制备卵囊的改进方法技术

本发明专利技术提供改进的制备卵囊的方法和组合物。根据本发明专利技术制备的卵囊用于制备疫苗。在优选实施方案中，本发明专利技术提供制备艾美虫卵囊的方法和组合物。根据本发明专利技术制备的含有艾美虫卵囊、孢子囊和／或子孢子的疫苗用于卵内或孵化后的鸟类抗球虫免疫。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供制备来源于原生动物的卵囊的方法和组合物；特别地，本专利技术提供制备艾美虫(Eimeria)卵囊的方法和组合物。本专利技术背景家禽球虫病是艾美虫属原生动物寄生虫所致的疾病。艾美虫类的卵囊普遍存在于环境并且在家禽垃圾中持续存活多个月。食入卵囊能以种特异性方式导致消化道多个部位的感染。这些生物体在消化道内的增殖超过数日，结果使其下一代卵囊排泄于粪便中。重复周期感染导致免疫，并且当家禽接受早期感染且家禽之间的剂量均一，经过几个周期接触后可以形成相当巩固的免疫力。相反，当禽类未以均一的方式接受感染，可能引起从未感染过的禽类受到突然、严重感染的情形，导致饮食转化能力以及体重增加的降低，以及较高的二次感染的危险。目前，家禽工业中用于控制球虫病的最常见方法不是疫苗接种，而是在食物中给予抗球虫药。接种率低常常是由于通过操作便利的饮食或饮水或通过孵化场喷洒接种的给药均一性不可靠，这些是传统的给药途径和时间。对改善孵化场给药期间的给药均一性的关注正在逐渐增加。近来，已建立的卵内接种技术适用于以活卵为基础的球虫疫苗给药(WO96/40234和WO96/40233；Pfizer，Inc.)。这种卵内给药途径提供了一种对仍在禽卵中的各个胚胎给予均一剂量的疫苗的便捷方法。卵内给予禽疫苗现在应用于美国每年生产的90亿只童子鸡中的约85％，以及百分比渐增的在美国之外每年生产210亿童子鸡(例见，美国专利号4458630)。因此，活的、卵内给药的球虫疫苗的潜在市场显著大于孵化后给予球虫疫苗的当今市场。采用于球虫活疫苗的卵囊来源于原先严重富含污染微生物的鸡粪。通常，管理单位要求卵内给药疫苗应当表明基本不存在污染微生物。为最彻底地保证终产品中的生物负荷水平最小，在卵囊制备过程的各步骤中采用有效控制微生物污染水平的组合物和方法是有益的，包括收集和孢子形成步骤以及灭菌步骤。目前疫苗制备中制备卵囊的方法的缺陷在于经常使用对设备有害或腐蚀的材料。因此，本领域内需要一种改进的由原生动物制备卵囊的方法，尤其是用于制备疫苗。本专利技术概述本专利技术涉及改进的制备原生动物卵囊(例如，艾美虫)的方法和组合物，例如用于制备疫苗。尤其在家禽疫苗方面，本专利技术适合于制备孵化后或卵内使用的疫苗。同样，该疫苗可以用于童子鸡、蛋鸡、种鸡、火鸡、小马和/或家禽产业。相应地，第一个方面，本专利技术提供一种用于制备卵囊的组合物，其包括过氧化合物和有机酸，所述组合物具酸性pH值。该组合物可以用于原生动物卵囊的收集、孢子形成和/或灭菌。由此，另一方面，本专利技术提供一种收集动物粪便中的原生动物卵囊的方法，其包括步骤(a)提供原生动物感染的动物，其中动物在其粪便中排泄源自原生动物的卵囊，和(b)使来源于感染动物的含卵囊的粪便与包括过氧化合物和有机酸的组合物接触。在特定的上述实施方案中，从组合物中撤除或者过氧化合物或者有机酸，特别是当被用作收集介质的时候。另一方面，本专利技术提供一种使原生动物卵囊形成孢子的方法，其包括步骤(a)提供一种包括原生动物卵囊的组合物，和(b)在适合孢子形成的条件下使卵囊在包括过氧化合物和有机酸的组合物中持续一定时间形成孢子。再一方面，本专利技术提供一种使原生动物卵囊消毒的方法，其包括(a)提供一种包括原生动物卵囊的制品，和(b)在足以达到对所述制品的需要消毒水平的条件下在包括过氧化合物和有机酸的组合物中使卵囊消毒一定时间。又一方面，本专利技术提供一种用于纯化原生动物卵囊的浮选介质，其包括高密度、非离子溶液和聚阳离子。在另一种实施方案中，本专利技术提供一种用于纯化原生动物卵囊的浮选介质，其包括高密度、非离子溶液和油。本专利技术也提供一种通过浮选而纯化原生动物卵囊的方法，其步骤包括(a)在上述浮选介质和大量原生动物卵囊之间形成悬浮液，(b)让悬浮液分层，和(c)从分层的悬浮液中收获原生动物卵囊。