一种分离出的茶树液泡致电的质子泵三磷酸腺苷酶表达序列标签的序列，其特征在于：表达序列标签具有ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１所示的序列；所示序列的互补序列或同源序列；所示序列中８～１００个连续核苷酸为探针的序列或其互补序列。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种茶树液泡致电的质子泵三磷酸腺苷酶表达序列标签及其生物芯片。液泡致电的质子泵三磷酸腺苷酶(ATP)酶是液泡膜上的插入蛋白(Integral protein)，它水解ATP的部分在液泡膜的细胞质一侧，ATP水解产生的能量，把细胞质中的氢离子“泵”到膜外，调节液泡内的氢离子梯度，跨膜的氢离子梯度及膜电位的增加，产生了跨膜的离子能差，就是离子进入细胞的驱动力——质子动力。氢离子对有生命细胞维持内在环境的平衡有极其重要的作用，有它形成的跨膜质子推动力，可用于ATP的形成，驱使次级离子或溶质的传递和控制某些与生长发育有关的过程。
技术介绍
生物体基因组中可转录表达的序列(即基因)仅占总序列的2％左右，对这部分序列进行测定，将直接导致新基因的发现，并获取基因组中与产业化关系最为密切的信息。20世纪80年代，高通量的自动测序的出现，使从质粒互补脱氧核糖核酸(Complementary DNA，简称cDNA，下同)文库随机选取许多cDNA克隆和测定来自非载体两端的几百个碱基(Base Pair，简称bp，下同)的脱氧核糖核酸(简称DNA，下同)序列成为可能。这些短的DNA序列叫作“表达序列标签”(Expressed Sequence Tags，简称ESTs)。表达序列标签的概念最早是由Adams等在1991年提出来的(Science，252(5013)1651-1656)。随后Venter等(1991)(Science，252(5013)1651-1656)创立了大规模表达序列标签技术，其基本特征就是从以质粒为载体，构建完成的目的组织cDNA文库中，随机选择许多cDNA克隆，利用质粒上携带的通用引物对cDNA两端进行一轮脱氧核糖核酸序列测定，所获得的来自3′端或5′端的几百个碱基的非载体短脱氧核糖核酸序列。1992年Sikela和Matsubara(Sikela，et al.Nucleic Acids Research 19，1837-1843；Matsubara，et al.Nature Genetics，2，173-179)针对获得大量信使核糖核酸(mRNA)序列的迫切需要，提出大规模cDNA测序的研究战略。简而言之，表达序列标签是来自表达基因片段3′端或5′端的短脱氧核糖核酸序列(通常为300-500bp)，代表一个特定组织或发育阶段的表达基因部分转录片段。表达序列标签技术对于基因组研究缺乏的物种，如茶树，具有特别重要的意义和价值。根据表达标签序列提供的序列信息设计合成基因特异引物(Gene specific primer，GSP)在使用Oligo(dT)对mRNA进行反转录的同时加上锚定引物(Anchored primer)，然后在总RNA中，采用cDNA末端快速扩增(Rapid amplification cDNA ends)技术，获得目的基因的全长序列。也可以用该标签序列提供的信息设计引物，合成探针对cDNA文库进行筛选，挑取最长的阳性克隆进行测序，以期获得目的基因。邢桂春等(中国生物化学与分子生物学报，2001，17(2)203-208)用电子延伸结合cDNA末端快速扩增技术克隆出了肿瘤相关MAGE基因家族的一个新基因MAGE-D1；罗瑛等(生物化学与生物物理进展，2001，28(2)188-191)据表达序列标签序列设计巢式PCR引物，成功分离了RIG1基因的全序列；Qian J等(Acta Biochem Biophys Scnica，2001，33(2)147-152)用一个与泛蛋白途径相关的表达序列标签序列，结合RACE-PCR技术分离了UBAP1基因全长。随着生物技术和生命科学发展的需要以及表达序列标签固有的特点，近几年，人们专利技术了生物芯片。生物芯片(Biochips)的实质就是在面积不大的基片上有序地点阵排列了一系列固定于一定位置地可寻址的生物识别分子(Lipshutz，RJ et al.Bio Techniques 19(1995)，442-447；Fodor，SP et al.Nature 364(1993)，555-556；Fodor，SP et al.Science 251(1991)，767-773；Pease，AC et al.Proceedings of National Academy of Science，USA 91(1994)，5022-5026)。由于最初的生物芯片主要是用于DNA序列测定、基因表达谱鉴定(Lockhart，DJ et al.Nature Biotechnology14(1996)，1675-1680)、基因突变体的检测和分析(Feriotto，G et al.，Human Mutation 13(1999)，390-400；Hacia，JG et al.Nature Genetics 21(suppl 1)(1999)，42-47；Hacia，JG et al.NatureGenetics 22(1999)，164-167；Nilsson，P et al.Bio Techniques 26(1999)，308-316)，所以又称为DNA芯片或生物芯片。目前，这一技术已扩展至免疫反应、受体结合等非核酸领域，因此生物芯片已超出了原来的范围。如今生物芯片主要包括cDNA微阵列、寡核苷酸微阵列、动电微阵列、蛋白质芯片和免疫芯片等，还出现了组织芯片、细胞芯片、多肽芯片、质谱芯片和电芯片等新的品种和技术。1995年10月P.Brown和他的同事(Bio Techniques，19(1995)，442-447)提出了cDNA微阵列技术，M.Schena(Science 270(1995)，467-470)和D.Shalon(Genome Research 6(1996)，639-645)等首次制造了cDNA阵列，随后这项技术得到了飞速的发展。运用生物芯片技术，将获得的芯片运用杂交技术和扫描技术对生物芯片进行芯片处理、有效数据提取、分析和报告，可获得相应的基因表达谱(Gene expression profiling)。目前DNA芯片因具有强有力性、灵活性、敏感性和相对简单等特点而被应用在许多领域，如DNA序列测定、基因多态性检测(Wang，et al.Science 280(1998)，1077-1082；Nalushka，et al.Nature Genetics 22(1999)，239-247)、新基因的发现、疫苗和药物研究、植物的抗逆性研究(Schenk，PM et al.Proceedingsof National Academy of Science，USA，97(2000)，11655-11660)、有机体的发育、调节细胞功能的基因的协调性研究、检测不同发育时期不同组织中基因的波动性活动等。分析基因组规模化的基因表达数据，将最终导致对细胞分化的整体性观察，涉及细胞增殖、细胞死亡、能量代谢、胞间和胞内信号传导、免疫反应的产生、细胞迁移的基因组分子图谱等。表达序列标签的生物芯片用于生物功能的研究和检测平台。生物包括动物、植物以及它们的器官、植物的种子、动植物细胞和它们的产物；所说的生物功能的研究包括本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈亮，赵丽萍，高其康，
申请(专利权)人：中国农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：
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