一种多肽--果糖-1,6-二磷酸酶-16.61和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽——果糖－１，６－二磷酸酶－１６．６１，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的果糖－１，６－二磷酸酶－１６．６１的多核苷酸的用途。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
,6－二磷酸酶－16.61和编码这种多肽的多核苷酸的制作方法
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——果糖-1，6-二磷酸酶-16.61，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。
技术介绍
果糖-1，6-二磷酸酶-16.61(FBPase)(EC 3.1.3.11)是糖原异生的调控酶类，催化果糖-1，6-二磷酸水解产生果糖-6-磷酸。该过程存在于大多数生物的各种代谢途径。(Benkovic S.J.，DeMaine M.M.Adv.Enzymol.5345-82(1982).)景天庚酮糖-1，7-二磷酸酶(SBPase)(EC 3.1.3.37)存在于植物叶绿体和光能自养细菌中，在卡尔文戊糖磷酸还原循环反应中催化景天庚酮糖-1，7-二磷酸水解为景天庚酮糖-7-磷酸，该酶的结构和功能均与果糖-1，6-二磷酸酶-16.61相关。(Raines C.A.，Lloyd J.C.，Willingham N.M.，Potts S.，Dyer T.A.Eur.J.Biochem.2051053-1059(1992).)在哺乳动物的果糖-1，6-二磷酸酶-16.61中，一赖氨酸残基与该酶的催化机制密切相关，该残基周围区域的序列存在在各生物钟中高度保守，而在一些细菌中该赖氨酸活性位点被精氨酸所取代。上述特征性序列如下--L-x(1，2)---E-x(2)-P--(其中K/R使该酶活性位点残基)。该果糖-1，6-二磷酸酶-16.61的Cys128，Tyr113，Tyr244，Tyr264，Tyr215，Tyr331，Lys274，arg243，His253，His311残基的化学修饰与酶的活性有密切关联。(Raines C.A.，Lloyd J.C.，Willingham N.M.，Potts S.，Dyer T.A.Eur.J.Biochem.2051053-1059(1992).)1992年，Raines C.A.，Lloyd J.C.等研究发现果糖-1，6-二磷酸酶-16.61的活性由腺苷单磷酸(AMP)和果糖-2，6-二磷酸(Fru-2，6-P2)调控，其中AMP是通过变构来抑制酶活性，而果糖-2，6-二磷酸的调控机制有待进一步研究。该酶在中性PH环境中最具催化活性。本专利技术的多肽含有上述保守的特征性功能域，并且具有与果糖-1，6-二磷酸酶-16.61家族成员相似的生物学功能，因而被认为是果糖-1，6-二磷酸酶-16.61家族的新成员，催化果糖-1，6-二磷酸水解产生果糖-6-磷酸，与大多数生物的各种代谢途径密切相关，若发生变异或表达异常，则会影响生物体的一系列代谢活动，引起生理功能紊乱，导致各种疾病的发生。由于如上所述果糖-1，6-二磷酸酶-16.61蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的果糖-1，6-二磷酸酶-16.61蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新果糖-1，6-二磷酸酶-16.61蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——果糖-1，6-二磷酸酶-16.61以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码果糖-1，6-二磷酸酶-16.61的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码果糖-1，6-二磷酸酶-16.61的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产果糖-1，6-二磷酸酶-16.61的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——果糖-1，6-二磷酸酶-16.61的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——果糖-1，6-二磷酸酶-16.61的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与果糖-1，6-二磷酸酶-16.61异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有<210>2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有<210>2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体 (a)编码具有<210>2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有<210>1中55-510位的序列；和(b)具有<210>1中1-1231位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制果糖-1，6-二磷酸酶-16.61蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与果糖-1，6-二磷酸酶-16.61蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于果糖-1，6-二磷酸酶-16.61表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－果糖－１，６－二磷酸酶－１６．６１，其特征在于它包含有：〈２１０〉２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：复旦大学，上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]