本专利技术上述方面的一种特定实施方案中，原生动物包括艾美虫属的物种并且动物对象为禽类。再一方面，本专利技术提供一种由禽类制备原生动物卵囊的方法，其步骤包括(a)用原生动物感染禽类足够时间，使原生动物卵囊在感染禽类对象粪便中排出，(b)从感染禽类对象收集含卵囊的粪便，以及(c)在所述收集步骤之前至少约1天以及在所述收集步骤的至少部分阶段以平均大粒径的食物喂饲感染的禽类对象。在特定实施方案中，原生动物包括艾美虫属物种。在以下说明书中更加详细地阐述本专利技术的上述和其它方面。本专利技术详述现参照本专利技术之优选实施方案描述本专利技术。然而，本专利技术可以以不同的形式实现并且不表明受本说明书所提出的实施方案限制。此外，提供这些实施方案是使本公开充分彻底，并向本领域内技术人员完整表达本专利技术之范围。除另有说明外，本专利技术中所采用的所有技术和科学术语与本专利技术所属领域内的一般技术人员的常规理解具有相同的意思。在本专利技术说明书中所采用的术语的目的仅仅是描述特定实施方案而无意于限制本专利技术。本说明书提及的全部出版物、专利申请、专利、以及其它参考文献均以其全部内容通过引用结合到本说明书中。本专利技术说明书中所采用的术语的目的是仅仅是描述特定实施方案而无意于限制本专利技术。本专利技术说明书及所附权利要求中使用的单数形式“一”、“一种”和“该(所述)”意思也包括复数形式，除非正文另有明确说明。本专利技术适用于药用和兽用。术语“动物”和“动物对象”包括但不限于哺乳动物和禽类对象，优选是禽类对象。合适的哺乳动物对象包括但不限于人、猿、猪、牛、山羊、马、猫、绵羊、犬、小鼠和兔类(lagamorph)对象。本说明书所用术语“禽类”和“禽类对象”或“鸟类”和“鸟类对象”包括雄性和雌性任何禽类或鸟类，但主要是包括目的是获得禽卵、禽肉或作为宠物的商业饲养的家禽。因此，术语“禽类”和“禽类对象”或“鸟类”和“鸟类对象”优选包括鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑、雉鸡、长尾鹦鹉、鹦鹉、美冠鹦鹉、澳洲鹦鹉、鸵鸟、鸸鹋等。鸡和火鸡为优选的禽类或鸟类对象，以鸡为最优选。本专利技术总体涉及制备原生动物卵囊的方法和组合物。已发现这些方法和组合物可用作例如制备疫苗的方法。许多原生动物具有被称作为“卵囊”的生活阶段。本专利技术应用于从任何原生动物物种制备卵囊，包括但不限于艾美虫属、隐孢子虫属(Cryptosporidium)、弓形体属、疟原虫和等孢子球虫属。在本专利技术的实施方案中，本专利技术用于制备艾美虫卵囊。术语“原生动物”、“卵囊”、“孢子囊”、“子孢子”和“裂殖子”具有它们在本领域内公认的意思。除另有说明外，这些术语的意思指活的原生动物、卵囊、孢子囊、子孢子和裂殖子，尽管本领域内技术人员能够理解可以采用灭活的(或减毒的)原生动物、卵囊、孢子囊、子孢子和裂殖子制备疫苗。术语“艾美虫”是指艾美虫属的一个或一个以上的物种。这些艾美虫物种包括那些存在于鸡的种类，包括禽艾美虫(E.tenella)，堆形艾美虫(E.acervulina)，巨型艾美虫(E.maxiam)，尼氏艾美虫(E.necatrix，)和缓艾美虫(E.mitis)，塞前艾美虫(E.praecox)，E.mivati和波氏艾美虫(E.brunetti)，以及那些存在于火鸡的种类，其包括E.meleagrimitis，E.adenoeides，E. gallopavonis，E.dispersa，E.innocua和E.subrotunda。术语“艾美本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于制备卵囊的组合物，其包括过氧化合物和有机酸，所述组合物具有酸性ｐＨ值。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：JE哈钦斯，JK蒂切科斯基，
申请(专利权)人：恩布里克斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]