公开了Ｉｉ蛋白质表达的或免疫调节功能的一种专一性调节剂。特别公开了几种类型的Ｉｉ调节剂，包括那些其功能是通过与编码哺乳动物Ｉｉ蛋白质的ＲＮＡ分子形成双螺旋分子对Ｉｉ蛋白质的合成在翻译水平上有抑制作用的。这类调节剂包括由核苷酸碱基组成的共聚物和可表达的逆基因构建物，组成共聚物的核苷酸碱基特别能与编码哺乳动物Ｉｉ蛋白质的ＲＮＡ分子杂交。另一方面，还公开了包含表达Ｉｉ的专一性调节剂的ＭＨＣ类型Ⅱ－正效抗原提呈细胞。例如，这样的细胞在显示与ＭＨＣ类型Ⅱ蛋白质相关的自身决定簇肽方面是有用的。还发现了本发明专利技术的一些内容在治疗某些疾病方法方面的应用。例如，通过增强对不良细胞的免疫攻击力，治疗病人恶性肿瘤和自身免疫紊乱。另外的应用是从细胞中分离自我决定簇肽。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术的技术背景对特异性抗原的免疫应答是通过T淋巴细胞对这些抗原的肽片段的识别来调节的。在抗原提呈细胞中，经过处理的抗原的肽片段结合于主要组织相容性复合体(MHC)分子的抗原肽结合部位。然后，这些肽-MHC复合体被转移到细胞表面，并被辅助性T淋巴细胞或细胞毒性T淋巴细胞上的T细胞受体所识别(外源肽和提呈MHC分子的相邻表面)。有两类传递肽的MHC分子MHC类型I和MHC类型II。MHC类型I分子将抗原提呈给CD8-正效细胞毒性T淋巴细胞，然后，此细胞被激活，可以直接杀死抗原提呈细胞。MHC类型I分子专门从内源性合成蛋白质接受肽。例如传染性病毒，在它们合成期间，于内质网上。MHC类型II分子将抗原提呈给CD4-正效辅助性T淋巴细胞(T辅助性细胞)。一旦其被激活，T辅助性细胞作用于激活细胞毒性T淋巴细胞(T杀伤细胞)并通过物理接触和细胞素的释放激活B淋巴细胞。与MHC类型I分子不同，MHC类型II分子结合外源性抗原，其通过非特异性或特异性的胞吞作用被内在化。在合成期间，MHC类型II分子与内源性抗原的结合受到阻断，而被结合的恒定链蛋白(Ii)所取代。这些MHC类型II-Ii蛋白质复合体从内质网转移至后高尔基区室中，在那里，Ii由于蛋白质水解而被释放。而外源性抗原肽被结合。MHC类型I和MHC类型II分子在细胞中有明显的分布。即使在不同类型的细胞中表达的水平有所不同，几乎所有的有核细胞都表达MHC类型I分子。免疫系统的细胞在其表面充分表达MHC类型I，而肝脏细胞表达水平相对较低。无核细胞表达少或不表达MHC类型I。MHC类型II分子在B淋巴细胞和巨噬细胞被高度表达，在其它组织细胞不被表达。但是，许多其它细胞类型可由于暴露给细胞素被诱导表达MHC类型II分子。在正常情况下，由于Ii蛋白总是与新生的MHC类型II分子一同合成，内源性肽(带有自我决定簇潜在性地导致自身免疫疾病)不与MHC类型II分子结合。由于包含有自我决定簇肽和MHC类型II分子的复合体从不被身体免疫监视系统发觉，对这些决定簇的耐受力不会发生。如果在发育的个体中，MHC类型II分子不被Ii抑制，那么，内源性自我决定簇就被MNC类型II分子提呈，启动了对那些内源性抗原的自身免疫应答。这就是某些自身免疫疾病的情况。在恶性肿瘤细胞中发生了这样的效应时，对肿瘤内源性抗原的自身免疫应答可以用于治疗，限制肿瘤细胞的生长或消除肿瘤细胞。增加MHC类型II分子的表达而不伴随Ii蛋白增加的治疗作用在MHC类型II-负效，Ii-负效肿瘤中显示出来。。在这些研究中，将MHC类型II分子基因转染到MHC类型II-负效的鼠肉瘤中产生了MHC类型II正效，但Ii-负效肿瘤细胞系。将这些细胞注射到MHC相容宿主导致亲本肿瘤的延迟生长。Ii蛋白基因与MHC类型II基因共同转染到鼠细胞系，由于Ii链阻断了内源性肿瘤抗原的提呈而抑制了MHC类型II基因对肿瘤的治疗效果。类似的结果也在鼠黑素瘤产生。这些治疗探索的成功被认为涉及到了树状细胞(dendriticcells)的自然活动。树状细胞是专门的清扫者，它把外源性抗原加工成肽并从它们细胞表面的MHC抗原将其提呈给T淋巴细胞。树状细胞有能力通过MHC类型I和MHC类型II提呈抗原，能使它们激活T辅助细胞和T杀伤细胞。人们认为，激发强有力的T杀伤细胞的应答需要有效的T辅助细胞应答，由树状细胞产生的联合活动导致高强度的抗肿瘤应答巨噬细胞系的树状细胞发现肿瘤细胞、摄食和加工特异的肿瘤抗原和与肿瘤相关的抗原。