一种新的多肽——人泛素结合酶10.01和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人泛素结合酶１０．０１，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，发育紊乱症，ＨＩＶ感染，免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人泛素结合酶１０．０１的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人泛素结合酶10.01，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。沿着周期时段依次有条不紊地发生，特定的蛋白在特定的时间出现并起着相应的调控作用。为达到这一目的，细胞通常通过以下途径来解决第一，修饰现有的蛋白(如磷酸化与去磷酸化)；第二，合成新的蛋白(如cyclin的周期依赖合成)；第三，水解多余的蛋白(如cyclin的周期依赖降解)。与周期相关的蛋白水解通路必需时底物特异的通路。人们发现泛素-蛋白酶水解系统在细胞周期调控中起着十分重要的调节作用。泛素系统是生物体内广泛存在的一个重要的调控途径，其涉及体内各种相关蛋白的选择性降解过程。蛋白的泛素化过程主要涉及三个蛋白酶家族的共同作用泛素活化酶E1蛋白酶家族、泛素结合酶E2蛋白酶家族及泛素蛋白连接酶3蛋白酶家族。其中，E3可能直接参与泛素的最终转移及蛋白的泛素化过程。首先，泛素蛋白的COOH末端与泛素活化酶E1形成硫酯键而被活化，然后被转移给E2或泛素结合酶家族的一员，最后直接或通过泛素-蛋白连接酶E3把泛素转到目标蛋白的赖氨酸残基上。E3为在底物上形成多泛素链所必需的，这一步骤便于26S大小的蛋白酶体有效地识别底物，并促进蛋白的泛素化及降解过程的发生。E6-AP蛋白是一种细胞内蛋白，约100kDa大小。该蛋白在生物体内与人16型及18型乳头状瘤病毒原癌基因E6蛋白相互作用，两者的复合物再与p53蛋白相作用，以介导泛素活性酶E1和泛素结合酶E2的作用活性及p53蛋白的泛素过程。人们已从多种动物体内克隆得到了多种泛素结合酶家族的成员，并对这些蛋白的结构及功能进行了详细的研究。1996年，Ulrike等人又从人中克隆得到了两个新的泛素结合酶E2蛋白家族的成员。这两个蛋白亦与该蛋白家族的其它成员相似，在生物体内参与调控多种细胞周期相关的蛋白的水解途径，以促进相关细胞周期的正常进行。该蛋白的突变或表达异常将直接影响代谢途径的异常，进而引发各种相关的疾病。由上可知，泛素结合蛋白是生物体内泛素调控系统的一个重要的组成成分，其与其它泛素系统的酶类协同作用以调控相关的细胞周期过程的正常进行。该蛋白家族成员的突变或表达异常将导致相关代谢途径的蛋白的表达异常，进而引发各种相关的疾病。该蛋白在生物体内通常与各种细胞周期异常相关的代谢及发育紊乱性疾病、相关组织的肿瘤及癌症等疾病的发生密切相关。其还可用于诊断及治疗上述各种相关的疾病。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本专利技术的多肽的表达谱与人泛素结合酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人泛素结合酶10.01。由于如上所述人泛素结合酶10.01蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人泛素结合酶10.01蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人泛素结合酶10.01蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人泛素结合酶10.01以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人泛素结合酶10.01的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人泛素结合酶10.01的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人泛素结合酶10.01的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人泛素结合酶10.01的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人泛素结合酶10.01的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人泛素结合酶10.01异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中1300-1575位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1811位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人泛素结合酶10.01蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人泛素结合酶10.01蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人泛素结合酶10.01表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人泛素结合酶１０．０１，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]