一种新的多肽——人II类氨酰基-tRNA合成酶15和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人Ⅱ类氨酰基－ｔＲＮＡ合成酶１５，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人Ⅱ类氨酰基－ｔＲＮＡ合成酶１５的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。在mRNA的翻译过程中，tRNA起着将mRNA的密码子与相应的氨基酸对应起来的功能。tRNA分子上的反密码子与其对应的氨基酸之间并无结构上的相关性，而且tRNA本身并不能催化相应氨基酸的荷载，将tRNA与相应的氨基酸结合起来的反应是由氨酰基-tRNA合成酶催化的。氨酰基tRNA合成酶合成氨酰基-tRNA的反应分为两步氨基酸首先活化成氨酰基腺苷酸，之后，氨酰基腺苷酸再与tRNA生成氨酰基-tRNA。氨酰基-tRNA合成酶通过tRNA分子上的“副密码子”来识别不同的tRNA，以便把正确的氨基酸与tRNA结合起来。每一种氨基酸都对应着一种氨酰基-tRNA合成酶，因此，20种氨基酸就有20种不同的氨酰基-tRNA合成酶。但这20种氨酰基-tRNA合成酶彼此是有关系的。根据结构和序列的不同，20种氨酰基-tRNA合成酶可以分成两类，Ⅰ类和Ⅱ类。Ⅰ类酶的催化部分含有Rossmann折叠构成的骨架，这是一种核酸结合区域；Ⅱ类酶的骨架则由一种新的反向平行折叠构成。Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶的序列同源度并不高，但都有至少两个保守的区域-R-x--x(4,12)--x(3)-F-x(3)--{DENQHRKP}----R--x--氨酰基-tRNA合成酶提供合成蛋白质的可用的氨酰基-tRNA。如果某种氨酰基-tRNA合成酶缺失，会造成对应的氨酰基-tRNA不能正确形成，导致合成蛋白质过程的过早终止，形成没有功能的蛋白。如果某种氨酰基-tRNA合成酶发生突变，识别另一种氨基酸，则形成的蛋白质包含不正确的氨基酸序列，如果这种变异发生在对该蛋白质的功能来说关键的氨基酸位点上，那么形成的蛋白质将不能正确折叠而没有功能，或者功能减弱或增强，或者改变了作用的底物而使其功能发生变化。这种功能上的变化常常导致疾病。例如，在25％-30％的人肿瘤中，发现异常的Ras蛋白，在Ras的12位获61位残基的点突变，又甘氨酸代替了缬氨酸，抑制Ras本身以及GAP刺激的GTP酶的活性，因此不能是Ras-GTP转变成Ras-GDP，导致Ras长期处于活性状态，不停顿的向下游发放信号，引起细胞的异常增殖，从而导致癌症的发生。氨酰基-tRNA合成酶的突变还可能蛋白质的分拣和分泌紊乱以及膜受体的功能失常等，引起各种内分泌疾病，免疫系统疾病，神经肌肉系统疾病等。本专利技术的蛋白质含有Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶的特征性保守区域，并且，通过对表达谱的分析发现，正常肝组织中的Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶表达量比肝癌组织中的表达量高，在正常喉组织和喉癌组织中也有相同的发现。综上所述，认为本专利技术的多肽是一种新的Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶，具有相似的生物学功能，并命名为人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶9。通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本专利技术的多肽的表达谱与人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶9的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15。由于如上所述人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中263-685位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1971位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人Ⅱ类氨酰基-tRNA合成酶15表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人Ⅱ类氨酰基－ｔＲＮＡ合成酶１５，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]