树状细胞移动到淋巴结，随之流动到肿瘤的所在位置，停留于那里的淋巴结皮层附近，在此处，新的T细胞产生。于淋巴结皮层，识别出树状细胞上肿瘤决定蔟的静止的T杀伤细胞被激活和增殖，随后，作为有活性的抗肿瘤杀伤T细胞被释放于循环系统中。即使与T-辅助细胞的活动相互作用或合格的树状细胞通过MHC类型I分子提呈抗原并因此激活T杀伤细胞，与T辅助细胞和T杀伤细胞同时发生相互作用也不是必需的；在T辅助细胞引起活化后的一些时间内，被激活的树状细胞仍保持它们激发T杀伤细胞的能力。由MHC类型II或MHC类型I提呈的各个抗原肽决定簇不需要从单一的抗原蛋白质中得来，从恶性肿瘤细胞得来的两个或多个抗原可被加工和被树状细胞提呈。因此，只许可一个大概不是肿瘤特异性的决定簇，携带着它而具有能够激活T杀伤细胞的能力，这些T杀伤细胞作用于其它的也许是多个肿瘤特异性决定簇。(Therefore，licensing to onedeterminants，perhaps not tumor specific，carries with it the powerto license activation of T killer cells to other，perhaps tumor-specific，determinants)。这些较小的或隐蔽的决定簇被用于各种各样的治疗目的。MHC类型II抗原提呈的实验中的改变被认为是对这些较小的决定簇扩大的免疫应答。通常无法利用于对MHC类型II分子作用的一系列肽提供了用于MHC类型II提呈的多种肽的丰富来源。这一系列决定簇的开发导致应答的T辅助细胞数目的扩大。这些扩大的群体可以激发树状细胞能力(licensing)，它们一些直接朝向肿瘤特异性决定簇和与肿瘤相关的决定簇。虽然，正常的细胞潜在地具有肿瘤细胞决定簇，对正常细胞仅仅有少量的细胞损坏发生。这是因为抗肿瘤应答的多种效应器的应答(大量的杀伤T细胞、周围活化的细胞素、有吞噬作用的巨噬细胞和它们的产物)都不直接朝向正常细胞。正常的MHC类型II抗原提呈可被MHC类型II分子与Ii蛋白相互作用的抑制所替代。这是由减少Ii蛋白的总量(例如，减少表达)或干扰Ii免疫调节功能来完成的。抑制Ii表达用各种各样的反义技术来完成。反义寡核苷酸与mRNA的AUG部位相互作用，据说可用于Ii蛋白减少MHC类型II对外源性抗原的提呈。。但是，Ii蛋白的表达效果和MHC类型II分子对内源性抗原的提呈效果还没有得到检测。最近，Humphreys等人证明了三个反义寡核苷酸和一逆基因构件物，它们能导致表达MHC类型II分子的抗原提呈细胞表达出对Ii蛋白表达的有效抑制。将用这种机理使Ii受到抑制的肿瘤细胞植入小鼠体内，与植入未经处理的亲本肿瘤细胞的小鼠相比，其存活期大大延长。此观察指出，Ii蛋白的抑制使一系列抗原决定簇提呈增加，其可以激发更多的对肿瘤细胞有效的免疫应答。本专利技术的一个方面是Ii蛋白表达或免疫调节功能的专一性调节剂(寡核苷酸CTCGGTACCTACTGG被专门排除在外)。这个专一性的Ii调节剂对表达MHC类型II分子细胞的传递改变了结合于细胞MHC类型II分子上的抗原决定簇的范围和选择，这样就改变了那个细胞的抗原提呈。几种成分作为专一性的Ii调节剂而起作用，可以根据它们的作用机理进行分类。在一个实施方案中，Ii专一性的调节剂通过与编码哺乳动物Ii蛋白的RNA分子形成双螺旋分子而起作用。双螺旋分子的形成在翻译水平上抑制了Ii蛋白的合成。这个专一性的调节剂可以包含若干核苷酸碱基，它们依照Watson-Crick碱基配对方式，以核苷酸碱基与Ii RNA其它碱基进行结合的形式在聚合物骨架上适当地有本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种Ｉｉ蛋白表达或免疫调节功能的专一性调节剂，寡核苷酸ＣＴＣＧＧＴＡＣＣＴＡＣＴＧＧ被排除在外。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：徐民桢，丘刚，罗伯特汉弗莱斯，
申请(专利权)人：抗原表达公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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