一种稳定的重组人血管内皮抑制素皮下注射组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种重组人血管内皮抑制素注射液，主要由稳定剂、缓冲溶液、重组人血管内皮抑制素组成。本发明专利技术的重组人血管内皮抑制素注射液具有浓度高、稳定性好的特点，可以替代传统的静脉滴注溶液，显著缩短给药时间，降低患者生理上的痛苦，提高患者的临床顺应性。

A stable recombinant human vascular endostatin subcutaneous injection composition

The invention relates to a kind of Recombinant Human Endostatin Injection, which is mainly composed of stabilizer, buffer solution and recombinant human vascular endostatin. The Recombinant Human Endostatin Injection of the invention has the characteristics of high concentration and good stability, which can replace traditional intravenous drip solution, shorten the time of administration, reduce the physical pain of patients, and improve the clinical compliance of patients.

【技术实现步骤摘要】
一种稳定的重组人血管内皮抑制素皮下注射组合物
本专利技术涉及重组人血管内皮抑制素药物组合物

技术介绍
重组人血管内皮抑制素(rhEndostatin，中文名：)(ZL00107569.1)是通过修饰人血管内皮抑制素的核苷酸编码序列使其N末端带有9个附加氨基酸序列。所生产的重组人血管内皮抑制素由192个氨基酸构成，其氨基酸序列为：(M)GGSHHHHHHSHRDFQPVLHLVALNSPLSGGMRGIRGADFQCFQQARAVGLAGTFRAFLSSRLQDLYSIVRRADRAAVPIVNLKDELLFPSWEALFSGSEGPLKPGARIFSFDGKDVLRHPTWPQKSVWHGSDPNGRRLTESYCETWRTEAPSATGQASSLLGGRLLGQSAASCHHAYIVLCIENSFMTASK。O’Reilly教授于1997年从小鼠内皮细胞系EOMAD的培养液中分离得到了具有抑制血管内皮细胞生长的物质(血管内皮抑制素，Endostatin)，其通过抑制肿瘤血管的生成能够显著地抑制多种原发性肿瘤的生长(O’Relly,M.S.,etal.Cell.1997,88:277-285)。重组人血管内皮抑制素正是基于“饿死肿瘤疗法”理论来抑制肿瘤生长，临床上联合NP化疗方案用于非小细胞肺癌患者。目前市售的重组人血管内皮抑制素为普通注射液，临床使用中患者需每天注射一次，连续14天为一个疗程，休息一周后，再继续下一疗程。而每天注射时，静脉滴注时间至少3～4h，患者临床顺应性差。因此，将重组人血管内皮抑制素开发成皮下注射制剂，可以替代传统的静脉滴注溶液，显著缩短给药时间，降低患者生理上的痛苦，提高患者的临床顺应性。目前国内生产的重组人血管内皮抑制素注射液给药途径为静脉滴注，规格为15mg/3mL。若开发皮下注射液，需将浓度提高至15mg/1mL～15mg/0.5mL。然而重组人血管内皮抑制素浓度提高带来的是可见异物或颗粒的显著增加，国内尚无重组人血管内皮抑制素皮下注射液。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种适合用作皮下注射的重组人血管内皮抑制素注射液，显著缩短给药时间，从而降低患者生理上的痛苦，提高患者的临床顺应性。本专利技术所要解决的技术问题是提供一种浓度高、稳定性好的重组人血管内皮抑制素皮下注射组合物。专利技术人经过大量的试验，惊奇的发现，在特定pH的缓冲体系中采用糖类与表面活性剂组合，能够显著抑制高浓度下重组人血管内皮抑制素可见异物或颗粒的形成。本专利技术的重组人血管内皮抑制素皮下注射组合物包括稳定剂，缓冲溶液和重组人血管内皮抑制素。本专利技术所述的稳定剂是指能够抑制重组人血管内皮抑制素在高浓度下可见异物或颗粒的形成。本组合物中稳定剂包括糖类及表面活性剂。其中糖类优选为蔗糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇的一种或多种，更优选的为海藻糖、甘露醇、蔗糖中的一种或多种。优选的，所述糖类浓度为10～100mg/ml，进一步选自20～80mg/ml，优选为40mg/ml。其中表面活性剂优选为聚山梨酯、泊洛沙姆中的一种或多种。其中聚山梨酯优选为吐温20、吐温80中的一种或多种。其中泊洛沙姆优选为泊洛沙姆105，泊洛沙姆124，泊洛沙姆188，泊洛沙姆237，泊洛沙姆338，泊洛沙姆401，泊洛沙姆403，泊洛沙姆407中的一种或多种，更优选的为泊洛沙姆188、泊洛沙姆407中的一种或两种。优选的，表面活性剂用量浓度为0.1～2mg/ml，优选为0.2～2mg/ml。以上所述的浓度是以所述注射剂液的体积为基准计算.其中缓冲溶液优选的为醋酸盐缓冲溶液或组氨酸盐缓冲溶液，优选为醋酸-醋酸钠缓冲液或组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液。其中缓冲体系优选pH为5.0-6.5，优选为5.0～6.0。