本发明专利技术涉及核酸分子的分离，其表达经ＩＬ－９上调。对应于该核酸分子的蛋白的氨基酸显示出细胞因子的某些结构特征。此外还公开了所述核酸分子和蛋白质分子的多种用途。这些分子可称作Ｔ细胞诱导因子。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
,其编码蛋白及其应用的制作方法
本专利技术涉及新分离的核酸分子及其应用。细胞因子白细胞介素-9(IL-9)可上调这些核酸分子。本文还公开了这些核酸分子所编码的蛋白。它们被称为T细胞衍生的诱导因子(TIFs)。这些核酸分子编码的蛋白可诱导细胞中STAT活化。它们可用于如刺激靶组织再生。而且，它们的抑制剂或拮抗剂可用于延迟、阻滞或抑制其它组织的分化。
技术介绍
和优选方法在过去十年中，对免疫系统及其调节作用的了解不断深入。其中一个受关注的领域是对调节免疫系统的蛋白和糖蛋白的研究。这些分子中最了解的家族之一是细胞因子。这些分子参与细胞间“通信”。细胞因子家族的个别成员参与了更广泛的病理过程，如肿瘤和过敏。一方面细胞因子参与病理过程，另一方面它们也具有治疗价值。白细胞介素是其中一类细胞因子。有关白细胞介素的文献很多。如Mertelsmann等的美国专利4778879；Stern的美国专利4490289；Mark等的美国专利4518584；和Miyaji等的美国专利4851512，它们均涉及白细胞介素-2或“IL-2”。涉及白细胞介素-1(IL-1)的已授权专利如Cosman的美国专利4,808,611。所有这些专利均全文引入作参考。涉及不同白细胞介素的更近期专利有美国专利5694234(IL-13)；5650492(IL-12)；5700664；5371193和5215895(IL-11)；5728377,5710251,5328989(IL-10)；5580753,5,587,302,5157112,5208218(IL-9)；5194375,4965195(IL-7)；5723120,5178856(IL-6)，和5017691(IL-4)。对专利文献的粗略回顾显示，白细胞介素家族成员的特点多样。可以设想更大的细胞因子家族将显示更多的不同。见如Aggarwal等的《人类细胞因子基础和临床研究手册》(Blackwell科技出版社，1992)，Paul编，基础免疫学(Raven出版社，1993)，763-836页，“T细胞衍生的细胞因子和它们的受体”，“前炎性细胞因子和免疫。”所有引用的文献均全文引入作参考。不同细胞因子间的关系很复杂。从引证的文献可见，特定细胞因子水平的增高或降低可以直接或间接影响其它分子的水平。受影响的分子有些是其它细胞因子。淋巴因子IL-9，曾被称为“P40”，是T细胞衍生的分子，最初被鉴定为支持T4细胞系的持久抗原非依赖性生长的因子。见如Uyttenhove等，美国国家科学院院刊856934(1988)，和Van Snick等，实验医学杂志169363(1989)，及Simpson等，欧洲生物化学杂志183715(1989)，均引入作参考。首先观察到IL-9对限制性T4细胞系的活性，但未观察到对CTL或新分离的T细胞的活性。见如Uyttenhove等，出处同上和Schmitt等，欧洲免疫学杂志192167(1989)。当实验确定IL-9和称作T细胞生长因子III(TCGF III)的分子与MEA(肥大细胞生长增强活性)作用相同时，其活性范围扩大了，其中MEA可增强骨髓来源的肥大细胞对IL-3的增殖应答，可见于Hultner等，欧洲免疫学杂志和1990年3月23日提交的美国专利申请498,182，这两篇文献均引入作参考。还发现人型IL-9刺激成巨核细胞白血病的增殖。可见于Yang等，血液741880(1989)。最近的工作显示IL-9也支持红细胞集落形成(Donahue等，血液75(12)2271-2275(6-15-90))；促进髓系红细胞爆发形成的增殖(Williams等，血液76306-311(9-1-90))；支持成人和胎儿来源的BFU-E′s的克隆成熟(Holbrook等，血液77(10)2129-2134(5-15-91))。