【技术实现步骤摘要】
一种鲟鱼精蛋白及鲟鱼精蛋白多肽的制备方法
本专利技术涉及蛋白及蛋白多肽领域,具体涉及一种鲟鱼精蛋白及鲟鱼精蛋白多肽的制备方法。
技术介绍
鱼精蛋白是一种多聚阳离子肽,主要存在于各类动物成熟的精巢组织中,与DNA紧密结合在一起。鱼精蛋白具有较强的抑菌特性,在食品中主要用作防腐剂。与一般的化学合成防腐剂相比,鱼精蛋白具有许多优点,如安全性高、防腐性能好、热稳定性好等。而且,作为精氨酸含量丰富的蛋白类物质,鱼精蛋白具有很高的营养性和功能性,因此在食品应用研究范围广泛。鱼精蛋白也可与肝素的葡萄糖胺聚糖结合,是唯一与肝素形成拮抗作用的药物,可以快速有效地抵抗肝素或人工合成的抗凝血剂的抗凝作用,其在心脏直视手术和心导管介入治疗中有较大应用。鱼精蛋白多肽是鱼精蛋白的酶解产物,具有更小的分子量和异源性,可显著降低机体过敏风险,有效解决鱼精蛋白直接作用与机体时产生的过敏反应、免疫反应甚至休克的突发风险,使鱼精蛋白的应用更安全放心。而相比于鱼精蛋白,鱼精蛋白多肽具有更好的抑菌性,吸水持水性。通过辐照辅助酶解,得到更小分子量的天然活性蛋白肽类,具有高溶解性,高功能性等优点,有广阔的应用前景。目前,市场上的鱼精蛋白主要提取自鲱、鲑科鱼等海水鱼,而且得率较低,而我国这类海鱼资源缺乏。鲟鱼具有高营养价值,蛋白含量高,而鲟鱼养殖业产量大,废弃物精巢组织原料充足。鱼类精巢除作为养鱼饲料及一部分腌制食品利用外,其它用途很少,价值低。如果从中分离出鱼精蛋白,利用蛋白酶抑制剂提高其提取得率,并在适当的领域应用则有望提高其附加价值,同时减少资源浪费和环境污染。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对等 ...
【技术保护点】
一种鲟鱼精蛋白的制备方法,其特征在于:具体步骤如下:1)取除杂处理后的鲟鱼白切碎成浆状,加0.14mol/L NaCl,0.05mol/L NaEDTA和0.001mol/L PMSF的混合溶液,均质匀浆搅拌1~3min,于0℃搅拌20min,静置10min,0℃低温离心,弃去上清液,重复3次,得沉淀物;2)取步骤1所得沉淀物按体积比1:5~1:8加入浓度为0.8mol/L~1.2mol/L的硫酸溶液,温度25~65℃,提取15min~60min,在0℃低温离心10min,过滤,取滤液,滤渣再重复用硫酸提取2~6次,合并滤液;3)取步骤2)所得滤液用NaOH调节pH至7.0,透析除盐后用其体积三倍的95%冷乙醇沉淀,沉淀物分别用丙酮和乙醚各洗2次,真空冷冻干燥24h,得鲟鱼粗蛋白;所述真空冷冻干燥条件为温度‑50℃,压力10Pa;4)将步骤4)所得鲟鱼粗蛋白经过两步纯化,得鲟鱼精蛋白;所述两步纯化为Sephadex G‑50葡聚糖凝胶层析和CM Sepharose Fast Flow离子交换层析纯化;每步分离纯化前都加入0.5mol/L NaEDTA和0.1mol/L PMSF的混合溶 ...
【技术特征摘要】
1.一种鲟鱼精蛋白的制备方法,其特征在于:具体步骤如下:1)取除杂处理后的鲟鱼白切碎成浆状,加0.14mol/LNaCl,0.05mol/LNaEDTA和0.001mol/LPMSF的混合溶液,均质匀浆搅拌1~3min,于0℃搅拌20min,静置10min,0℃低温离心,弃去上清液,重复3次,得沉淀物;2)取步骤1所得沉淀物按体积比1:5~1:8加入浓度为0.8mol/L~1.2mol/L的硫酸溶液,温度25~65℃,提取15min~60min,在0℃低温离心10min,过滤,取滤液,滤渣再重复用硫酸提取2~6次,合并滤液;3)取步骤2)所得滤液用NaOH调节pH至7.0,透析除盐后用其体积三倍的95%冷乙醇沉淀,沉淀物分别用丙酮和乙醚各洗2次,真空冷冻干燥24h,得鲟鱼粗蛋白;所述真空冷冻干燥条件为温度-50℃,压力10Pa;4)将步骤4)所得鲟鱼粗蛋白经过两步纯化,得鲟鱼精蛋白;所述两步纯化为SephadexG-50葡聚糖凝胶层析和CMSepharoseFastFlow离子交换层析纯化;每步分离纯化前都加入0.5mol/LNaEDTA和0.1mol/LPMSF的混合溶液。2.一种鲟鱼精蛋白多肽的制备方法,其特征在于:具体步骤如下:1)取除杂处理后的鲟鱼白切碎成浆状,加0.14mol/LNaCl,0.05mol/LNaEDTA和0.001mol/LPMSF的混合溶液,均质匀浆搅拌1min,于0℃搅拌20min,静置10min,0℃低温离心,弃去上清液,重复3次,得沉淀物;2)取步骤1所得沉淀物按体积比1:6加入浓度为0.8mol/L~1.2mol/L的硫酸溶液,温度35℃,提取30min,在0℃低温离心10min,过滤,取滤液,滤渣再重复用硫酸提取4次,合并滤液;3)取步骤2)所得滤液用NaOH调节pH至7.0,透析除盐后用其体积三倍的95%冷乙醇沉淀,沉淀物分别用丙酮和乙醚各洗2次,真空冷冻干燥24h,得鲟鱼粗蛋白;所述真空冷冻干燥条件为温度-50℃,压力10Pa;4)将步骤4)所得鲟鱼粗蛋白经过两步纯化,得鲟鱼精蛋白;所述两步纯化为SephadexG-50葡聚糖凝胶层析和CMSepharoseFastFlow离子交换层析纯化;每步分离纯化前都加入0.5mol/LNaEDTA和0.1mol/LPMSF的混合溶液;5)将步骤4)所得鲟鱼精蛋白以体积比1:30~1:50加入pH为6~8的磷酸盐缓冲液匀浆,得鲟鱼精蛋白溶液;6)将步骤5)所得鲟鱼精蛋白溶液移入透明玻璃杯并向其中加入其体积的3%~8%木瓜蛋白酶,然后置于60Co辐照场中通过γ射线辐照,取出后在50~60℃水浴中加热酶解6~9h,得酶解液;所述60Co辐照场中通过γ射线辐照的辐照方法为:透明玻璃杯距地面高40cm,距离60Co辐照源1.4m,辐照剂量率为33Gy/min,辐照时间120min,辐照不均匀度小于1...
【专利技术属性】
技术研发人员:白婵,廖涛,熊光权,耿胜荣,饶丹华,鉏晓艳,张金木,李海蓝,李新,汪兰,吴文锦,
申请(专利权)人:湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所,
类型:发明
国别省市:湖北,42
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