一种基于组织培养的快速繁育铁筷子的方法技术

本发明专利技术涉及一种基于组织培养的快速繁育铁筷子的方法，包括以下步骤：(1)配制芽诱导培养基、不定芽增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基，(2)铁筷子的组织培养。与现有技术相比，本发明专利技术通过组织培养技术，年繁殖系数提高到1:20000，成本减低0.8‑1.0元/株，铁筷子组培苗极大提高了繁殖速度和苗的整齐度，更好地保持了原有的母本性状。

A method of rapid breeding of iron chopsticks based on tissue culture

The invention relates to a method for the rapid propagation of iron chopsticks tissue culture based, comprises the following steps: (1) preparation of bud induction medium, adventitious bud proliferation medium, seedling medium, rooting medium, (2) the tissue culture of iron chopsticks. Compared with the prior art, the invention by tissue culture technology, breeding coefficient increased to 1:20000, reduce the cost of 0.8 1 yuan / plant, iron chopsticks plantlets can greatly improve the reproduction rate and seedling uniformity, better preserves the original female traits.

【技术实现步骤摘要】
一种基于组织培养的快速繁育铁筷子的方法
本专利技术涉及一种植物快速繁育方法，尤其是涉及一种基于组织培养的快速繁育铁筷子的方法。
技术介绍
铁筷子为毛茛科铁筷子属植物，多年生常绿草本，叶片肾形或五角形，鸡足状三全裂，茎生叶近无柄，基生叶片较小。花朵生茎或枝端，在基生叶刚抽出时开放，无毛；萼片初粉红色，在果期变绿色。花期3月-4月，果期5月。铁筷子因其花型独特，早春开花，病虫害少，耐荫性强，可大面积种植，是林下地被植物的优良材料。铁筷子作为乡土优良园林植物，因其观赏性、抗逆性、新颖性逐渐受到大家的认可，在园林绿化中大量的使用。同时公开号为CN103599145B的中国专利介绍了铁筷子药材乙醇提取浸膏中乙酸乙酯萃取部位有较好的镇痛和抗炎作用，可将其用于制备抗炎镇痛的药物。公开号为CN104997818A的中国专利公开了铁筷子总皂苷在保护肝脏功能上的新用途。因此，铁筷子具有许多的药用价值。铁筷子可播种繁殖和分株繁殖，铁筷子的种子具有休眠特性，夏季收取成熟种子后立即播种或经过普通干藏后播种，发芽率均低于20％。需经过种子自然落于地面，受落叶覆盖，冬季低温及雨雪浸润等过程使种子通过后熟，达到可萌发的营养状态才可萌发，发芽率较低，且其分株慢，市场需求量大，种苗供应受限制。因此，目前需求一种能够快速繁育铁筷子的方法，以满足目前对于铁筷子的需求量。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种基于组织培养的快速繁育铁筷子的方法。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：一种基于组织培养的快速繁育铁筷子的方法，包括以下步骤：(1)培养基的配制，包括组培各阶段培养基的组分和含量：1.1、芽诱导培养基：MS+BA1-5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L；1.2、不定芽增殖培养基：MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L；1.3、壮苗培养基：MS+6-BA0.5-1.5mg/L+NAA0.1-0.2mg/L；1.4、生根培养基：MS+NAA0.1-0.3mg/L+IBA0.1-0.3mg/L；上述各种培养基的pH5.8，加入蔗糖30g/L，琼脂6g/L，培养温度为22±1℃，光照为1900-2100Lx；(2)铁筷子的组织培养：2.1、无菌材料的获得铁筷子在春季3月挖取地上部分的小芽，用自来水冲洗1h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成1cm长，接种于芽诱导培养基上；2.2、芽的分化和增殖小芽接种于诱导培养基上30天后，小芽基部开始膨大，再培养25天可见明显的愈伤组织；继续培养30天，切下带小芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基上培养；2.3、不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽每丛只有2-3小芽可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单球后，放入壮苗培养基，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm；2.4、生根培养取1-2cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，25天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，35天后可以长至1-2cm；2.5、炼苗与移栽生根培养28-32天后，根系长至2-3cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化炼苗40天后，即移栽室外，给予肥水管理，移栽成活率为88％。作为优选，所述的芽诱导培养基的组分和含量为：MS+BA3mg/L+NAA0.3mg/L，或MS+BA5mg/L+NAA0.5mg/L。作为优选，所述的不定芽增殖培养基的组分和含量为：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。该培养基条件下繁殖率最高，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速，无玻璃化现象，在该培养中生长发育良好。作为优选，所述的壮苗培养基的组分和含量为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。在该培养基下芽粗壮，繁育良好。作为优选，所述的生根培养基的组分和含量为：MS+NAA0.2mg/L+IBA0.2mg/L。在该培养基下，根系粗壮，须根众多，生根率为95％。由于不同植株对于培养条件要求不同，尤其是对于培养基的要求差别很大，其中一个环节的培养基主要成分或含量的改变就有可能导致繁育成功率的大大降低。因此，本专利技术通过长久的实验过程，并根据铁筷子的特有属性，研究了适合铁筷子快速繁育的多种培养基，在使用这些特殊研制的培养基基础上，结合本专利技术的培养条件，成功培育了铁筷子。本专利技术通过组织培养技术，年繁殖系数提高到1:20000，成本减低0.8-1.0元/株，铁筷子组培苗极大提高了繁殖速度和苗的整齐度，更好地保持了原有的母本性状。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。实施例1一种基于组织培养的快速繁育铁筷子的方法，包括以下步骤：(1)培养基的配制，包括组培各阶段培养基的组分和含量：1.1、芽诱导培养基：MS+BA3mg/L+NAA0.3mg/L；1.2、不定芽增殖培养基：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；1.3、壮苗培养基：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；1.4、生根培养基：MS+NAA0.2mg/L+IBA0.2mg/L；上述各种培养基的pH5.8，加入蔗糖30g/L，琼脂6g/L，培养温度为22℃，光照为2000Lx；(2)铁筷子的组织培养：2.1、无菌材料的获得铁筷子在春季3月挖取地上部分的小芽，用自来水冲洗1h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成1cm长，接种于芽诱导培养基上；2.2、芽的分化和增殖小芽接种于诱导培养基上30天后，小芽基部开始膨大，再培养25天可见明显的愈伤组织；继续培养30天，切下带小芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基上培养；2.3、不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽每丛只有2-3小芽可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单球后，放入壮苗培养基，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm；2.4、生根培养取1-2cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，25天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，35天后可以长至1-2cm，在该培养基下，根系粗壮，须根众多，生根率为95％。2.5、炼苗与移栽生根培养30天后，根系长至2-3cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化炼苗40天后，即移栽室外，给予肥水管理，移栽成活率为90％。实施例2一种基于组织培养的快速繁育铁筷子的方法，包括以下步骤：(1)培养基的配制，包括组培各阶段培养基的组分和含量：1.1、芽诱导培养基：MS+BA1mg/L+NAA0.1mg/L；1.2、不定芽增殖培养基：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；1.3、壮苗培养基：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1g/L；1.4、生根培养基：MS+NAA0.1mg/L+IBA0.1mg/L；上述各种培养基的pH5.8，加入蔗糖30g/L，琼脂6g/L，培养温度为21℃，光照为1900Lx；(2)铁筷子的组织培养：2.1、无菌材料的获得铁筷子在春季3月挖取地上部分的小本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于组织培养的快速繁育铁筷子的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)培养基的配制，包括组培各阶段培养基的组分和含量：1.1、芽诱导培养基：MS+BA 1‑5mg/L+NAA 0.1‑0.5mg/L；1.2、不定芽增殖培养基：MS+6‑BA 1.0‑3.0mg/L+NAA 0.1‑0.3mg/L；1.3、壮苗培养基：MS+6‑BA 0.5‑1.5mg/L+NAA 0.1‑0.2mg/L；1.4、生根培养基：MS+NAA 0.1‑0.3mg/L+IBA 0.1‑0.3mg/L；上述各种培养基的pH5.8，加入蔗糖30g/L，琼脂6g/L，培养温度为22±1℃，光照为1900‑2100Lx；(2)铁筷子的组织培养：2.1、无菌材料的获得铁筷子在春季3月挖取地上部分的小芽，用自来水冲洗1h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5‑6次，无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成1cm长，接种于芽诱导培养基上；2.2、芽的分化和增殖小芽接种于诱导培养基上30天后，小芽基部开始膨大，再培养25天可见明显的愈伤组织；继续培养30天，切下带小芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基上培养；2.3、不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽每丛只有2‑3小芽可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单球后，放入壮苗培养基，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2‑3cm；2.4、生根培养取1‑2cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，25天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，35天后可以长至1‑2cm；2.5、炼苗与移栽生根培养28‑32天后，根系长至2‑3cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化炼苗40天后，即移栽室外，给予肥水管理，移栽成活率为88％。...