IL-9的表达还与霍奇金病和大细胞退行性淋巴瘤有关(MerZ等，血液78(8)1311-1317(9-1-90))。对易患或不易患支气管过度反应的小鼠的遗传分析揭示，这一模型与IL-9基因的联系，及IL-9产量与易感性的关系(Nicolaides等，美国国家科学院院刊，94，13175-13180，1997)。人类遗传学研究也指出IL-9和IL-9R基因是哮喘的候选基因(Doull等Am.J.Respir.Crit.CareMed.，153，1280-1284，1996；Holroyd等Genomics52，233-235，1998)。其次，对IL-9转基因小鼠的研究证实IL-9表达增加导致肥大细胞增多症，嗜酸性粒细胞增多症，支气管过度反应和高水平的IgE(Temann等，实验医学杂志1881，307-1320，1998；Godfraind等，免疫学杂志160，3989-3996，1998；McLane等Am.J.Resp.Cell.Mol.19713-720(1999))。总之，这些观察有力说明IL-9在该疾病中发挥重要作用。另有研究表明IL-9及其突变蛋白与哮喘和过敏有关。见PCT申请US96/12757(Levitt等)，和PCTUS97/21992(Levitt等)，均引入作参考。已知IL-9影响受试者中其它分子的水平。见于Louahed等，免疫学杂志1545061-5070(1995；Demoulin等，分子细胞生物学164710-4716(1996)，均引入作参考。还认识到受影响的分子在生物系统中有自己的功能。例如，Demoulin等显示IL-9的众多已知活性由STAT转录因子的活化介导。因此领域内一直在尝试对其存在和/或水平受其它分子如细胞因子影响的分子进行鉴定。以下内容将描述这类分子。发现编码本专利技术蛋白的核酸分子在IL-9存在时表达，缺乏IL-9时不表达。因此，这些分子尤其是IL-9的表达或效应的“标志”。这些分子在后文被称为T细胞衍生的诱导因子或“TIFs”。在下面的描述中将显示本专利技术的这些和其它特点。附图简述附图说明图1对比推导的小鼠和人TIF的氨基酸序列(分别是SEQ ID NO27和28)。优选实施方案详述实施例1已知小鼠淋巴瘤细胞系BW5147可在体外生长，且其培养基中不需加入任何细胞因子。为确定经IL-9诱导的基因，BW5147样品用IL-9(200U/ml)或不用IL-9培养24小时。然后，用异硫氰酸胍裂解，CsCl梯度离心，分离总RNA。这些是已知技术。之后，用oligo(dT)纤维素柱从总RNA中纯化多聚腺苷化RNA。然后用分离的polyA RNA生成双链cDNA。用市场购买的oligo(dT)作引物。3～5μg polyA RNA的任意部位与1μg的oligo dT加热至70℃，10分钟，然后与5x第一链反应缓冲液(250mM HCl(pH8.3)，375mMKCl，15mM MgCl2)，10Mm DTT(二硫苏糖醇)，500μM dNTPs，和800U的逆转录酶一起保温。反应总体积是20μl，37℃反应1小时。由此合成第一条cDNA链。加入30μl的5x第二链反应缓冲液(100mM Tris-HCl(pH6.9)，450mM KCl，23mM MgCl2，0.75mMβ-NAD+，50mM(NH4)2本文档来自技高网...
【技术保护点】
分离的编码Ｔ细胞衍生诱导因子的核酸分子，其互补序列在严谨条件下至少与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５之一杂交。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：劳里杜穆蒂尔，杰米拉劳埃德，琼克里斯托弗雷诺尔德，
申请(专利权)人：路德维格癌症研究院，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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