新型G蛋白偶联型受体蛋白、DNA及其配体制造技术

技术编号:1761794 阅读:255 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及大鼠脑干周边部及人脑的G蛋白偶联型受体蛋白或其盐、其部分肽,或其酰胺或酯或盐;其配体;使这些配体与所述G蛋白偶联型受体蛋白之间的结合特性发生变化的化合物的筛选方法/试剂盒;通过所述筛选获得的化合物或其盐;所述G蛋白偶联型受体蛋白的抗体。本发明专利技术中大鼠脑干周边部及人脑的G蛋白偶联型受体蛋白可用于:(1)测定针对本发明专利技术受体蛋白的配体(本发明专利技术的配体肽)(激动剂),(2)作为预防和/或治疗与本发明专利技术G蛋白偶联型受体蛋白的功能异常相关的疾病的制剂,(3)作为基因诊断制剂,(4)定量针对本发明专利技术G蛋白偶联型受体蛋白的配体,(5)筛选使本发明专利技术的G蛋白偶联型受体蛋白与一种配体(本发明专利技术的配体肽)之间的结合特性发生改变的化合物(激动剂、拮抗剂等),(6)作为预防和/或治疗各种疾病的制剂,其中包含使本发明专利技术的G蛋白偶联型受体蛋白与一种配体(本发明专利技术的配体肽)之间的结合特性发生改变的化合物(激动剂、拮抗剂等),(7)定量本发明专利技术的受体蛋白、其部分肽或盐,(8)通过抗体来中和本发明专利技术的受体蛋白、其部分肽或盐,(9)制备编码本发明专利技术G蛋白偶联型受体蛋白的非人类动物的DNA。(*该技术在2019年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及来自大鼠脑干周边部分及人脑的一种新型G蛋白偶联型受体蛋白或其盐及其编码DNA,还涉及针对该G蛋白偶联型受体蛋白具有配体活性的肽或其酰胺或其酯或其盐等。
技术介绍
多种生理活性物质如激素、神经递质等通过细胞膜上特异性受体蛋白调节着生物机体的功能。很多这类受体蛋白通过活化它们所偶联的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(以下简称为G蛋白)而介导细胞内的信号传递,它们具有共同结构,即7个跨膜区,并因此总称为G蛋白偶联型受体蛋白或7跨膜区受体蛋白(7TMR)。G蛋白偶联型受体蛋白存在于机体细胞和内脏器官的每一功能性细胞表面,它们是诸如激素、神经递质、生理活性物质等分子的重要靶,这些分子可控制、调节或调整活体内细胞和内脏器官的功能。这些受体蛋白通过结合生理活性物质而介导细胞内的信号传递,并由这些信号引发各种反应如细胞的激活或抑制。弄清那些调节各种活体内细胞和内脏器官之复杂功能的物质与它们的特异性受体蛋白(尤其G蛋白偶联型受体蛋白)之间的关系,将阐明各种活体内细胞和内脏器官的功能机制,并因此提供一种用于开发与这些功能有密切关系之药物的非常重要的方法。如,在活体的各种器官中,生理功能均通过多种激素、激素样物质、神经递质或生理活性物质控制。尤其是,机体内各个部位的生理活性物质通过其相应受体蛋白调节其生理功能。体内还有很多未知激素,神经递质或其他生理活性物质,至今仅对其表面的少数受体蛋白有报导。即使是已知的受体蛋白至今也不清楚其是否存在亚型。药物开发中,弄清调节体内复杂功能的物质与其特异性受体蛋白之间的关系也十分重要。为了在药物开放中更有效地筛选受体蛋白的激动剂和拮抗剂,必须阐明体内表达的受体蛋白基因的功能,并在适当的表达系统中表达这些基因。近年来,cDNA序列的随机分析已成为体内表达的基因的常用分析方法。如此获得的cDNA片段的序列已注册并作为表达序列标签(EST)公开在数据库中。但大多数EST仅含有序列信息,很难推测其功能。可以抑制G蛋白偶联蛋白与生理活性物质(即配体)结合的物质,以及能够结合生理活性物质从而诱导出与该生理活性物质(即配体)所诱导信号传导相似的信号传导的物质,这些物质已作为调节生物功能之受体的特异性拮抗剂或激动剂使用。因此,找到一种不仅对体内生理表达十分重要,而且可作为药物开发之目标的新型G蛋白偶联型受体蛋白,并克隆这些基因(例如cDNA),对于寻找该新型G蛋白偶联型受体蛋白的特异性配体、激动剂及拮抗剂具有非常重要的意义。但是,并非所有的G蛋白偶联型受体蛋白都已经发现。即使到现在,仍然有许多未知的G蛋白偶联型受体,以及那些相应配体未明的受体,即孤儿受体。因而,亟需发现一种新型G蛋白偶联型受体蛋白,并阐明其功能。G蛋白偶联型受体可用于根据所述信号传导活性寻找新型生理活性物质(即配体),还可用于寻找该受体的激动剂和拮抗剂。即使未发现任何生理配体,也可以通过受体灭活试验(基因敲除动物)分析该受体的生理活性以制备其激动剂和拮抗剂。该受体的配体、激动剂及拮抗剂可作为与G蛋白偶联型受体之功能紊乱相关的疾病的预防/治疗性药物及诊断药物。因G蛋白偶联型受体的体内基因突变引发该受体功能低下或亢进常导致某些疾病。