Cheng zou et al.,1998)。一些研究显示类eIF2C的活性在真核生物组织中广泛存在，如鼠腹水瘤细胞、小麦胚芽、酵母等(Chakravartyet al.,1985；Dasgupta et al.,1978；Osterhout et al.,1983；Ahmad et al 1985)。Lynn K等人发现eIF2C在胚胎形成中有重要作用(Lynn K et al.,1999)。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--翻译起始因子辅助因子28以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码翻译起始因子辅助因子28的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码翻译起始因子辅助因子28的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产翻译起始因子辅助因子28的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--翻译起始因子辅助因子28的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--翻译起始因子辅助因子28的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与翻译起始因子辅助因子28异常相关的疾病的方法。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的翻译起始因子辅助因子28，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少80％相同性(a)编码上述翻译起始因子辅助因子28的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中878-1636位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2951位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。如本专利技术所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，“分离的翻译起始因子辅助因子28”是指翻译起始因子辅助因子28基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化翻译起始因子辅助因子28。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。翻译起始因子辅助因子28多肽的纯度能用氨基酸序列分析。本专利技术提供了一种新的多肽--翻译起始因子辅助因子28，其基本上是由SEQID NO:2所示的氨基酸序列组成的。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括翻译起始因子辅助因子28的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的翻译起始因子辅助因子28相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术多肽的片段、衍生物或类似物可以是(Ⅰ)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸残基(优选的是保守氨基酸残基)取代，并且取代的氨基酸可以是也可以不是由遗传密码子编码的；或者(Ⅱ )这样一种，其中一个或多个氨基酸残基上的某个基团被其它基团取代包含取代基；或者(Ⅲ)这样一种，其中成熟多肽与另一种化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合；或者(Ⅳ)这样一种，其中附加的氨基酸序列融合进成熟多肽而形成的多肽序列(如前导序列或分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－翻译起始因子辅助因子２８，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博容基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]