其中缓冲体系浓度优选为20mM～120mM，优选为20mM～60mM。本专利技术所述的重组人血管内皮抑制素是能够抑制内皮细胞增殖的蛋白质、片段或其修饰形式。重组人血管内皮抑制素可以是液体，也可以是冷冻干燥的，或者喷雾干燥的固体。优选的，重组人血管内皮抑制素为rhEndostatin(恩度，Endostar)，重组人血管内皮抑制素浓度为15mg/mL～30mg/mL。本专利技术的优点主要在于：第一本专利技术组合物中采用了糖类与表面活性剂组合作为稳定剂，在特定pH的缓冲体系中可以显著抑制重组人血管内皮抑制素在高浓度下可见异物或颗粒的形成，提高稳定性；第二与传统静脉滴注相比，本专利技术的皮下注射剂显著缩短给药时间，降低患者生理上的痛苦，提高患者的临床顺应性。具体实施方式本专利技术通过下列实施例作更详细的描述，但本专利技术的保护范围不局限于此。实施例1缓冲体系的筛选(1)处方配制人体pH值为7.4，一般要求注射液pH值在4～9之间。另外，为确保成品在贮藏期内药液质量稳定，需确定药液合理的pH值范围，本专利技术人分别按照表1配制溶液，灌封于西林瓶中贮藏，其中，所述的缓冲体系中，醋酸盐缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液，枸橼酸盐缓冲液为枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液，组氨酸盐缓冲液为组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液，磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液。表1处方列表(2)加速试验采用加速实验，分别在25℃条件下贮藏2周、40℃条件下贮藏2周、40℃条件下贮藏4周，对以上处方的外观以及纯度进行检查。对纯度检查时，采用HPLC测定rhEndostatin纯度，HPLC法的色谱柱为C18反相柱，以0.1％三氟乙酸的水溶液为流动相A液，以0.1％三氟乙酸的乙腈容易为流动相B液，梯度洗脱24min(A液从64％-40％，B液从36％-60％)，流速为1.3ml/min，检测波长为214nm。外观结果如表2所示：表2外观观察结果纯度检查结果如表3所示：表3HPLC纯度结果放置条件处方1处方2处方3处方4处方5处方6处方7处方80天98.6098.7498.5798.6798.6398.5798.5598.5625℃2周98.6598.6998.4598.5498.6098.5998.5098.4440℃2周97.6497.87ND*ND*97.7497.98ND*ND*40℃4周92.7893.91ND*ND*92.84ND*ND*ND*ND*：表示未进行测定。由表2和表3可见，在含有甘露醇的重组人血管内皮抑制素(rhEndostatin)处方中，在25℃室温条件下，pH为5.0～6.5的各缓冲体系都有较好的稳定性。当缓冲溶液为醋酸盐缓冲液时，在加速试验过程中体现出最高的稳定性，在40℃下保存4周外观上也无明显变化；但当缓冲溶液为组氨酸盐时，其稳定性据pH值不同而有所不同；当缓冲溶液为而枸橼酸盐缓冲液和磷酸盐时，则在40℃下2-4周时有可见异物即有片状蛋白析出，体系稳定性不高。实施例2稳定剂糖类及表面活性剂的影响(1)处方配制选用醋酸盐缓冲体系及组氨酸盐缓冲体系，研究糖类及表面活性剂对重组人血管内皮抑制素(rhEndostatin)稳定性的影响，本专利技术人分别按照表4配制溶液，灌封于西林瓶中贮藏。其中，所述的缓冲体系中，醋酸盐缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液，组氨酸盐缓冲液为组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液，磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液。表4处方列表(2)加速试验采用加速实验，分别在25℃条件下贮藏本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人血管内皮抑制素注射液，其特征在于该注射液主要由以下组分组成：a)稳定剂；b)缓冲溶液；c)重组人血管内皮抑制素。

【技术特征摘要】
1.一种重组人血管内皮抑制素注射液，其特征在于该注射液主要由以下组分组成：a)稳定剂；b)缓冲溶液；c)重组人血管内皮抑制素。2.根据权利要求1所述的注射液，其特征在于所述稳定剂主要由糖类和表面活性剂组成。3.根据权利要求2所述的注射液，其特征在于所述糖类选自蔗糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇中的一种或多种，优选的选自海藻糖、甘露醇、蔗糖中的一种或多种，进一步优选自甘露醇。4.根据权利要求2所述的注射液，其特征在于所述糖类浓度为10～100mg/ml，进一步选自20～80mg/ml，优选为40mg/ml。5.根据权利要求2所述的注射液，其特征在于所述表面活性剂选自聚山梨酯、泊洛沙姆中的一种或多种，其中所述的聚山梨酯选自吐温20、吐温80中的一种或多种。6.根据权利要求2所述的注射液，其特征在于所述表面活性剂浓度为0.1～2mg/ml，优选为0.2～2mg/ml。7.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玲，许向阳，赵群，姜桂香，
申请(专利权)人：山东先声生物制药有限公司，江苏先声药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37