一种新的多肽——XRN-100和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－－同源重组中链交换蛋白及核糖核酸外切酶蛋白ＸＲＮ－１００，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法。如生殖细胞及体细胞的遗传信息改变乃至错误所致染色体病、染色体断裂综合征、各种发育紊乱症、某些肿瘤、炎症、免疫性疾病、血液性疾病等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的ＸＲＮ－１００的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——XRN-100，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。XRN基因编码蛋白为同源重组中的链交换蛋白，同时具有核糖核酸外切酶功能。生物依靠基因的位点突变及基因之间的遗传重组等变异方法适应自然选择。同源重组发生在DNA的同源序列之间。真核生物非姊妹染色子体的交换，姊妹染色子体的交换，细菌及某些低等真核生物的转化，噬菌体的重组均属此类。在同源重组中，前联会期中同源序列配对形成异源二聚体DNA引发链交换及基因重组。XRN基因编码的蛋白属于细胞中的一类蛋白，该类蛋白如大肠杆菌(Escherichia coli)中的RecA蛋白，与单链的DNA分子形成DNA-蛋白丝状体(filament)且寻找同源区域，使同源序列配对，形成异源二聚体联结点，通过该蛋白的链交换作用，引导同源重组。在细胞的有丝分裂及减速分裂中发挥了重要的作用。XRN基因编码蛋白同时具有核糖核酸外切酶活性，在RNA的代谢中发挥作用。该编码蛋白具5＇3＇水解5＇为磷酸基团的RNA的能力。该类酶有以下功能1)在mRNA代谢更新中，水解5＇端不带帽结构的mRNA。2)涉及核糖体RNA5＇端剪切加工形成成熟的核糖体RNA。3)在mRNA的转录中止中水解polyA加尾位点后的下游RNA产物。在细胞的生长发育中，XRN基因编码蛋白发挥了重要作用。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——XRN-100以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码XRN-100的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码XRN-100的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产XRN-100的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——XRN-100的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——XRN-100的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与XRN-100异常相关的疾病的方法。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的XRN-100，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少94％相同性(a)编码上述XRN-100的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中60-2783位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-3271位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。如本专利技术所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，“分离的XRN-100”是指XRN-100基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化XRN-100。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。XRN-100多肽的纯度能用氨基酸序列分析。本专利技术提供了一种新的多肽——XRN-100，其基本上是由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括XRN-100的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的XRN-100相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术多肽的片段、衍生物或类似物可以是(Ⅰ)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸残基(优选的是保守氨基酸残基)取代，并且取代的氨基酸可以是也可以不是由遗传密码子编码的；或者(Ⅱ)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基上的某个基团被其它基团取代包含取代基；或者(Ⅲ)这样一种，其中成熟多肽与另一种化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合；或者(Ⅳ)这样一种，其中附加的氨基酸序列融合进成熟多肽而形成的多肽序列(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)通过本文的阐述，这样的片段、衍生物和类似物被认为在本领域技术人员的知识范围之内。本专利技术提供了分离的核酸(多核苷酸)，基本由编码具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽的多核苷酸组成。本专利技术的多核苷酸序列包括SEQ ID NO:1的核苷酸序列。本专利技术的多核苷酸是从人胎脑组织的cDNA文库中发现的。它包含的多核苷酸序列全长为3271个碱基，其开放读框(60--2783)编码了907个氨基酸。根据氨基酸序列同源比较发现，此多肽与小鼠同源蛋白Dhml的氨基酸序列同源性达93％，可推断出该新的XRN-100具有Dhml相似的结构和功能。本专利技术的多核苷酸可以是DNA形式或是RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:1所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本专利技术所用，“简并的变异体”在本专利技术中是指编码具有SEQ ID NO:2的蛋白质或多肽，但与SEQ ID NO:1所示的编码区序列有差别的核酸序列。编码SEQ ID NO:2的成熟多肽的多核苷酸包括只有成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。术语“编码多肽的多核苷酸”是指包括编码此多肽的多核苷酸和包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。本专利技术还涉及上述描述多核苷酸的变异体，其编码与本专利技术有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片断、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。本专利技术还涉及与以上所描述的序列杂交的多核苷酸(两个序列之间具有至少50％，优选具有70％的相同性)。本专利技术特别涉及在严格条件下与本专利技术所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本专利技术中，“严格条件”是指本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－ＸＲＮ－１００，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博容基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]