一种新的多肽--ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－ＡＴＰ－特异性琥珀酰辅酶Ａ合成酶５１，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的ＡＴＰ－特异性琥珀酰辅酶Ａ合成酶５１的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶存在于人体内，其中含有两种蛋白家族的特征序列，一种是连接酶辅酶A，另一种是氨甲酰磷酸合成酶。氨甲酰磷酸合成酶催化ATP依赖的自谷氨酰胺或氨以及碳酸氢盐而合成氨甲酰磷酸。这种重要的酶类起始尿素循环以及精氨酸和嘧啶的生物合成。谷氨酰胺依赖的氨甲酰磷酸合成酶(氨甲酰磷酸合成酶Ⅱ)参与嘧啶及嘌呤的生物合成。该酶类由两个亚基构成，一条短链为从谷氨酰胺中移去氨基团提供所必需的谷氨酰胺转酰胺酶活性(GATase)，一条长链提供氨甲酰磷酸合成酶活性。在多数真核生物中，嘧啶生物合成的头三步被一种大的多功能酶催化，在哺乳动物中这种酶被称为CAD。氨甲酰磷酸合成酶区域位于N末端GATase域以及包含二氢乳清酸酶和天冬氨酸转氨甲酰酶活性的C端部分。氨依赖的氨甲酰磷酸合成酶(氨甲酰磷酸合成酶I)参与排尿素脊椎动物中的尿素循环；它是一种单功能蛋白，位于线粒体基质中。氨甲酰磷酸合成酶区域通常为120KD大小，源于一个约500个氨基酸的原型亚域的复制。每一亚域独立地与ATP结合，两个同源域分别作用，一个催化碳酸氢盐磷酸化成为羧基磷酸酯，另一个则催化氨基甲酸成为氨甲酰磷酸。氨甲酰磷酸合成酶亚域在生物素依赖酶乙酰辅酶A羧化酶中也是以单一拷贝形式存在。该家族有两个保守的序列(1)--------x(3)--G-x-；(2)--E--N---。连接酶辅酶A家族的四级结构为α2及β2的异四聚体。在这一四聚体中，α亚基只与β亚基相互作用，而β亚基之间相互作用以形成αβ二聚体。两个活性位点囊位于α及β亚基之间的连接区域。辅酶A的一个分子在典型的核苷酸结合模板处与每个α亚基结合，每个α亚基中的特定的一个组氨酸被磷酸化。这个磷酸化组氨酸，是一个催化中间物，它被两个螺旋偶极子固定，每个偶极子分别源于两种亚基。一个αβ二聚体中的β亚基的一段短片段与另一个αβ二聚体的辅酶A结合位点十分接近。该家族包括辅酶A连接酶琥珀酰辅酶A合成酶α及β链，苹果酸辅酶A连接酶以及ATP柠檬酸裂合酶。家族中有些成员利用ATP，另一些则利用GTP。由于如上所述ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中21-1412位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2123位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51结合时，一种可引起该蛋白质改变从而调节该蛋白质活性的分子。激动剂可以包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合ATP-特异性琥珀酰辅酶A合成酶51的分子。“拮抗剂”或“抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－ＡＴＰ－特异性琥珀酰辅酶Ａ合成酶５１，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博道基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]