一种新的多肽--组氨醇脱氢酶12.32和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－组氨醇脱氢酶１２．３２，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如肌痉挛、肌无力、消化性溃疡、慢性胃炎等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的组氨醇脱氢酶１２．３２的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——组氨醇脱氢酶12.32，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。组氨醇脱氢酶(L-组氨醇NAD+氧化还原酶，EC1.1.1.23)在微生物中能催化组氨酸生物合成的最后一步，即L-组氨醇的α-氨醇基四电子氧化成组氨酸。这种四电子脱氢酶非常特别，因为它能催化两种不同的氧化反应能将底物从醇氧化成醛，再从醛氧化成酸。该酶已发现45年了，也已知有大量同源酶的存在，但其作用机制不详。有人推测L-组氨醇脱氢酶与UDP-葡萄糖脱氢酶功能类似，后者在催化过程中利用了赖氨酸衍生的亚胺和半胱氨酸硫基半缩醛-硫酸酯。与此类似，L-组氨醇脱氢酶利用2mol的NAD+来氧化其底物，并且经过了一个醛类中间体的紧密结合或共价结合形式。而且两种酶都在与辅酶结合之前结合底物。由于在肝脏中乙醛脱氢酶和3-磷酸甘油脱氢酶在乙醛氧化中都利用了硫基半缩醛中间体，半胱氨酸可能是L-组氨醇脱氢酶两个氧化步骤的催化活性中心。利用该酶的L-组氨醇的结构类似物NBD-C1作为一个蛋白质修饰试剂，NBD-C1在L-组氨醇脱氢酶上可对单一半胱氨酸基团进行活性位点定向的修饰作用，显示Cys-116为该酶作用的活性位点，NBD-C1与其它配体一起竞争结合该位点。(Charles TimmisGrubmeyer，Biochemistry，1986，254778-4784)从甘蔗中分离出编码HDH的全长cDNA片段，它与已知的微生物基因有50％的序列一致。比较其开放阅读框架与蛋白质的N端序列后发现，HDH以酶原形式存在。成熟酶的N端缺失了31个氨基酸，这一段序列是明显的叶绿体信号肽，它富含丝氨酸和苏氨酸(32％)，Lys和Arg(19％)，这表明植物中的组氨酸生物合成是发生在叶绿体内。HDH成熟蛋白的序列与大肠杆菌具有49％的一致性，与酿酒酵母有51％的一致性，彼此间没有明显的结构差异，其中几个15aa长的区域严格保守。甘蓝的HDH蛋白序列143位有一Cys残基是结合组氨醇的，在功能上与沙门氏菌HDH中的Cys-116相一致。(Atsuko Nagai，et.al，Proc Natl.Acad.Sci.USA，1991，884133-4137)由于如上所述组氨醇脱氢酶12.32蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的组氨醇脱氢酶12.32蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新组氨醇脱氢酶12.32蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——组氨醇脱氢酶12.32以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码组氨醇脱氢酶12.32的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码组氨醇脱氢酶12.32的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产组氨醇脱氢酶12.32的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——组氨醇脱氢酶12.32的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——组氨醇脱氢酶12.32的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与组氨醇脱氢酶12.32异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中354-692位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1572位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制组氨醇脱氢酶12.32蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与组氨醇脱氢酶12.32蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于组氨醇脱氢酶12.32表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与组氨醇脱氢酶12.32结合时，一种可引起该蛋白质改变从而调节该蛋白质活性的分子。激动剂可以包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合组氨醇脱氢酶12.32的分子。“拮抗剂”或“抑制物”是指当与组氨醇脱氢酶12.32结合时，一种可封闭或调节组氨醇脱氢酶12.32的生物学活性或免疫学活性的分子。拮抗剂和抑制物可以包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合组氨醇脱氢酶12.32的分子。“调节”是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－组氨醇脱氢酶１２．３２，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]