【技术特征摘要】
1.一种基于组织培养的快速繁育铁筷子的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)培养基的配制，包括组培各阶段培养基的组分和含量：1.1、芽诱导培养基：MS+BA1-5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L；1.2、不定芽增殖培养基：MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L；1.3、壮苗培养基：MS+6-BA0.5-1.5mg/L+NAA0.1-0.2mg/L；1.4、生根培养基：MS+NAA0.1-0.3mg/L+IBA0.1-0.3mg/L；上述各种培养基的pH5.8，加入蔗糖30g/L，琼脂6g/L，培养温度为22±1℃，光照为1900-2100Lx；(2)铁筷子的组织培养：2.1、无菌材料的获得铁筷子在春季3月挖取地上部分的小芽，用自来水冲洗1h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成1cm长，接种于芽诱导培养基上；2.2、芽的分化和增殖小芽接种于诱导培养基上30天后，小芽基部开始膨大，再培养25天可见明显的愈伤组织；继续培养30天，切下带小芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基上培养；2.3、不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽每丛只有2-3小芽可以伸长，其余处于矮化状...

【专利技术属性】
技术研发人员：李霖，金梦怡，陈建华，黄建荣，庞玉华，
申请(专利权)人：上海上房园艺有限公司，上海上房园林植物研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31