这种情况下,所述G蛋白偶联型受体不仅可作为拮抗剂或激动剂给药,还可通过将该受体基因转入机体(或特定器官),或通过将反义核酸传至受体基因而实现基因治疗。在所述基因治疗中,所述受体基因碱基序列的信息对于研究该基因的缺失或突变是必不可少的。该受体基因还可作为与该受体失调相关的疾病的预防/治疗性药物及诊断药物。此外,该受体的内源性配体或具有该配体活性的物质的发现可以确保构建用于筛选该受体的拮抗剂或激动剂的系统。专利技术公开本专利技术提供了一种如上所述新型且有用的G蛋白偶联型受体蛋白。即,本专利技术提供了一种新型G蛋白偶联型受体蛋白,它的部分肽及其盐,以及包含编码该G蛋白偶联型受体蛋白及其部分肽的多核苷酸(DNA和RNA,及其衍生物)的多核苷酸(DNA和RNA,及其衍生物)、含有上述多核苷酸的重组载体、带有该重组载体的转化体、用于制备该G蛋白偶联型受体蛋白及其盐类的方法、抗所述G蛋白偶联型受体蛋白、其部分肽及其盐类的抗体、改变所述G蛋白偶联型受体蛋白表达水平的化合物、用于测定所述G蛋白偶联型受体蛋白的配体的方法、用于筛选能够改变配体与所述G蛋白偶联型受体蛋白结合特性之化合物(拮抗剂及激动剂)或其盐类的方法、用于所述筛选方法的试剂盒、利用所述筛选方法或所述筛选试剂盒和所述G蛋白偶联型受体蛋白获得的配体结合特性已改变的化合物(拮抗剂及激动剂)或其盐类、含有所述能改变G蛋白偶联型受体蛋白之配体结合特性的化合物的药物组合物、或能改变G蛋白偶联型受体蛋白表达水平的化合物或其盐类。另外,本专利技术提供了具有针对G蛋白偶联型受体蛋白的配体活性的肽类。本专利技术人经过大量的研究,根据由简并PCR方法获得的EST信息,成功分离到编码大鼠脑干周边部分以及人脑的新型G蛋白偶联型受体蛋白的cDNA,从而成功分析了该cDNA的完整碱基序列。从该碱基序列推导出的氨基酸序列支持了下述事实从第1个到第7个跨膜结构域在疏水图谱试验中都已发现,这样就确证了由该cDNA编码的蛋白质是一种7次通过胞膜的G蛋白偶联型受体蛋白。本专利技术人使用从已知肽中或基因数据库中发现的新型肽,进一步研究发现一种肽,这种肽能增加G蛋白偶联型受体蛋白表达细胞的胞内Ca离子水平。因此,现已查明由癌转移-抑制基因KiSS-1(Genomics,54,145-148,1998)编码的蛋白质的C-末端肽具有活化该受体的活性。KiSS-1是一种蛋白质编码基因。本专利技术人将注意力集中到了由KiSS-1中的54个氨基酸残基组成的肽的序列,并合成了上述C-末端部分肽。将所述肽与受体进行反应性试验证实所述肽具有上述的配体活性。通过剪切上述KiSS-1基因产物获得的肽可以用于抑制肿瘤转移,因为这些肽的基因是癌转移抑制基因。另外,这些肽在胎盘中发挥着重要作用,这源于该基因在胎盘中表达量丰富,hOT7T175是G蛋白偶联型受体蛋白当中的人类型的受体,它在胎盘中也大量表达。该受体在人胰腺中的表达量也相对丰富,因此该肽可能在胰腺中也具有一定生理功能。基于这些发现,本专利技术人进行了广泛的研究,得出了结论,从而完成本专利技术。因此,本专利技术涉及(1)一种含有与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列的蛋白质或其盐类;(2)一种如(1)所述蛋白质或其盐类,其中所述的基本相同的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示;(3)一种(1)所述蛋白质的部分肽或其酯或其酰胺或其盐;(4)一种多核苷酸,其包含具有编码(1)所述蛋白质的碱基序列的多核苷酸;(5)一种如(4)所述多核苷酸,该核苷酸为DNA;(6)一种如(4)所述多核苷酸,其含有如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:6所示的碱基序列;(7)一种含有如(4)所述多核苷酸的重组载体;(8)一种被如(7)所述重组载体转化的转化体;(9)一种用于制备如(1)所述蛋白质或其盐的方法,该方法包括培养如(8)所述转化体,制备并富集如(1)所述蛋白质;(10)抗如(1)所述蛋白质或其盐的抗体以及抗如(3)所述部分肽或其酯或其酰胺或其盐的抗体;(11)如(10)所述的抗体,本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白质或其盐,其含有与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员:渡边卓也寺尾宁子新谷靖大泷彻也金桥贵美子北田千惠子
申请(专利权)人:武田药品工业株式会社
类型:发明
国别省市:JP[日本]

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